【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及免疫領(lǐng)域，特別是t細(xì)胞受體(tcr)，及其用途，特別是在預(yù)防、治療或檢測(cè)kras突變陽(yáng)性疾病和/或病癥中的用途。
技術(shù)介紹
1、ras基因家族包含nras、hras和kras三個(gè)基因，其編碼的是一種小型gtpase膜結(jié)合蛋白，在細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起主要作用。ras在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮核心作用：在分子水平上可以調(diào)控轉(zhuǎn)錄、翻譯等過(guò)程，在細(xì)胞水平上可以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡等等。
2、早在1982年，研究者們?cè)谌祟?lèi)膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了突變的ras基因，這使ras成為首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)腫瘤基因。其中，kras基因?qū)θ祟?lèi)癌癥影響最大，在激活狀態(tài)下，kras將來(lái)自細(xì)胞表面受體的上游信號(hào)傳遞給下游途徑，以控制正常的細(xì)胞功能和增殖。kras最常見(jiàn)的激活方式為點(diǎn)突變，是實(shí)體腫瘤中最常見(jiàn)的突變之一，位點(diǎn)幾乎都集中在2號(hào)外顯子的第12位密碼子上，最常見(jiàn)的類(lèi)型是g12d，g12v和g12c。
3、盡管kras突變?cè)谀[瘤中的重要作用已經(jīng)得到了廣泛共識(shí)，但是至今尚無(wú)靶向kras的藥物獲批上市。近年，專(zhuān)門(mén)針對(duì)kras?g12c突變的新型藥物取得了一些進(jìn)展：靶向kras的小分子藥物可直接抑制kras蛋白活性。kras蛋白廣泛表達(dá)，隨意抑制野生型和突變型kras蛋白可能會(huì)產(chǎn)生不可接受的毒性。直接抑制kras活性的另一種方法為干擾kras與脂膜外圍結(jié)合，同樣因?yàn)椴惶赡軈^(qū)分突變型蛋白與野生型蛋白，導(dǎo)致潛在的毒性問(wèn)題。kras蛋白可調(diào)節(jié)眾多下游效應(yīng)分子，主要有raf/mek/erk和pi3k/akt/mtor途徑。
4、大量研究結(jié)果提示kras突變抗原表位是一個(gè)可被tcr高效識(shí)別的靶點(diǎn)，kras突變抗原特異性tcr是一個(gè)值得期待的治療kras突變實(shí)體瘤的手段，開(kāi)發(fā)kras突變抗原特異性tcr-t產(chǎn)品具有重要的臨床意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供一種新型抗原結(jié)合蛋白，其特異性結(jié)合kras突變抗原，特別是kras?g12v突變表位或所述表位與mhc分子的復(fù)合物，例如kras?g12v突變表位與hla-a*11的復(fù)合物。本公開(kāi)的抗原結(jié)合蛋白可以是tcr或其抗原結(jié)合片段的形式。本公開(kāi)的抗原結(jié)合蛋白能夠以高親和力結(jié)合靶抗原肽，具有良好的表達(dá)穩(wěn)定性，和高度的膜穩(wěn)定性，并且能夠介導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)抗原陽(yáng)性靶細(xì)胞的特異性殺傷作用，且對(duì)不同分型的hla不具有同種異體反應(yīng)。
2、相應(yīng)地，在一方面，本公開(kāi)提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其包含t細(xì)胞受體(tcr)α鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的cdr3：avrdiegagnnrkli(seq?id?no:3)，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合包含氨基酸序列vvvgavgvgk(seq?id?no:11)的表位或所述表位與mhc分子的復(fù)合物。
3、在另一方面，本公開(kāi)提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其包含t細(xì)胞受體(tcr)α鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)，其中所述tcrβ鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的cdr3：assegfyteaf(seq?id?no:8)，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合包含氨基酸序列vvvgavgvgk(seq?id?no:11)的表位或所述表位與mhc分子的復(fù)合物。
4、在又一方面，本公開(kāi)提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其包含t細(xì)胞受體(tcr)α鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的cdr3：avrdiegagnnrkli(seq?id?no:3)，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體；并且所述tcrβ鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的cdr3：assegfyteaf(seq?id?no:8)，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合包含氨基酸序列vvvgavgvgk(seq?id?no:11)的表位或所述表位與mhc分子的復(fù)合物。
5、在一些實(shí)施方案中，所述mhc分子為hla-a*11型，例如，hla-a*11:01。
6、在一些實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白能以小于或等于約1.0*10^-7m的ec50與靶抗原肽結(jié)合。
7、在一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含具有如seq?id?no:3所示的氨基酸序列的cdr3，和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含具有如seq?id?no:8所示的氨基酸序列的cdr3。
8、在一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seq?id?no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體；和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:6、seq?idno:7和seq?id?no:8所示的氨基酸序列的β鏈cdr1、cdr2和cdr3，或者插入、缺失或取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所形成的功能變體。
9、在另一方面，本公開(kāi)提供了一種抗原結(jié)合蛋白，其包含t細(xì)胞受體(tcr)α鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seqidno:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:6、seq?id?no:7和seq?id?no:8所示的氨基酸序列的β鏈cdr1、cdr2和cdr3。
10、在一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seq?id?no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；并且所述tcrβ鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:6、seq?id?no:7和seq?id?no:8所示的氨基酸序列的β鏈cdr1、cdr2和cdr3。
