本發明專利技術公開了一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體及其應用，所述突變體包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白的第566?567位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第571?572位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第586?588位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第591?595位的氨基酸均突變為丙氨酸。本發明專利技術發現rY586?3A降低了IL?8的分泌，因此，通過調控PRRSV感染期間IL?8水平和炎癥反應，從而用于開發更低炎癥反應、更為安全的減毒疫苗。為未來弱毒PRRSV疫苗(PRRSV?MLV)的改良提供了更為有利的準備工作。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體及其應用。
技術介紹
1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(prrsv)，屬于動脈炎病毒屬和動脈炎病毒科，包含一個長約15kb的單鏈正鏈rna。它在豬中引起繁殖障礙和呼吸困難，給豬業帶來巨大的經濟損失。prrsv基因組包含11個開放閱讀框，編碼8種結構蛋白和16種非結構蛋白(nsp)，每種都在感染、復制、致病性和病毒-宿主互作的不同步驟中具有不同的功能。prrsv感染后發生免疫抑制，可能導致先天性和獲得性免疫反應效率低下，調節炎癥和/或抗炎因子的表達和釋放，上調免疫抑制細胞因子的表達，并允許病毒快速繁殖和引起疾病。
2、幾項研究一致報告，prrsv感染會引起一種被稱為″細胞因子風暴″的異常免疫反應，其中健康個體的免疫系統對病毒感染產生過量的促炎細胞因子并嚴重過度反應。大量促炎細胞因子的積聚可以誘發組織損傷和其他嚴重的炎癥損害。然而，prrsv感染引起的″細胞因子風暴″的機制尚不清楚，需要進一步深入研究。
3、n6-甲基腺苷(m6a)是rna最重要的轉錄后修飾之一，在包括哺乳動物、植物、昆蟲和病毒在內的多種物種中，其大小、結構和功能都高度保守。
技術實現思路
1、本部分的目的在于概述本專利技術的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和專利技術名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和專利技術名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本專利技術的范圍。
>2、作為本專利技術其中一個方面，本專利技術提供一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其中，所述突變體包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白的第566-567位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第571-572位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第586-588位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第591-595位的氨基酸均突變為丙氨酸。3、作為本專利技術所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的一種優選方案∶所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白來源于高致病性prrsv毒株bb0907、prrsv株s1、低致病性prrsv毒株nt0801中的一種。
4、作為本專利技術所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的一種優選方案∶所述高致病性prrsv毒株bb0907的genbank登錄號為hq315835。
5、所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述prrsv株s1的genbank登錄號為dq459471。
6、作為本專利技術所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的一種優選方案∶所述低致病性prrsv毒株nt0801的genbank登錄號hq315836。
7、作為本專利技術的另一個方面，本專利技術還提供所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的應用，其中：所述突變體能夠用于制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒疫苗。
8、其中，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體能夠降低豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染引起的細胞因子風暴。
9、其中，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體能夠降低病毒感染期間的il-8水平和炎癥反應，從而降低所述突變體的毒性。
10、其中，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體通過調節fto介導的m6a水平來降低il-8水平。
11、本專利技術的有益效果：在本專利技術中，定義了m6a在prrsv?rna基因組中調節宿主炎癥因子的作用，并證明了細胞m6a機制可以增加病毒感染誘導的il-8表達。重要的是，本專利技術發現prrsv?nsp9與prrsv感染的pams中增強的il-8分泌有關。通過構建靶向突變，我們注意到nsp9中的551-600氨基酸殘基(aa)以及r566-567、a571-572和y586-588在prrsv感染的pams中通過抑制fto表達上調細胞m6a修飾而誘導il-8分泌中起著重要作用。綜上所述，本專利技術的結果揭示了一種新的炎癥反應機制，即通過m6a修飾對病毒感染的反應，在該機制中，與fto改變的的m6a修飾的prrsv?nsp9基序增加了il-8分泌。由于prrsv感染可能會引起″細胞因子風暴″，這對于prrsv弱毒疫苗的安全性是一種不利因素，而本專利技術發現ry586-3a降低了il-8的分泌，因此，通過調控prrsv感染期間il-8水平和炎癥反應，從而用于開發更低炎癥反應、更為安全的減毒疫苗。為未來弱毒prrsv疫苗(prrsv-mlv)的改良提供了更為有利的準備工作。
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【技術保護點】
1.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述突變體包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白的第566-567位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第571-572位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第586-588位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第591-595位的氨基酸均突變為丙氨酸。
2.根據權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白來源于高致病性PRRSV毒株BB0907、PRRSV株S1、低致病性PRRSV毒株NT0801中的一種。
3.根據權利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述高致病性PRRSV毒株BB0907的GenBank登錄號為HQ315835。
4.根據權利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述PRRSV株S1的GenBank登錄號為DQ459471。
5.根據權利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述低致病性PRRSV毒株NT0801的GenBank登錄號HQ315836。
6.權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的應用，其特征在于：所述突變體能夠用于制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒疫苗。
7.權利要求6所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的應用，其特征在于：所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體能夠降低豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染引起的細胞因子風暴。
8.權利要求6或7所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的應用，其特征在于：所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體能夠降低病毒感染期間的IL-8水平和炎癥反應，從而降低所述突變體的毒性。
9.權利要求6或7所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體的應用，其特征在于：所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體通過調節FTO介導的m6A水平來降低IL-8水平。
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【技術特征摘要】
1.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述突變體包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白的第566-567位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第571-572位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第586-588位的氨基酸均突變為丙氨酸，或第591-595位的氨基酸均突變為丙氨酸。
2.根據權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp9蛋白來源于高致病性prrsv毒株bb0907、prrsv株s1、低致病性prrsv毒株nt0801中的一種。
3.根據權利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述高致病性prrsv毒株bb0907的genbank登錄號為hq315835。
4.根據權利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒突變體，其特征在于：所述prrsv株s1的genbank登錄號為dq459471。
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳曦，龐意鵬，房興堂，張春雷，王艷紅，宋成創，
申請(專利權)人：江蘇師范大學，
類型：發明
國別省市：
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