【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物制品保護，具體涉及一種無包膜病毒保護劑及其制備方法與應用。
技術介紹
1、病毒是由核酸和蛋白質或只有蛋白質組成的一種存在生命活性的物質形式。其內部主要含有核酸分子(dna或rna)和一些毒力酶，外部包裹一層蛋白或脂蛋白的防御性外殼。殼體蛋白是構成病毒外殼的主要蛋白質，殼體蛋白的最基本的單位為：一條或多條多肽鏈折疊形成具有一定構象的蛋白質亞基。
2、病毒可以利用宿主細胞系統進行復制微小、無完整細胞結構的亞顯微粒子。病毒不具細胞結構，無法獨立生長和復制,但它可以感染所有的具有細胞的生命體,具有遺傳、復制等生命特征。有些病毒有囊膜和刺突，如流感病毒。病毒基因同其他生物的基因一樣，也可以發生突變和重組，因此也是可以演化的。
3、根據病毒本身結構的不同，可分為無包膜病毒和有包膜病毒兩大類。無包膜病毒的殼體蛋白決定了病毒的宿主嗜性和表面的抗原表位，同時參與病毒的吸附、進入宿主細胞。無包膜病毒主要通過宿主細胞的內吞作用進入，這樣的感染方式使病毒的潛伏期延長，對宿主細胞的破壞力會更大。為了研究或利用無包膜病毒，病毒的有效、長時間的保存具有極大的意義；而無包膜病毒其殼體蛋白易于降解，致使無包膜病毒易于失活，無法有效長時間保存。目前，病毒樣本采集完后需放入病毒保存液中進行保存，再運送至實驗室對樣本進行各種處理和檢測；而病毒本身是一種結構簡單的微生物，必須寄生在活細胞內，病毒保存液需要保護病毒完整性，降低病毒降解率，否則易造成檢測假陰性；普通的基礎保存液，雖可以保存細胞從而保護病毒完整性，但無法長期保存，影響
技術實現思路
1、針對現有技術存在的不足，本專利技術提供一種無包膜病毒保護劑及其制備方法與應用。本專利技術保護劑原料易得，制備方法簡單、易于實現，適于工業化生產。本專利技術無包膜病毒保護劑能夠保護病毒殼體蛋白免于降解，較傳統的蛋白類和糖類保護劑可大大延長包膜病毒的存活時間，能夠實現有效、長時間的保存包膜病毒，并保持病毒活性。
2、本專利技術的技術方案如下：
3、一種無包膜病毒保護劑，包括以下質量份數的組分組成：
4、硫酸銨0.5～2份、蛋白穩定劑1～5份、蛋白酶抑制劑0.001～0.005份、甘露醇0.5～1份、牛血清白蛋白0.5～2份、蔗糖1～8份、生理鹽水100份。
5、根據本專利技術優選的，所述無包膜病毒保護劑包括以下質量份數的組分組成：
6、硫酸銨0.5～1.5份、蛋白穩定劑1～3份、蛋白酶抑制劑0.001～0.004份、甘露醇0.5～0.8份、牛血清白蛋白0.5～1.5份、蔗糖1～7.5份、生理鹽水100份。
7、優選的，所述無包膜病毒保護劑包括以下質量份數的組分組成：
8、硫酸銨1.5份、蛋白穩定劑3份、蛋白酶抑制劑0.003份、甘露醇0.8份、牛血清白蛋白1.5份、蔗糖7.5份、生理鹽水100份。
9、根據本專利技術優選的，蛋白穩定劑為海藻糖和乳糖的組合，海藻糖和乳糖的質量比為1:1。
10、根據本專利技術優選的，蛋白酶抑制劑為抑肽酶。
11、上述無包膜病毒保護劑的制備方法，包括步驟：將硫酸銨加入生理鹽水中，高速剪切；加入蛋白穩定劑、蛋白酶抑制劑、甘露醇，經均質得到均質乳劑；然后加入牛血清白蛋白、蔗糖，充分混合分散均勻，過濾除菌，即得無包膜病毒保護劑。
12、根據本專利技術優選的，高速剪切速率為10000rpm～30000rpm；高速剪切時間為5-10min。
13、根據本專利技術優選的，均質為高壓均質，壓力為600-650bar，高壓均質時間為5-10min。
14、根據本專利技術優選的，過濾所用濾膜的孔徑為0.22μm。
15、上述無包膜病毒保護劑在無包膜病毒保存中的應用。
