【技術實現步驟摘要】
本申請總體涉及分析物(例如，靶)的檢測和定量領域。
技術介紹
1、熒光顯微術是用于探索例如生物系統中的分子的有力工具。然而，可以可區別地且同時地可視化的不同種類的數量(即多路復用能力)受熒光團之間光譜重疊的限制。一些多路復用成像方法是已知的，但可能不足以產生足夠強的信號，或者可能需要用于在被成像的靶之間切換的特定裝置。因此，需要采用改進的擴增方法和在被成像的靶之間切換的附加裝置的新的和改進的多路復用成像方法。
技術實現思路
1、根據描述，在一些實施方案中，一種用于測試樣品中一種或多種靶的存在的方法包括：
2、(1)使待測試一種或多種靶存在的樣品與一種或多種靶特異性結合配偶體接觸，其中每種靶特異性結合配偶體與核酸鏈連接，并且其中具有不同特異性的靶特異性結合配偶體與不同的核酸鏈連接，
3、(2)任選地去除未結合的靶特異性結合配偶體，
4、(3)使樣品與具有與核酸鏈的互補性的非線性擴增鏈接觸，其中所述核酸鏈是對接鏈或引物鏈，
5、(4)任選地去除未結合的非線性擴增鏈，
6、(5)用滾環擴增以一個或兩個步驟來擴增所述對接鏈，以及使所述樣品和與所述對接鏈或經擴增的鏈具有互補性的標記成像鏈接觸，
7、(6)對所述樣品成像以檢測結合的標記成像鏈，
8、(7)去除所述結合的標記成像鏈，以及
9、(8)任選地重復步驟(1)-(8)，或所述步驟(1)-(8)的任何子集。
10、在一些實施方案中，
11、(1)使所述樣品與一種或多種靶特異性結合配偶體接觸，其中每種靶特異性結合配偶體直接或間接地與核酸鏈連接，并且其中具有不同特異性的靶特異性結合配偶體與不同的核酸鏈連接，
12、(2)任選地去除未結合的靶特異性結合配偶體，
13、(3)其中所述核酸鏈是對接鏈或引物鏈，并且如果所述核酸是
14、(a)對接鏈，則任選地增加與每種靶特異性結合配偶體相締合的對接鏈的數目，或
15、(b)引物鏈，則任選地將多于一個對接鏈與所述引物鏈相締合，
16、(4)使樣品與能夠直接或間接地與對接鏈結合的標記成像鏈接觸，
17、(5)任選地去除未結合的標記成像鏈，
18、(6)對所述樣品進行成像以檢測結合的標記成像鏈，以及
19、(7)任選地消除(extinguishing)來自所述結合的標記成像鏈的信號；
20、(8)任選地重復步驟(1)-(7)，或所述步驟(1)-(7)的任何子集。
21、在一些實施方案中，一種組合物包含：樣品，所述樣品與多于一種靶特異性結合配偶體結合，每種結合配偶體與核酸鏈結合；以及至少一條對接鏈，所述至少一條對接鏈直接或間接地與標記成像鏈穩定結合，其中所述核酸鏈是對接鏈或引物鏈，如果所述核酸是
22、(a)對接鏈，則增加與每種靶特異性結合配偶體相締合的對接鏈的數量，或
23、(b)引物鏈，則將多于一個對接鏈與所述引物鏈相締合。
24、在一些實施方案中，一種組合物包含：
25、(1)標簽，
26、(2)第一核酸結構域、第二核酸結構域和第三核酸結構域，其中每個核酸結構域的長度為1至9個核苷酸，
27、(3)第一連接部分，所述第一連接部分連接所述第一核酸結構域和所述第二核酸結構域，以及
28、(4)第二連接部分，所述第二連接部分連接所述第二核酸結構域和所述第三核酸結構域，
29、其中兩個連接部分獨立地選自(a)具有完整磷酸二酯骨架的無堿基位點，(b)可被核酸糖基化酶切割的接頭，(c)非天然核苷酸，或(d)限制性位點或切口位點。
30、本專利技術的另外目的和優點將部分陳述在以下描述中，并且部分將從所述描述中顯而易見或者可通過實踐本專利技術來得知。所述目的和優點將借助在所附權利要求書中具體指出的要素和組合來實現和達到。
31、應當理解，以上概述和以下詳述都僅是示例性和解釋性的，并且不限制權利要求。
32、并入本說明書中并構成本說明書的一部分的附圖說明了本專利技術的一個(幾個)實施方案，并與描述一起用來解釋本文所述的原理。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種測試樣品中一種或多種靶的存在的方法，所述方法包括：
2.如權利要求1所述的方法，其中聚合酶用于滾環擴增。
3.如權利要求1所述的方法，其中在與所述樣品接觸之前，將所述非線性擴增鏈與連接到核酸鏈的所述靶特異性結合配偶體合并。
4.如權利要求1所述的方法，其中將用滾環擴增來擴增所述對接鏈與使所述樣品和與所述對接鏈或經擴增的鏈具有互補性的標記成像鏈接觸分開進行。
5.一種測試樣品中一種或多種靶的存在的方法，所述方法包括：
6.如權利要求5所述的方法，其中在步驟(6)之后并且在任選地執行步驟(7)之后，所述方法還包括增加與每種靶特異性結合配偶體相締合的對接鏈的數目，以及重復步驟(4)、任選的(5)、(6)以及任選的(7)。
7.一種組合物，其包含：
8.如權利要求7所述的組合物，其中所述(a)對接鏈，或(b)對接鏈和任何中間鏈，為80個核苷酸或更少，70個、60個、50個、40個或30個核苷酸或更少。
9.一種組合物，所述組合物包含：
10.如權利要求9所述的組合物，其中另
...【技術特征摘要】
1.一種測試樣品中一種或多種靶的存在的方法，所述方法包括：
2.如權利要求1所述的方法，其中聚合酶用于滾環擴增。
3.如權利要求1所述的方法，其中在與所述樣品接觸之前，將所述非線性擴增鏈與連接到核酸鏈的所述靶特異性結合配偶體合并。
4.如權利要求1所述的方法，其中將用滾環擴增來擴增所述對接鏈與使所述樣品和與所述對接鏈或經擴增的鏈具有互補性的標記成像鏈接觸分開進行。
5.一種測試樣品中一種或多種靶的存在的方法，所述方法包括：
6.如權利要求5所述的方法，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：A·穆罕默德，S·R·亨內克，M·曼內塞，陳曦，M·J·納坦，
申請(專利權)人：烏爾蒂維尤股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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