【技術實現步驟摘要】
本申請涉及基因測序領域，具體地，涉及一種檢測人源dna免疫組庫的引物組、試劑盒和方法。
技術介紹
1、在生物個體中，在任何特定的時間，循環系統中所有的功能多樣性b細胞和t細胞的總和稱之為免疫組庫(immune?repertoire，ir)。t、b細胞作為人體內主要的淋巴細胞，分別負責細胞免疫和體液免疫，t細胞受體(tcr)和b細胞受體(bcr)由多條肽鏈組成，具有抗原結合特異性，每條肽鏈的互補決定區(cdr，又稱超變區)氨基酸組成和排列順序呈現高度多樣性，構成容量巨大的tcr和bcr庫，研究表明亞型越多，越能有效抵抗細菌、病毒等病原體侵襲，亞型越少越容易感染疾病。
2、人體內約有1012個t細胞和1012個bcr，要測定如此多的免疫細胞信息，一代測序已無法滿足這么高通量的需求，隨之測序技術的高速發展，基于illumina、454等二代測序高通量平臺可以快速高效的測定個體內的免疫組庫信息，并逐步形成了免疫組庫測序技術。
3、t細胞抗原受體(tcr)與抗原主要組織相容性復合體分子(mhc)相互作用介導抗原識別。tcr由兩條肽鏈組成，其中95％由α鏈和β鏈，5％由γ鏈和δ鏈組成。b細胞抗原受體(bcr)是一種長在b淋巴細胞表面的免疫球蛋白分子(ig)，它的結構由igh,igk,igl三條鏈組成。每條肽鏈的互補決定區(尤其是cdr3)的多樣性決定了抗原的特異結合的特異性和多樣性。其中tcrβ、tcrδ、igh基因的cdr3由三組片段組成：v/d/j片段。tcrα、tcrγ、igκ、igλ基因的cdr3由兩組片段組
4、現有技術存在的主要技術困難有：多重pcr法難保證擴增效率一致性、容易產生非特異擴增。由于所含引物越多，檢測重數越多，效率一致性可能隨之降低。多重pcr法檢測條帶弱且reads數低，且引物檢測重數多可能導致有非特異擴增出現，甚至導致非特異擴增占據主要比例，從而造成檢測準確性降低。
技術實現思路
1、本申請提供一種人源dna免疫組庫的引物組，所述引物組由seq?id?no：1-113的引物組成。
2、作為優選，所述seq?id?no：1的引物占比為3.22％，所述seq?idno：2-9的引物占比分別為1.61％，所述seq?id?no：10-113的引物占比分別為0.81％。
3、本申請還提供一種檢測人源dna免疫組庫的試劑盒，包括由seq?id?no：1-113的引物組成的引物組。
4、作為優選，所述seq?id?no：1的引物占比為3.22％，所述seq?idno：2-9的引物占比分別為1.61％，所述seq?id?no：10-113的引物占比分別為0.81％。
5、本申請還提供一種檢測人源dna免疫組庫的方法，包括以下步驟：1)核酸提取；2)一輪pcr擴增；3)第一輪pcr產物純化；4)末端修復；5)接頭連接；6)磁珠片段選擇；7)終文庫擴增；8)終文庫純化及質檢；9)ngs上機測序；10)檢測結果分析，其中，步驟2)使用由seq?idno：1-113的引物組成的引物組。
6、作為優選，所述步驟2)使用的引物組，所述seq?id?no：1的引物占比為3.22％，所述seq?id?no：2-9的引物占比分別為1.61％，所述seq?id?no：10-113的引物占比分別為0.81％。
7、作為優選，步驟6)先后使用75μl(0.75×)、20μl(0.2×)的磁珠進行片段選擇。
8、本申請所稱引物含量、占比等，均指引物的物質的量含量或占比。
9、與現有技術相比，本申請的技術方案具有至少以下優點之一：
10、覆蓋更全面，免疫組庫tcr?alpha具有多變性，正常機體內克隆類別比較豐富，本申請設計更多區域的引物以覆蓋可能產生的重組類型，引物覆蓋現今檢測到的所有tra區域。
11、在將多對特異性引物混合成一個反應體系，不同引物間的配對和競爭性均會影響整體的擴增效率。本申請針對某對或幾對引物擴增效率不佳的情況，通過調整引物比例的方法保證每個位點的檢測效果。
12、本申請通過調整磁珠純化比例，減少了實驗中出現的非特異性擴增。
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1.一種檢測人源DNA免疫組庫的引物組，其特征在于，所述引物組由SEQ?ID?NO：1-113的引物組成。
2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述SEQ?ID?NO：1的引物占比為3.22％，所述SEQ?ID?NO：2-9的引物占比分別為1.61％，所述SEQ?ID?NO：10-113的引物占比分別為0.81％。
3.一種檢測人源DNA免疫組庫的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，包括權利要求2所述的引物組。
5.一種檢測人源DNA免疫組庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：1)核酸提取；2)一輪PCR擴增；3)第一輪PCR產物純化；4)末端修復；5)接頭連接；6)磁珠片段選擇；7)終文庫擴增；8)終文庫純化及質檢；9)NGS上機測序；10)檢測結果分析，其中，步驟2)使用權利要求1的引物組。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)使用權利要求2的引物組。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟6)先后使用75μL(0.
...【技術特征摘要】
1.一種檢測人源dna免疫組庫的引物組，其特征在于，所述引物組由seq?id?no：1-113的引物組成。
2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述seq?id?no：1的引物占比為3.22％，所述seq?id?no：2-9的引物占比分別為1.61％，所述seq?id?no：10-113的引物占比分別為0.81％。
3.一種檢測人源dna免疫組庫的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，包括權利要求2所述的引物組。
【專利技術屬性】
技術研發人員：梁浩彬，金瑛，王勇斯，陳輝，黎彥伶，溫韻潔，李奎，裘宇容，
申請(專利權)人：廣州華銀醫學檢驗中心有限公司，
類型：發明
國別省市：
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