【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及電化學生物傳感器領域，具體涉及基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建方法、構建結構及應用。
技術介紹
1、抗體是機體免疫系統產生的糖蛋白，能夠對抗病原體和外來物侵襲，與自身免疫性疾病發病機制密切相關。抗體含量的變化可以作為診斷和治療系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎等疾病的指標。目前，檢測抗體的技術通常涉及抗體抗原的結合，如蛋白質印跡法、放射免疫分析和酶聯免疫分析。雖然這些方法可以實現抗體的檢測，但無法克服天然抗原需要引入多種外源試劑和容易變性等問題，且實驗操作較為復雜耗時，限制了這些方法的實際應用性。因此，構建簡便、靈敏的傳感器用于檢測抗體是臨床診斷和醫學研究的迫切需求。
2、研究表明，利用dna修飾的小分子抗原決定簇識別和檢測抗體能夠改善傳統方法的局限性。這些方法通常在電極上使用修飾有電活性物質標記的信號探針，在沒有目標抗體的情況下，信號探針與電極表面發生碰撞，產生較強的電流信號。當信號探針上的抗原決定簇與目標抗體結合后，空間位阻會降低探針碰撞的效率，抑制電流響應信號。盡管這些方法取得了一定的進展，但它們仍存在背景信號高的問題，使得靈敏度的提高受到限制。另外，利用化學修飾的操作來事先標記電化學信號，增加了實驗成本和操作的復雜性。針對這些問題，本專利技術通過采用小分子抗原決定簇修飾的dna探針，進行目標抗體的特異性識別，并設計原子轉移自由基聚合反應調控電化學信號的生長，實現抗體的高效、靈敏檢測。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題
2、為解決上述技術問題，本專利技術的技術方案為：基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其創新點在于：所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器包括以下步驟：
3、步驟s1：將固定探針ip修飾到金電極aue表面，并用巰基己醇mch進行封閉得到mch/ip/aue；
4、其中，所述ip的序列為5’-sh-(ch2)6-tttttttttttt-n3-3’；
5、步驟s2：將基底探針sp與輔助探針amp、封閉探針bp進行雜交得到雙鏈sp/amp-bp，進一步將該雙鏈修飾到磁珠mb表面，得到sp/amp-bp/mb；
6、其中，所述sp的序列為5’-agaatgtagagttacgagcaaataaggggtaatctagtgagcattttttt-biotin-3’；所述amp的序列為5’-gactgactagcatgctcactagattac-3’；所述bp的序列為5’-cccttatttgctcgtaa?ct-3’；
7、步驟s3：利用溶劑熱法制備氧化銅(cuo)納米顆粒，將置換探針dp修飾到cuo表面，得到dp-cuo復合物；
8、其中，所述dp的序列為5’-tctctctctctctctctgctcactagattaccccttatttgctcgtaact-3’；
9、步驟s4：將不同濃度的地高辛抗體與識別探針rp1、rp2、sp/amp-bp/mb、dp-cuo混合反應，隨后加入溴化氫hbr溶解cuo，轉移至mch/ip/aue表面，并借助2-溴異丁酸-3-丁炔酯bbrib和抗壞血酸aa進行點擊化學反應，將bbrib連接到電極表面；
10、其中，所述rp1的序列為5’-dig-ttttttatctagtgagcatttctacatt?ct-3’；所述rp2的序列為5’-tatttgctcgtaactttttgctagtcagtct?ttttt-dig-3’；
11、步驟s5：將步驟s4反應后的電極置于聚合反應的基底溶液中，在恒定的電壓下進行原子轉移自由基聚合反應；
12、優選的，所述步驟s1中制備傳感界面的操作為，首先將固定探針ip與三(2-羧乙基)膦反應1小時，滴加至電極表面避光反應10小時，沖洗過后再將巰基己醇mch滴加到電極上封閉2小時，即得到mch/ip/aue。
13、優選的，所述步驟s2的實驗操作為，將基底探針sp與輔助探針amp、封閉探針bp混合，置于95℃加熱10分鐘，接著以1℃/分鐘的速度降溫至25℃，得到雙鏈sp/amp-bp，隨后將其與鏈霉親和素修飾的磁珠mb混合置于室溫下攪拌120分鐘，離心后置于牛血清蛋白中進行封閉，得到sp/amp-bp/mb。
14、優選的，所述步驟s3的實驗操作為，用有機溶劑(如，乙醇)溶解二價銅鹽(如，乙酸銅)，轉移至聚四氟乙烯反應釜中置于180℃高溫下反應1小時，隨后進行離心烘干，接著與dp鏈室溫下混合反應2小時，從而得到dp-cuo。
15、優選的，所述步驟s4的實驗操作為，將等摩爾比例的識別探針rp1、rp2、sp/amp-bp/mb、dp-cuo與不同濃度的地高辛抗體混合，室溫下反應100分鐘，接著加入溴化氫hbr溶解cuo，隨后轉移至mch/ip/aue表面，并加入2-溴異丁酸-3-丁炔酯bbrib和抗壞血酸反應50分鐘，通過點擊化學反應將bbrib連接到電極表面。
16、優選的，所述步驟s5的操作為，將步驟s4反應后的電極置于含有銅/三(2-二甲氨基乙基)胺cuii/me6tren、二茂鐵甲醇異丁烯酸酯fcmma、溴化鉀kbr、六氟磷酸鉀kpf6的二甲基甲酰胺溶液中，通過電化學工作站施加-0.56v的電壓反應60分鐘，進行原子轉移自由基聚合反應，在電極表面生成聚合的fcmma。
