【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及用于檢測樣品中的靶標分析物的系統(tǒng)和方法。特別地，本專利技術(shù)提供了一種能夠檢測樣品中的微量靶標分析物的基于局域表面等離子體共振的分析物檢測系統(tǒng)。
技術(shù)介紹
1、目前的免疫測定和生物分子結(jié)合測定典型需要多個步驟和復(fù)雜的設(shè)備來進行測定。缺乏靈敏度和執(zhí)行此類異質(zhì)測定所涉及的復(fù)雜性源于將標記的特異性結(jié)合配偶體與未標記的特異性結(jié)合配偶體分離的特定需要。
2、已嘗試開發(fā)基于貴金屬納米粒子的局部表面等離子體共振(lspr)特性的測定(tokel等人,chem?rev.,卷114:5728–5752,2014)。lspr是入射光誘導的納米尺寸結(jié)構(gòu)中電子的集體振蕩。金屬納米粒子對其緊鄰處的折射率變化具有強烈的電磁響應(yīng)，因此可以測量所述納米粒子的共振頻移作為分子結(jié)合到納米粒子表面的指示劑。雖然金屬納米粒子、特別是金納米粒子已被用于診斷測定以檢測結(jié)合事件，但是這種測定通常具有低靈敏度并且不能用于定量監(jiān)測順序結(jié)合事件的動力學。
3、因此，需要采用同質(zhì)形式同時提供增加靈敏度的改善的測定方法。還期望利用標準實驗室技術(shù)(諸如光譜學)的測定。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請描述了局部表面等離子體共振(lspr)技術(shù)用于進行涉及特異性結(jié)合配偶體的測定的用途，所述特異性結(jié)合配偶體包括但不限于配體、受體、轉(zhuǎn)錄因子、dna結(jié)合元件、抗原和抗體。更具體地，本申請涉及使用納米結(jié)構(gòu)結(jié)合配偶體綴合物在此類測定中實現(xiàn)顯著擴增的工藝和材料。在一些方面，本公開文本提供了使用lspr技術(shù)實現(xiàn)分子的靈敏檢測并
2、在本文所述的各種實施方案中，本申請涉及納米結(jié)構(gòu)-結(jié)合配偶體綴合物，其中所述納米結(jié)構(gòu)是包含多個尖峰的金屬納米結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，所述納米結(jié)構(gòu)是平均直徑為至少50nm的金屬納米結(jié)構(gòu)。在進一步的實施方案中，所述納米結(jié)構(gòu)是平均直徑為約50nm至約120nm的金屬納米結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，本公開文本提供了這種金屬納米結(jié)構(gòu)-結(jié)合配偶體綴合物在溶液中以定性或定量方式確定特異性結(jié)合配偶體的結(jié)合的用途。在一些實施方案中，本公開文本提供了用于產(chǎn)生本文所述的綴合物的方法。
3、在一個方面，本公開文本提供了用于檢測樣品中的靶標分析物的方法和組合物，所述方法包括將所述樣品與第一檢測綴合物和第二檢測綴合物在溶液中混合，其中所述第一檢測綴合物和第二檢測綴合物包括偶聯(lián)到結(jié)合配偶體的納米結(jié)構(gòu)，所述靶標分析物如果存在于樣品中，則所述結(jié)合配偶體能夠特異性地結(jié)合所述靶標分析物以形成所述第一檢測綴合物、所述分析物和所述第二檢測綴合物之間的復(fù)合物。在一些實施方案中，所述納米結(jié)構(gòu)是在球形核上包含多個突起的各向異性納米結(jié)構(gòu)，并且其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均尖端到尖端直徑為至少約50nm。在進一步的實施方案中，所述納米結(jié)構(gòu)的平均直徑為約70nm或約90nm。在一些實施方案中，所述納米結(jié)構(gòu)是球形納米結(jié)構(gòu)。在進一步的實施方案中，所述方法還包括將所述復(fù)合物暴露于紫外-可見-紅外光譜的波長范圍內(nèi)的光源。在更進一步的實施方案中，所述方法包括測量來自所述復(fù)合物的光信號，其中所述光信號的變化指示所述樣品中所述靶標分析物的存在。
4、在一些實施方案中，使用多于兩種檢測綴合物。例如，添加第三種、第四種、第五種或更多種檢測綴合物。在一些實施方案中，每種所述檢測綴合物能夠結(jié)合相同的靶標分析物以形成復(fù)合物。在一些實施方案中，每種所述檢測綴合物結(jié)合所述靶標分析物上的不重疊表位。在一些實施方案中，所述綴合物中的一些或所有是各向異性的。
5、在一些實施方案中，所述混合步驟在3-((3-膽酰胺丙基)二甲氨基)-1-丙磺酸鹽(chaps)的存在下進行。在一些實施方案中，所述chaps以約0.1％w/v至約0.5％w/v的濃度存在。在進一步的實施方案中，所述chaps以約0.2％w/v的濃度存在。因此，在一些實施方案中，本文提供的溶液包含chaps。
6、在一些實施方案中，所述混合步驟在聚合物材料的存在下進行，所述聚合物材料選自聚乙二醇(peg)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、葡聚糖、聚烯丙胺、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚丙烯酸、聚谷氨酸、聚乙烯醇和聚天冬氨酸。因此，在一些實施方案中，本文提供的溶液包含peg、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、葡聚糖、聚烯丙胺、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚丙烯酸、聚谷氨酸、聚乙烯醇和/或聚天冬氨酸中的一種或多種。在一些實施方案中，所述聚合物材料是peg。在一些實施方案中，peg以約0.05％至約5％w/v或約0.1％至約3％的濃度存在。在一些實施方案中，所述peg具有1,000至300,000、或2,000至250,000、或3,000至200,000的分子量。
