【技術實現步驟摘要】
本申請涉及分子生物學，特別是涉及一種用于家族性高膽固醇血癥相關基因檢測的文庫構建方法、核酸產品及試劑盒。
技術介紹
1、家族性高膽固醇血癥(familial?hypercholesterolemia，fh)是一類常染色體顯性遺傳的脂質代謝疾病，其病因是由參與低密度脂蛋白(ldl)代謝的基因發生突變引起的，通常以肌腱黃色素瘤、顯著升高的低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)以及早發的冠狀動脈疾病(cad)為特征。fh患者基因突變包括雜合子(heterozygote?familialhypercholesterolemia，hefh)、純合子(homozygote?familial?hypercholesterolemia，hofh)、復合雜合子和雙重雜合子4種類型，流行病學研究表明，hefh和hofh類型的基因突變較常見，發病率分別為1/500和1/100萬。
2、fh患者的治療是一個終生的過程，早期進行有效干預和治療可減少ldl-c產生的副作用，患冠心病的風險接近于常人。因此，fh患者早干預早治療刻不容緩。鑒于潛在fh患者比例較大，而疑似fh患者的遺傳確證率較低，故而，通過對fh家系進行系統的追蹤和級聯篩查，是最有效和經濟的fh篩查方式，具有重要價值。同時，盡早開展級聯篩查，早期診斷和早期治療也是改善fh患者臨床預后的重要措施。
3、目前，應用家族性高膽固醇血癥檢測方法主要為基于液相雜交捕獲的全外顯子測序以及多重pcr檢測panel，其中液相捕獲是以探針捕獲建庫與二代測序結合的方法進行檢測，但該方法存在實驗操作
技術實現思路
1、基于此，本申請提供了一種用于家族性高膽固醇血癥相關基因檢測的文庫構建方法、核酸產品及試劑盒，可用于同時檢測單基因與多基因家族性高膽固醇血癥，且具有高靈敏度、高通量、低成本。
2、根據本申請第一方面，提供了一種用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品，包括用于擴增ldlr基因的長鏈pcr引物、用于擴增apob基因的長鏈pcr引物、用于擴增pcsk9基因的長鏈pcr引物、用于擴增ldlrap1基因的長鏈pcr引物、用于擴增apoe基因的引物和用于擴增slco1b1基因的引物中的至少一種。
3、在其中一個實施例中，所述用于擴增ldlr基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seqid?no:1～8所示，所述用于擴增apob基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:20～27所示，所述用于擴增pcsk9基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:35～38所示，所述用于擴增ldlrap1基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:43～46所示，所述用于擴增apoe基因的引物的核苷酸序列如seq?id?no:47～48所示，所述用于擴增slco1b1基因的引物的核苷酸序列如seq?id?no:49～52所示。
4、本申請的第二方面提供了上述的核酸產品在制備家族性高膽固醇血癥的檢測試劑盒中的應用。
5、本申請的第三方面提供了一種用于檢測家族性高膽固醇血癥的試劑盒，所述試劑盒包括上述的核酸產品。
6、在其中一個實施例中，所述試劑盒還包括pcr反應試劑。
7、在其中一個實施例中，所述pcr反應試劑包括pcr緩沖液、dna聚合酶、鎂離子和dntps中的一種或多種。
8、在其中一個實施例中，所述試劑盒還包括dna提取試劑。
9、本申請的第四方面提供了一種用于家族性高膽固醇血癥相關基因檢測的文庫構建方法，包括以下步驟：
10、提取待測生物樣本的基因組dna；
11、以所述基因組dna為模板，采用上述的核酸產品進行pcr擴增，得到第一擴增產物；
12、以所述第一擴增產物為模板，進行第二pcr擴增，制得第二擴增產物；以及
13、根據所述第二擴增產物構建所述用于檢測家族性高膽固醇癥相關基因檢測的文庫。
14、在其中一個實施例中，所述第二pcr擴增所用的引物包括通用引物和特異性引物中的至少一種。
15、在其中一個實施例中，制得第二擴增產物后，對所述第二擴增產物進行純化，取純化后的產物進行質檢，取質檢通過的產物構建所述家族性高膽固醇癥相關基因的基因文庫。
16、本申請同時對家族性高膽固醇血癥4個致病基因：ldlr基因，apob基因，pcsk9基因，ldlrap1基因以及用藥指導基因slco1b1基因和apoe基因進行捕獲建庫。本申請用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品可以和ldlr基因、apob基因、pcsk9基因、ldlrap1基因、slco1b1基因和apoe基因靶核酸序列更特異性、更靈敏、更準確的結合，很好的解決了高gc區域富集的問題。
