本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種側(cè)柏葉的有效組分及其制備方法與用途，其制備過程包括以下步驟：步驟１：用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對側(cè)柏葉進(jìn)行提取；步驟２：提取液經(jīng)過色譜柱層析得洗脫液；步驟３：用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集３６．０－４０．０分鐘，４４．０－４８．０分鐘洗脫液得到有效組分。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種治療腫瘤疾病的中藥提取物，具體地說涉及從側(cè)柏葉中提取的有效組分，制劑及其制備方法與用途。
技術(shù)介紹
腫瘤是一種常見病、多發(fā)病，其中惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴(yán)重的一 類疾病。目前業(yè)內(nèi)對惡性腫瘤的治療主要還是以手術(shù)、放療、化療為主，但許多 化學(xué)抗癌藥物在作用于耙細(xì)胞時(shí)往往累及正常細(xì)胞，造成嚴(yán)重的副反應(yīng)。植物藥 的遺傳毒性不明顯，中草藥在抗癌抗突變方面有獨(dú)特的優(yōu)勢和廣闊的應(yīng)用前景， 而且中藥在對腫瘤的輔助治療中也起到不容忽視的作用。紫杉醇即是典型的從植 物中獲得的具有良好抗癌活性的天然化合物，現(xiàn)已開發(fā)為抗腫瘤藥物。目前我國 危害性最為嚴(yán)重的腫瘤為肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大腸癌、肝癌、乳腺癌、 宮頸癌、白血病及淋巴瘤等。特別是肝癌的發(fā)生率近年來有所增加。值得重視， 這些腫瘤的病因?qū)W、發(fā)病學(xué)及其防治，均為我國腫瘤研究的重點(diǎn)。尋找高效低毒 的抗癌藥物以及抗癌輔助藥物是當(dāng)前腫瘤研究的重要內(nèi)容。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué) 物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，用于開發(fā)成 治療腫瘤疾病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)， 丌發(fā)成具有抗腫瘤療效的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣闊發(fā)展前景。側(cè)柏葉為多年生草本植物。其含有的化學(xué)成分有，根莖含揮發(fā)油，油中主成 分為茴香酮(fenchone)、樟腦、乙酸龍腦酯、萜醇；并含檜酸(juniperic acid) 槲皮素、楊黃黃素(myricetin)、山柰素、扁柏雙黃酮(hinokifla麗e)、蠟質(zhì) 等。其性味性味性寒，味苦澀。其功能主治為涼血止血，生發(fā)烏發(fā)。用于吐血、衄血、咯血、便血、崩漏不止、 血熱脫發(fā)、須發(fā)早白。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供側(cè)柏葉的有效組分。本專利技術(shù)的另一目的在于提供上述側(cè)柏葉有效組分的制備方法。本專利技術(shù)還提供含有上述側(cè)柏葉有效組分的制劑及該組分的用途。本專利技術(shù)的側(cè)柏葉有效組分，其制備過程包括以下步驟步驟1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對側(cè)柏葉進(jìn)行提取，歩驟2:提取液經(jīng)過色譜柱層析得洗脫液；步驟3:用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集36. 0—40. 0分鐘或44. 0—48. 0分鐘的洗脫液得到有效組分1 (或稱為C09)、 有效組分2 (或稱為Cll)。其中步驟1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，兩者的比例為乙酸乙酯乙 醇=1-5:1-5,優(yōu)選為乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2，最優(yōu)選為乙酸乙酯乙醇=1:1。所述步驟中，步驟1具體為取側(cè)柏葉藥材，以乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5 為溶劑，回流提取，將提取液與藥渣分離，分離后得到的提取液為提取物l，步驟2具體為將提取物1過0DS-C18柱，首先，采用30%EtOH (5 BV; lBV-250 ml)作為流動(dòng)相，然后改換95XEt0H (5 BV)作為流動(dòng)相，得洗脫液，步驟3具體為用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的洗脫液，流動(dòng)相為水-A和 乙腈-B，進(jìn)行梯度洗脫，流速為9-llml/min，柱溫為室溫，收集36.0—40.0分 鐘、44.0 — 48.0分鐘的洗脫液得到有效組分。步驟3中所述梯度洗脫程序如下表1洗脫梯度表Time (min)_A (%)_B (%)0 80 204 80 2019 50 5060 5 9564 5 95流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分 離，在時(shí)間段36. 0 — 40. 0分鐘或44. 0—48. 0分鐘收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后 得到有效組分。本專利技術(shù)優(yōu)選的側(cè)柏葉有效組分制備方法，包括下列步驟將側(cè)柏葉藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:0.8-1.2),加熱回流0.8-1.2小時(shí)，提取卜3次， 合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，過0DS-C18柱，首先，采用30%EtOH (5 BV; 1BV 250 ml)作為流動(dòng)相，得洗脫液I ，然后改換95%Et0H (5 BV)作為流動(dòng)相，得洗脫液n，將洗脫液n濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈， 梯度洗脫，流速為9-llml/min，柱溫為室溫。本專利技術(shù)最優(yōu)選的側(cè)柏葉有效組分制備方法，包括下列步驟將側(cè)柏葉藥材 粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(l:l)，加熱回流l小時(shí)，提取2次，合并濾液得提 取液；將提取液濃縮成浸膏，用乙醇溶解上樣，過0DS-C18柱，首先，采用30 %EtOH (5 BV; lBVa250 ml)作為流動(dòng)相，得洗脫液I ，然后改換95XEtOH (5 BV)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色 譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱Zorbax SB-C18;21.2鵬x250mm，流動(dòng)相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下Time (min)A (%)B (%)0 419 60 6480 80 505520 20 50 95 95流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分 離，在時(shí)間段36. 