【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及獸用生物制品，特別涉及一株新型變異法氏囊病毒及其在卵黃抗體中的應用。
技術介紹
1、雞傳染性法氏囊病(ibd)是一種嚴重危害雛雞的免疫抑制性和高度接觸性傳染病。該病發病率高，病程短，既能直接抑制生長、增加死淘率，還會引起免疫抑制，影響其他疫苗的免疫效果，增加雞對其他病原的易感性，造成巨大的經濟損失。
2、研究發現，ibdv新型變異株不僅造成中樞免疫器官損傷和免疫抑制進而顯著影響生產性能，而且由于其抗原性與vvibdv有顯著差異進而導致有些針對vvibdv的抗體對其保護效果不理想。
3、經研究發現，新型變異法氏囊病目前尚無可以進行預防，現有市售的法氏囊病毒抗體無法對該病進行有效的防控。因此，急需一種安全高效能預防該法氏囊病毒的卵黃抗體。
技術實現思路
1、本專利技術旨在解決上述問題，提供了一株新型變異法氏囊病毒及其在卵黃抗體中的應用。
2、具體的，本申請提供的技術方案如下：
3、第一方面，本專利技術提供了一株新型變異法氏囊毒株，所述的新型變異法氏囊毒株rd230902a的保藏編號為cgmcc?no.45886。
4、第二方面，本專利技術提供了如第一方面所述的一株新型變異法氏囊毒株rd230902a在制備滅活疫苗中的應用。
5、第三方面，本專利技術提供了一種滅活疫苗，所述的滅活疫苗中的抗原包含了滅活的權利要求1所述的新型變異法氏囊毒株rd230902a。
6、進一步的，所述滅活疫苗的制備方
7、s1：將第一方面的新型變異法氏囊毒株rd230902a按照0.2ml/枚的劑量接種8日齡健康spf雞胚，棄去24h內死胚，收集48～120h內死亡雞胚尿囊液、絨毛尿囊膜、胚體，將絨毛尿囊膜和胚體混合，用破壁機粉碎后再與尿囊液混合，6000rpm離心10min，取上清儲存于-20℃備用；
8、s2：將s1所得病毒液加入10％甲醛溶液，37℃條件下攪拌滅活24小時；滅活后取樣進行滅活檢驗，置于2～8℃保存備用；
9、s3：按礦物油佐劑與滅活病毒液8：3(v/v)的比例配制抗原，取8份礦物油佐劑置高速剪切儀內，以15000r/min攪拌的同時，快速加入3份滅活病毒液，攪拌2分鐘使混合物充分乳化，乳化后，無菌操作分裝至250ml無菌瓶中，在瓶外壁注明名稱、制備時間、裝量等，置2～8℃保存。
10、第四方面，本專利技術提供了如第一方面所述的一株新型變異法氏囊毒株rd230902a在制備卵黃抗體中的應用。
11、第五方面，本專利技術提供了一種卵黃抗體，所述卵黃抗體是使用第一方面所述的新型變異法氏囊毒株rd230902a作為抗原制備所得的。
12、進一步的，所述卵黃抗體的制備方法如下：
13、s1：制備免疫蛋雞，收集高免蛋；
14、s2：蛋殼消毒，蛋黃分離；
15、s3：滅活ⅰ：將收集的蛋黃充分攪拌，使蛋黃呈均勻膏狀，加入與蛋黃等體積的滅菌注射用水，攪拌混勻后，60～65℃滅活30分鐘；
16、s4：酸化萃取：無菌的酸化罐中先加入原蛋黃體積7倍的滅菌注射用水，然后轉入滅活后的蛋黃液，邊加邊攪拌，待蛋黃液的溫度降至4℃時，保溫靜置過夜，直接抽取上清；
17、s5：滅活ii：在抽取的上清液中加入終濃度為0.1％的辛酸作滅活劑和萃提劑，攪拌，室溫放置2～6小時；
18、s6：濃縮：將加辛酸處理好的蛋黃液用孔徑為5μm和1μm的筒式濾芯過濾，再經截留分子量為100kd的中空纖維超濾柱進行濃縮2～4倍；
19、s7：滅活ⅲ：按終濃度為0.1％加入甲醛溶液，充分攪拌混勻，密閉滅活2小時；
20、s8：過濾除菌：調整溶液ph值為6.5～7.2，以0.45μm和0.22μm筒式濾芯過濾除菌；
21、s9：抗體效價測定：新型鴨呼腸孤病毒中和抗體效價不低于1:64；
22、s10：分裝：定量分裝，加蓋密封，2～8℃保存。
23、進一步的，s8：過濾除菌：調整溶液ph值為6.5～7.2，調整ph值后得到的卵黃抗體溶液澄清度和中和抗體效價菌具有良好的穩定性，而不調節ph得到的卵黃抗體溶液澄清度及抗體效價均不穩定。
