【技術實現步驟摘要】
本申請涉及分子檢測，尤其涉及檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組、試劑盒和方法。
技術介紹
1、幽門螺旋桿菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌。目前多數學者認為“人－人”“糞－口”是幽門螺旋桿菌的主要傳播方式和途徑，亦可通過內鏡傳播，而且幽門螺桿菌感染在家庭內有明顯的聚集現象。1994年世界衛生組織/國際癌癥研究機構(who/iarc)將幽門螺桿菌定為ⅰ類致癌原。幽門螺旋桿菌感染，作為慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌等主要病因，治療消化性潰瘍、預防胃癌的一個可行措施就是預防并根除幽門螺旋桿菌感染。近年對幽門螺旋桿菌菌屬亞群的研究顯示不同亞群的致病性有差別，帶caga基因的幽門螺旋桿菌亞群更有致潰瘍性。而vaca存在多態性，其信號序列有3種不同的表現型，分別為s1a、s1?b和s2，2種不同的中間區域等位基因，分別為m1和m2。除s2/m1以外，其他基因可任意組合，以s1/m1型菌表現為較高的毒素活性。
2、現有的診斷方法主要包括細菌培養、血清學診斷、二氧化碳呼吸等方法。細菌培養法需要時間較長，且實驗條件要求較高，血清學測試靈敏度與特異性有一定的局限，而且對少量抗體的直接檢測不夠靈敏，而二氧化碳呼吸法不夠精確，假陽性與假陰性較多。因此亟需一種更加準確、可靠的檢測方法。
技術實現思路
1、本申請實施例的目的在于提出一種檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組、試劑盒和方法，檢測結果更加準確。
2、為了解決上述技術問題
3、一種檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，所述引物探針組包括：
4、針對vaca-m1基因的上游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.1所示；
5、針對vaca-m1基因的下游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.2所示；
6、針對vaca-m1基因的探針，其核苷酸序列如seq?i?d?no.3所示；
7、針對vaca-m2基因的上游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.4所示；
8、針對vaca-m2基因的下游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.5所示；
9、針對vaca-m2基因的探針，其核苷酸序列如seq?i?d?no.6所示；
10、針對內標基因的上游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.7所示；
11、針對內標基因的下游引物，其核苷酸序列如seq?i?d?no.8所示；以及
12、針對內標基因的探針，其核苷酸序列如seq?i?d?no.9所示。
13、進一步的，所述seq?i?d?no.3的核苷酸序列的5’端標記有fam，3’端標記有bhq1。
14、進一步的，所述seq?i?d?no.6的核苷酸序列的5’端標記有vi?c，3’端標記有bhq1。
15、進一步的，所述seq?i?d?no.9的核苷酸序列的5’端標記有cy5，3’端標記有bhq2。
16、進一步的，所述seq?i?d?no.1對應5’至3’端的核苷酸序列為tttgcatatcggcaaagg；
17、所述所述seq?i?d?no.2對應5’至3’端的核苷酸序列為cggtgatattcccggttagat；
18、所述seq?i?d?no.3對應5’至3’端的核苷酸序列為tccaatcaagcgagcgggc；
19、所述seq?i?d?no.4對應5’至3’端的核苷酸序列為aaaactttgacattaaggaattagt；
20、所述seq?i?d?no.5對應5’至3’端的核苷酸序列為tcgcctatattttcgccaaa；
21、所述seq?i?d?no.6對應5’至3’端的核苷酸序列為aacccgtgttcaaagttttgggcaa；
22、所述seq?i?d?no.7對應5’至3’端的核苷酸序列為cacctgaatcctgaggag；所述seqi?d?no.8對應5’至3’端的核苷酸序列為cttgatagcaacctgcc
23、所述seq?i?d?no.9對應5’至3’端的核苷酸序列為aacgtgaacgtggatgaagttg。
24、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的試劑盒，采用了如下所述的技術方案：
25、一種檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的試劑盒，包括引探混合液，所述引探混合液包括如權利要求1至5任意一項的所述引物探針組。
26、進一步的，所述試劑盒還包括pcr反應酶系，所述pcr反應酶系包括taq酶、udg酶以及dntps。
27、進一步的，所述針對vaca-m1基因的上游引物和針對vaca-m1基因的下游引物的濃度均為10pmo?l；
28、針對vaca-m1基因的探針的濃度為5pmo?l；