16、根據本專利技術優選的，無包膜病毒保護劑的體積用量為無包膜病毒細胞培養液體積的0.5-5％。
17、本專利技術的技術特點及有益效果如下：
18、1、本專利技術提供了硫酸銨在無包膜病毒保護劑方面的一種新用途，利用硫酸銨與蛋白質結合后對蛋白質分解的拮抗作用，保護無包膜病毒殼體蛋白免于降解，較傳統的單獨蛋白類和糖類保護劑均可大大延長其存活時間，能夠實現有效、長時間的保存包膜病毒，并保持病毒活性。
19、2、本專利技術保護劑原料易得，制備方法簡單、易于實現，適于工業化生產。
20、3、本專利技術原料組成作為一個整體，特定種類的原料結合特定配比，共同作用才能實現本專利技術優異效果。如變化銨鹽的種類或者使用其它鹽，變化硫酸銨的用量，省略或者替換某種組分(如蛋白穩定劑、蛋白酶抑制劑、甘露醇、牛血清白蛋白、蔗糖)，變化原料之間的配比等均實現不了本專利技術優異效果。
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1.一種無包膜病毒保護劑，其特征在于，包括以下質量份數的組分組成：
2.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，所述無包膜病毒保護劑包括以下質量份數的組分組成：
3.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，蛋白穩定劑為海藻糖和乳糖的組合，海藻糖和乳糖的質量比為1:1。
4.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，蛋白酶抑制劑為抑肽酶。
5.如權利要求1-4任意一項所述無包膜病毒保護劑的制備方法，包括步驟：將硫酸銨加入生理鹽水中，高速剪切；加入蛋白穩定劑、蛋白酶抑制劑、甘露醇，經均質得到均質乳劑；然后加入牛血清白蛋白、蔗糖，充分混合分散均勻，過濾除菌，即得無包膜病毒保護劑。
6.根據權利要求5所述無包膜病毒保護劑的制備方法，其特征在于，高速剪切速率為10000rpm～30000rpm；高速剪切時間為5-10min。
7.根據權利要求5所述無包膜病毒保護劑的制備方法，其特征在于，均質為高壓均質，壓力為600-650bar，高壓均質時間為5-10min。
8.根據權利要求5所述無
9.如權利要求1-4任意一項所述無包膜病毒保護劑在無包膜病毒保存中的應用。
10.根據權利要求9所述無包膜病毒保護劑在無包膜病毒保存中的應用，其特征在于，無包膜病毒保護劑的體積用量為無包膜病毒細胞培養液體積的0.5-5％。
...【技術特征摘要】
1.一種無包膜病毒保護劑，其特征在于，包括以下質量份數的組分組成：
2.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，所述無包膜病毒保護劑包括以下質量份數的組分組成：
3.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，蛋白穩定劑為海藻糖和乳糖的組合，海藻糖和乳糖的質量比為1:1。
4.根據權利要求1所述無包膜病毒保護劑，其特征在于，蛋白酶抑制劑為抑肽酶。
5.如權利要求1-4任意一項所述無包膜病毒保護劑的制備方法，包括步驟：將硫酸銨加入生理鹽水中，高速剪切；加入蛋白穩定劑、蛋白酶抑制劑、甘露醇，經均質得到均質乳劑；然后加入牛血清白蛋白、蔗糖，充分混合分散均勻，過濾除菌，即得無包膜病毒保護劑。
...【專利技術屬性】
技術研發人員：張忠法，李強，杜文軍，
申請(專利權)人：山東省公共衛生臨床中心，
類型：發明
國別省市：
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