17、基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建結構，應用所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建方法，所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建結構為采用基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建方法得到的電化學傳感器。
18、基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的應用，采用所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的應用為所述電化學傳感器在檢測血清樣品中地高辛抗體含量方面的應用。
19、本專利技術的優點在于：與現有技術相比，本專利技術采用小分子抗原決定簇修飾的dna探針進行抗體的特異性識別，設計級聯的鏈置換循環放大策略，借助原子轉移自由基聚合反應調控電化學信號的生長，提供了一種高效檢測抗體的電化學傳感器的構建方法、構建結構及應用，在人類免疫性疾病的預防、診斷和治療方面具有重要的應用價值。
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1.基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟S1中制備傳感界面的操作為，首先將固定探針IP與三(2-羧乙基)膦反應1小時，滴加至電極表面避光反應10小時，沖洗過后再將巰基己醇MCH滴加到電極上封閉2小時，即得到MCH/IP/AuE。
3.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟S2的實驗操作為，將基底探針SP與輔助探針AMP、封閉探針BP混合，置于95℃加熱10分鐘，接著以1℃/分鐘的速度降溫至25℃，得到雙鏈SP/AMP-BP，隨后將其與鏈霉親和素修飾的磁珠MB混合置于室溫下攪拌120分鐘，離心后置于牛血清蛋白中進行封閉，得到SP/AMP-BP/MB。
4.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟S3的實驗操作為，用有機溶劑(如，乙醇)溶解二價銅鹽(如，乙酸銅
5.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟S4的實驗操作為，將等摩爾比例的識別探針RP1、RP2、SP/AMP-BP/MB、DP-CuO與不同濃度的地高辛抗體混合，室溫下反應100分鐘，接著加入溴化氫HBr溶解CuO，隨后轉移至MCH/IP/AuE表面，并加入2-溴異丁酸-3-丁炔酯BBriB和抗壞血酸反應50分鐘，通過點擊化學反應將BBriB連接到電極表面。
6.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟S5的操作為，將步驟S4反應后的電極置于含有銅/三(2-二甲氨基乙基)胺CuII/Me6TREN、二茂鐵甲醇異丁烯酸酯FcMMA、溴化鉀KBr、六氟磷酸鉀KPF6的二甲基甲酰胺溶液中，通過電化學工作站施加-0.56V的電壓反應60分鐘，進行原子轉移自由基聚合反應，在電極表面生成聚合的FcMMA。
7.基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建結構，應用如權利要求1至6其中任何一項所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建結構為采用基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建方法得到的電化學傳感器。
8.基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的應用，采用如權利要求7所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的構建結構，其特征在于：所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器的應用為所述電化學傳感器在檢測血清樣品中地高辛抗體含量方面的應用。
...【技術特征摘要】
1.基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟s1中制備傳感界面的操作為，首先將固定探針ip與三(2-羧乙基)膦反應1小時，滴加至電極表面避光反應10小時，沖洗過后再將巰基己醇mch滴加到電極上封閉2小時，即得到mch/ip/aue。
3.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟s2的實驗操作為，將基底探針sp與輔助探針amp、封閉探針bp混合，置于95℃加熱10分鐘，接著以1℃/分鐘的速度降溫至25℃，得到雙鏈sp/amp-bp，隨后將其與鏈霉親和素修飾的磁珠mb混合置于室溫下攪拌120分鐘，離心后置于牛血清蛋白中進行封閉，得到sp/amp-bp/mb。
4.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟s3的實驗操作為，用有機溶劑(如，乙醇)溶解二價銅鹽(如，乙酸銅)，轉移至聚四氟乙烯反應釜中置于180℃高溫下反應1小時，隨后進行離心烘干，接著與dp鏈室溫下混合反應2小時，從而得到dp-cuo。
5.如權利要求1所述的基于原子轉移自由基聚合反應的地高辛抗體電化學傳感器，其特征在于：所述步驟s4的實驗操作為，將等摩爾比例的識別探針rp1、rp2、s...
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