29、針對vaca-m2基因的上游引物和針對vaca-m2基因的下游引物的濃度均為12pmol；
30、針對vaca-m2基因的探針的濃度為6pmo?l；
31、針對內標基因的上游引物和針對內標基因的下游引物的濃度均為5pmo?l；
32、針對內標基因的探針的濃度為3pmo?l。
33、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種使用上述試劑盒檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的方法，采用了如下所述的技術方案：
34、一種使用上述試劑盒檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的方法,包括下述步驟：
35、s1：對待測樣本進行核酸提取操作，獲得待測樣本核酸；
36、s2：配制pcr檢測液，所述pcr檢測液包括所述引物探針組：
37、s3：將所述待測樣本核酸加入至所述pcr檢測液中，獲得pcr擴增反應液；
38、s4：將裝有pcr擴增反應液的pcr管放入熒光pcr儀中進行擴增反應，獲得檢測結果。
39、與現有技術相比，本申請實施例主要有以下有益效果：
40、本申請采用內源性內標質控體系，內標參與樣本提取與擴增，用于監測反應體系可能存在的抑制因素，內標模板與靶基因無同源性，不產生競爭。采用實時熒光定量pcr方法直對幽門螺旋桿菌vaca基因中間區域進行分型，是既迅速又敏感準確的方法。本申請采用兩個不同的熒光通道對幽門螺旋桿菌的vaca-m1、vaca-m2基因進行分型，且雙通道不產生交叉干擾。本申請的方法與現有的其他方法相比具有方便、準確、精度高等優點。檢測結果直觀準確，方便快速，70分鐘左右即可出結果。本申請靈敏度高，重復性、特異性好，不與其他相似病原體產本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的引物探針組，其特征在于,所述引物探針組包括：
2.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的引物探針組，其特征在于，所述SEQ?ID?NO.3的核苷酸序列的5’端標記有FAM，3’端標記有BHQ1。
3.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的引物探針組，其特征在于，所述SEQ?ID?NO.6的核苷酸序列的5’端標記有VIC，3’端標記有BHQ1。
4.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的引物探針組，其特征在于，所述SEQ?ID?NO.9的核苷酸序列的5’端標記有Cy5，3’端標記有BHQ2。
5.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的引物探針組，其特征在于，所述SEQ?ID?NO.1對應5’至3’端的核苷酸序列為TTTGCATATCGGCAAAGG；
6.一種檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的試劑盒，其特征在于，包括引探混合液，所述引探
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR反應酶系，所述PCR反應酶系包括Taq酶、UDG酶以及dNTPs。
8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述針對VacA-M1基因的上游引物和針對VacA-M1基因的下游引物的濃度均為10pmol；
9.一種使用如權利要求6至8任意一項的試劑盒檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的方法，包括下述步驟：
10.根據權利要求9所述的檢測幽門螺旋桿菌VacA-M1和VacA-M2的方法，其特征在于，所述熒光PCR儀中的反應程序為：
...【技術特征摘要】
1.一種檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，其特征在于,所述引物探針組包括：
2.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，其特征在于，所述seq?id?no.3的核苷酸序列的5’端標記有fam，3’端標記有bhq1。
3.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，其特征在于，所述seq?id?no.6的核苷酸序列的5’端標記有vic，3’端標記有bhq1。
4.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，其特征在于，所述seq?id?no.9的核苷酸序列的5’端標記有cy5，3’端標記有bhq2。
5.根據權利要求1所述的檢測幽門螺旋桿菌vaca-m1和vaca-m2的引物探針組，其特征在于，所述seq?id?...
【專利技術屬性】
技術研發人員：廖芷卉，蔣析文，楊孟霞，
申請(專利權)人：廣州達安基因股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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