7、在一些實施方案中，所述混合步驟在粘度增強劑的存在下進行。因此，在一些實施方案中，本文提供的溶液包含粘度增強劑。在進一步的實施方案中，所述粘度增強劑選自海藻糖、麥芽糖糊精、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙烯醇(pva)、環(huán)糊精、隨機烷基化環(huán)糊精、甲基纖維素、海藻糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇和聚蔗糖(ficoll)、葡聚糖、或其任何組合。在特定的實施方案中，所述混合步驟在濃度為約0.05％至約5％的葡聚糖的存在下進行，所述濃度取決于分子量。例如，在一些實施方案中，葡聚糖以約0.05％、約0.1％、約0.5％、約1％、約1.5％、約2％、約2.5％、約3％、約3.5％、約4％、約4.5％或約5％的濃度存在。.
8、在一些實施方案中，所述混合步驟在明膠的存在下進行。因此，在一些實施方案中，本文提供的溶液包含明膠。在一些實施方案中，所述明膠以約0.1％至約3％之間的濃度存在，
9、在一些實施方案中，本文提供的溶液和反應(yīng)混合物包含至少一種結(jié)合配偶體-納米結(jié)構(gòu)綴合物、chaps緩沖液、peg、一種或多種霍夫梅斯特系列鹽(hofmeister?seriessalts)、edta、基于聚合物的封閉試劑(諸如)、bsa、明膠、或其任何組合。在一些實施方案中，所述霍夫梅斯特系列鹽是氯化鎂。在其他實施方案中，所述霍夫梅斯特系列鹽是氯化鈣。在一些實施方案中，所述反應(yīng)混合物包含諸如霍夫梅斯特系列鹽的多種鹽。在一些實施方案中，本文提供的溶液和反應(yīng)混合物包含濃度為約10mm至約250mm或濃度為約100mm的mgcl2或nascn。在一些實施方案中，本文提供的溶液和反應(yīng)混合物包含二價陽離子的檸檬酸鹽，例如mg2+的檸檬酸鹽或ca2+的檸檬酸鹽。在一些實施方案中，所述溶液和反應(yīng)混合物包含硫氰酸鹽、錳、鈷、鎳、乙二胺四乙酸(edta)和/或乙二醇-雙(β-氨基乙基醚)-n,n,n',n'-四乙酸(egta)。在一些實施方案中，所述edta和/或egta以約5mm至約100mm的濃度存在于所述溶液中。
10、在一些實施方案中，本文提供的方法和組合物中使用的所述納米結(jié)構(gòu)包含多個突起，其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均尖端到尖端直徑為約50nm、約60nm、約70nm、約80nm、約90nm、約10本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種檢測樣品中的靶標分析物的方法，其包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均直徑為約70nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均直徑為約90nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在3-((3-膽酰胺丙基)二甲氨基)-1-丙磺酸鹽(CHAPS)的存在下進行步驟(a)的混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述CHAPS以約0.1％w/v至約0.5％w/v的濃度存在。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述CHAPS以約0.2％w/v的濃度存在于所述溶液中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中步驟(a)的混合在選自聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、纖維素或其組合的聚合物材料的存在下進行。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述聚合物材料選自甲基纖維素、葡聚糖、聚烯丙胺、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚丙烯酸、聚乙烯醇和聚天冬氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述聚合物材料是PEG，并且其中所述PEG以約0.1％至約5％w/v的濃度存在。
10.根據(jù)權(quán)
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測樣品中的靶標分析物的方法，其包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均直徑為約70nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述納米結(jié)構(gòu)的平均直徑為約90nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在3-((3-膽酰胺丙基)二甲氨基)-1-丙磺酸鹽(chaps)的存在下進行步驟(a)的混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述chaps以約0.1％w/v至約0.5％w/v的濃度存在。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述chaps以約0.2％...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：V·蔣，S·A·安塞爾，R·K·梅赫拉，K·P·阿倫，
申請(專利權(quán))人：碩騰服務(wù)有限責任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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