24、進一步的，所述s1制備免疫蛋雞、收集高免蛋方法如下：
25、首次免疫每只雞頸部皮下注射1.0ml，15天后進行第二次免疫，每只雞頸部皮下注射2.0ml，二免后15天進行第三次免疫，每只雞頸部皮下注射2.0ml，三免后30天進行加強免疫，每只雞頸部皮下注射2.0ml，加強免疫之后15天，采集卵黃測定雞傳染性法氏囊病毒中和抗體效價不低于1：312時，收集高免蛋。
26、進一步的，所述卵黃抗體的使用方式為感染前預防和/或感染后治療。
27、進一步的，所述卵黃抗體的注射用量為0.5-1.5ml/只。
28、本專利技術具有如下有益效果：
29、1、本專利技術分離出一株致病性強的新型變異法氏囊毒株rd230902a，保藏編號為cgmcc?no.45886，使用該毒株制備的抗體具有良好的免疫效果。
30、2、本專利技術提供的利用新型變異法氏囊毒株rd230902a制備所得的卵黃抗體解決了現有技術中新型變異法氏囊病目前尚無可以進行預防的抗體/疫苗問題，對新型變異法氏囊病做出有效的防控。
31、3、本專利技術的卵黃抗體與現有技術的血清抗體相比，制備方法簡單，無需采血，只需采集免疫高免雞蛋卵黃純化即可純化得到卵黃抗體；穩定性好，治療效果顯著，生產方式簡便適合大規模生產與推廣應用。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一株新型變異法氏囊毒株，其特征在于，所述的新型變異法氏囊毒株RD230902A的保藏編號為CGMCC?No.45886。
2.如權利要求1所述的一株新型變異法氏囊毒株RD230902A在制備滅活疫苗中的應用。
3.一種滅活疫苗，其特征在于，所述的滅活疫苗中的抗原包含了滅活的權利要求1所述的新型變異法氏囊毒株RD230902A。
4.根據權利要求3所述的一種滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗的制備方法如下：
5.如權利要求1所述的一株新型變異法氏囊毒株RD230902A在制備卵黃抗體中的應用。
6.一種卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體是使用權利要求1中所述的新型變異法氏囊毒株RD230902A作為抗原制備所得的。
7.根據權利要求6所述的一種卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體的制備方法如下：
8.根據權利要求7所述的一種卵黃抗體，其特征在于，所述S1制備免疫蛋雞、收集高免蛋方法如下：
9.根據權利要求6所述的一種卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體的使用方式為感染前預防和/或感染后治
10.根據權利要求9所述的一種卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體的注射用量為0.5-1.5mL/只。
...【技術特征摘要】
1.一株新型變異法氏囊毒株，其特征在于，所述的新型變異法氏囊毒株rd230902a的保藏編號為cgmcc?no.45886。
2.如權利要求1所述的一株新型變異法氏囊毒株rd230902a在制備滅活疫苗中的應用。
3.一種滅活疫苗，其特征在于，所述的滅活疫苗中的抗原包含了滅活的權利要求1所述的新型變異法氏囊毒株rd230902a。
4.根據權利要求3所述的一種滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗的制備方法如下：
5.如權利要求1所述的一株新型變異法氏囊毒株rd230902a在制備卵黃抗體中的應用。
...【專利技術屬性】
技術研發人員：杜新永，劉長太，李曉娟，崔琳燦，孫先恒，
申請(專利權)人：青島潤達生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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