17、利用pcr反應在待測dna片段兩端加上接頭的方法，采用兩輪pcr反應成功構建家族性高膽固醇血癥相關基因檢測的文庫，具有文庫構建周期短，比對率高，均一性好，重復性好，操作簡便等優點，可以為臨床醫生綜合評估受檢者的患病風險、定制個性化醫療和生活干預措施，以期顯著降低家族性高膽固醇血癥的風險提供指導。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品，其特征在于，包括用于擴增LDLR基因的長鏈PCR引物、用于擴增APOB基因的長鏈PCR引物、用于擴增PCSK9基因的長鏈PCR引物、用于擴增LDLRAP1基因的長鏈PCR引物、用于擴增APOE基因的引物和用于擴增SLCO1B1基因的引物中的至少一種。
2.根據權利要求1所述的用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品，其特征在于，所述用于擴增LDLR基因的長鏈PCR引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1～8所示，所述用于擴增APOB基因的長鏈PCR引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:20～27所示，所述用于擴增PCSK9基因的長鏈PCR引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:35～38所示，所述用于擴增LDLRAP1基因的長鏈PCR引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:43～46所示，所述用于擴增APOE基因的引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:47～48所示，所述用于擴增SLCO1B1基因的引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:49～52所示。
3.權利要求1或2所述的核酸產品在制備家族
4.一種用于檢測家族性高膽固醇血癥的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1～2任一項所述的核酸產品。
5.根據權利要求4所述的用于檢測家族性高膽固醇血癥的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR反應試劑。
6.根據權利要求5所述的用于檢測家族性高膽固醇血癥的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應試劑包括PCR緩沖液、DNA聚合酶、鎂離子和dNTPs中的一種或多種。
7.根據權利要求4～6任一項所述的用于檢測家族性高膽固醇血癥的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括DNA提取試劑。
8.一種用于家族性高膽固醇血癥相關基因檢測的文庫構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
9.根據權利要求8所述的文庫構建方法，其特征在于，所述第二PCR擴增所用的引物包括通用引物和特異性引物中的至少一種。
10.根據權利要求8～9任一項所述的文庫構建方法，其特征在于，制得第二擴增產物后，對所述第二擴增產物進行純化，取純化后的產物進行質檢，取質檢通過的產物構建所述家族性高膽固醇癥相關基因的基因文庫。
...【技術特征摘要】
1.一種用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品，其特征在于，包括用于擴增ldlr基因的長鏈pcr引物、用于擴增apob基因的長鏈pcr引物、用于擴增pcsk9基因的長鏈pcr引物、用于擴增ldlrap1基因的長鏈pcr引物、用于擴增apoe基因的引物和用于擴增slco1b1基因的引物中的至少一種。
2.根據權利要求1所述的用于檢測家族性高膽固醇血癥相關基因突變的核酸產品，其特征在于，所述用于擴增ldlr基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:1～8所示，所述用于擴增apob基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:20～27所示，所述用于擴增pcsk9基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:35～38所示，所述用于擴增ldlrap1基因的長鏈pcr引物的核苷酸序列如seq?id?no:43～46所示，所述用于擴增apoe基因的引物的核苷酸序列如seq?id?no:47～48所示，所述用于擴增slco1b1基因的引物的核苷酸序列如seq?id?no:49～52所示。
3.權利要求1或2所述的核酸產品在制備家族性高膽固...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張向東，趙亞涵，胡琴，楊祖，曾燕華，藺超，
申請(專利權)人：蘇州貝康醫學檢驗實驗室有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。