0—40. 0分鐘或44. 0_48. 0分鐘收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后 得到有效組分。本專利技術(shù)36. 0 — 40. 0分鐘、44. 0—48. 0分鐘收集的有效組分成分如下表表2成分表 側(cè)柏葉C09質(zhì)譜解析結(jié)果<table>table see original document page 7</column></row><table><table>table see original document page 8</column></row><table>本專利技術(shù)還提供用本專利技術(shù)的中藥有效組分作為藥物活性成分制備成的藥物組 合物，本專利技術(shù)的藥物組合物，包括有效組分，根據(jù)需要該組合物還可以加入藥物 可接受的載體。本專利技術(shù)的組合物，是單位劑量的藥物制劑形式，所述單位劑量形式是指制劑 的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋等。本專利技術(shù)的組合物其中的有效組分，其在制劑中所占重量百分比可以是 0.1-99.9%，其余為藥物可接受的載體。本專利技術(shù)的組合物，通過將上述有效組分和藥物可接受的載體混合制備得到。本專利技術(shù)的組合物，其藥物制劑形式可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口 服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液 劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑。本專利技術(shù)的制劑，優(yōu)選的是口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹 劑、膏劑等。本專利技術(shù)的組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填 充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時(shí)可 對片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩 解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤 滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。可通過混本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種側(cè)柏葉有效組分，其特征在于，其制備過程包括以下步驟： 步驟１：用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對側(cè)柏葉進(jìn)行提取， 步驟２：提取液經(jīng)過色譜柱層析得洗脫液； 步驟３：用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集 ３６．０－４０．０分鐘或４４．０－４８．０分鐘洗脫液得到有效組分。
【技術(shù)特征摘要】
1、一種側(cè)柏葉有效組分，其特征在于，其制備過程包括以下步驟步驟1用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對側(cè)柏葉進(jìn)行提取，步驟2提取液經(jīng)過色譜柱層析得洗脫液；步驟3用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集36.0-40.0分鐘或44.0-48.0分鐘洗脫液得到有效組分。2、 權(quán)利要求1的有效組分，其特征在于，步驟1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合 物，兩者的比例為乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5。3、 權(quán)利要求l的有效組分，其特征在于，步驟l中所述乙酸乙酯和乙醇的混合 物，兩者的比例為乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2。4、 權(quán)利要求1的有效組分，其特征在于，步驟1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合 物，兩者的比例為乙酸乙酯乙醇=1:1。5、 權(quán)利要求l的有效組分，其特征在于，所述步驟中，步驟l為取側(cè)柏葉藥材，以乙酸乙酯:乙醇=1-5:1-5為溶劑，回流提取，將提取液與藥渣分離，分離后 得到的提取液為提取物1，步驟2為將提取物1過ODS-C18柱，首先，采用 30%EtOH (5BV; lBV《250 ml)作為流動(dòng)相，然后改換95^EtOH (5BV)作 為流動(dòng)相，得洗脫液，步驟3為用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的洗脫液，流動(dòng) 相為水-A和乙腈-B，進(jìn)行梯度洗脫。6、 權(quán)利要求5的有效組分，其特征在于，所述梯度洗脫程序如下Time (min)_A (%)_B (%)0 80 204 80 2019 50 5060 5 9564 5 95流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離， 在時(shí)間段36. 0 — 40. 0分鐘或44. 0 — 48. 0分鐘收集溶液，溶液分別濃縮干燥后得 到有效組分。7、 含有權(quán)利要求l-6任何一項(xiàng)有效組分的藥物組合物。8、 權(quán)利要求1的有效組分的制備方法，其特征在于，其制備過程包括以下步驟:步驟1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對側(cè)柏葉進(jìn)行提取， 步驟2:提取液經(jīng)過色譜柱層析得洗脫液；步驟3:用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集36.0_4...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：賀慶，劉靂，程翼宇，水文波，竇靜，葛志偉，
申請(專利權(quán))人：天津天士力制藥股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：12[中國|天津]
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