11、在本公開(kāi)的抗原結(jié)合蛋白的一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含與seq?idno:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
12、在一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述tcrβ鏈可變區(qū)包含與seq?idno:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
13、在一些實(shí)施方案中，所述tcrα鏈可變區(qū)包含如seq?id?no:4所示的氨基酸序列，和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含如seq?id?no:9所示本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抗原結(jié)合蛋白，其包含T細(xì)胞受體(TCR)α鏈可變區(qū)和TCRβ鏈可變區(qū)，其中所述TCRα鏈可變區(qū)包含分別具有如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；和/或所述TCRβ鏈可變區(qū)包含分別具有如SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示的氨基酸序列的β鏈CDR1、CDR2和CDR3。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白具有下述性質(zhì)中的一種或多種：
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的抗原結(jié)合蛋白，其中所述TCRα鏈可變區(qū)包含與SEQ?IDNO:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ鏈可變區(qū)包含與SEQ?ID?NO:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述TCRα鏈可變區(qū)包含在第一多肽上，并且所述TCRβ鏈可變區(qū)包含在不同的第二多肽上；或
5.根據(jù)權(quán)利
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白選自TCR、嵌合抗原受體(CAR)、Fc多肽、或它們的抗原結(jié)合片段；
7.根據(jù)權(quán)利要求6的抗原結(jié)合蛋白，其中所述TCRα鏈恒定區(qū)包含與SEQ?IDNO:14-19中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ鏈恒定區(qū)包含與SEQ?ID?NO:21-30中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白還包含跨膜區(qū)和/或胞質(zhì)區(qū)；和/或
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包含以下的TCRα鏈：其包含與選自SEQ?ID?NO:32-37中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或以下的TCRβ鏈：其包含與選自SEQ?ID?NO:38-47中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
10.一種核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白；
11.一種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求10的核酸；
12.一種細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白、根據(jù)權(quán)利要求10的核酸、或根據(jù)權(quán)利要求11的載體。
13.一種制備權(quán)利要求12的細(xì)胞的方法，其包括用權(quán)利要求11的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟；
14.一種偶聯(lián)物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白和與所述抗原結(jié)合蛋白偶聯(lián)或綴合的活性劑。
15.一種組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白、根據(jù)權(quán)利要求10的核酸、根據(jù)權(quán)利要求11的載體、根據(jù)權(quán)利要求12的細(xì)胞、或根據(jù)權(quán)利要求13的方法制備的細(xì)胞；
16.一種試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白或根據(jù)權(quán)利要求14的偶聯(lián)物，所述試劑盒用于檢測(cè)待測(cè)樣品中陽(yáng)性表位的存在，其中，所述表位為包含VVVGAVGVGK(SEQ?ID?NO:11)的表位。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白、根據(jù)權(quán)利要求10的核酸、根據(jù)權(quán)利要求11的載體、根據(jù)權(quán)利要求12的細(xì)胞、根據(jù)權(quán)利要求13的方法制備的細(xì)胞、權(quán)利要求14的偶聯(lián)物、或權(quán)利要求15的組合物在制備用于治療和/或預(yù)防受試者中KRAS突變陽(yáng)性疾病和/或病癥的藥物中的用途；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗原結(jié)合蛋白，其包含t細(xì)胞受體(tcr)α鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seq?id?no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含分別具有如seq?id?no:6、seq?id?no:7和seq?id?no:8所示的氨基酸序列的β鏈cdr1、cdr2和cdr3。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白具有下述性質(zhì)中的一種或多種：
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的抗原結(jié)合蛋白，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含與seq?idno:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述tcrα鏈可變區(qū)包含在第一多肽上，并且所述tcrβ鏈可變區(qū)包含在不同的第二多肽上；或
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白是可溶的或膜結(jié)合的；和/或
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白選自tcr、嵌合抗原受體(car)、fc多肽、或它們的抗原結(jié)合片段；
7.根據(jù)權(quán)利要求6的抗原結(jié)合蛋白，其中所述tcrα鏈恒定區(qū)包含與seq?idno:14-19中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ鏈恒定區(qū)包含與seq?id?no:21-30中的任一項(xiàng)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的抗原結(jié)合蛋白，所述...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔣棟，謝興旺，翟佳慧，黨子懿，閆寶琪，王江華，李雅真，畢晶磊，史云強(qiáng)，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：北京可瑞生物科技有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
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