【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于細胞免疫治療，具體涉及靶向bcma的單域抗體、嵌合抗原受體及其應用。
技術介紹
1、多發性骨髓瘤(multiple?myeloma，mm)是一種單克隆漿細胞異常增殖的惡性疾病，其特征為骨髓漿細胞異常增生，分泌單克隆免疫球蛋白或其片段(m蛋白)，是血液系統常見惡性腫瘤，占血液系統惡性腫瘤的10％。mm常見的癥狀包括骨髓瘤相關器官功能損傷以及繼發淀粉樣變性等相關表現，過度分泌的免疫球蛋白以及不受控制的漿細胞引起患者的終末器官的損傷，最終導致患者的死亡。目前國內外已經有多個用于治療多發性骨髓瘤的car-t療法獲批，mm患者獲得了早期、深度持久的緩解，但是最終大部分會復發，因此如何增強car-t在多發性骨髓瘤中的安全性和療效是目前研究的重點。
2、bcma全稱為b細胞成熟抗原，也稱cd269，僅表達在成熟b細胞表面，是一種重要的b細胞生物標記物。在正常人體組織中，bcma蛋白和mrna幾乎只發現在漿細胞上，并且在漿細胞惡性轉化過程中選擇性地過度表達，促進腫瘤細胞生長、存活和耐藥性的發生。在多發性骨髓瘤中bcma的表達增加，促增殖信號增強，最終癌化。因此在多發性骨髓瘤細胞上bcma的表達水平顯著高于健康的漿細胞。無論是細胞系還是患者樣本，bcma在mm細胞表面的一致性上調和唯一性，使得bcma成為mm藥物發現和開發的一個引人注目的新靶點。
3、car是采用模塊設計的合成蛋白，包括抗原結合域(用于car分子設計的抗體的特異性至關重要)、連接區(鉸鏈區和跨膜區通常源自cd8或cd28，其長度和組成的差異會
4、鑒于此，持續開發用于多發性骨髓瘤的新療法，提高靶向bcma的car-t細胞(bcmacar-t)的治療效果及其安全性和有效性對于多發性骨髓瘤(mm)的預防和治療具有重要的臨床意義。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題是提供一種靶向bcma的單域抗體(bcma-vhh#81)、含有該單域抗體的(雙表位)嵌合抗原受體和/或含有所述嵌合抗原受體的修飾的免疫效應細胞，及其應用。所要解決的技術問題不限于所描述的技術主題，本領域技術人員通過以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術主題。
2、為解決上述技術問題，本專利技術首先提供了靶向bcma的單域抗體，名稱可為bcma-vhh#81，所述單域抗體包含氨基酸序列分別是seq?id?no.1的第179-186位的互補決定區cdr1、seq?id?no.1的第204-211位的互補決定區cdr2和seq?id?no.1的第250-260位的互補決定區cdr3。
3、所述互補決定區的序列根據kabat編號系統定義。
4、進一步地，所述單域抗體bcma-vhh#81可為下述任一種：
5、a1)氨基酸序列是seq?id?no.1的第154-271位的蛋白質；
6、a2)將seq?id?no.1的第154-271位所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與a1)所示的蛋白質具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白質；
7、a3)在a1)或a2)的n端和/或c端連接標簽或信號肽得到的具有相同功能的融合蛋白質。
8、本專利技術還提供了嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包括所述單域抗體bcma-vhh#81。
9、進一步地，所述嵌合抗原受體還包括第二單域抗體，名稱可為bcma-vhh#54，所述第二單域抗體bcma-vhh#54可為下述任一種：
10、b1)氨基酸序列是seq?id?no.1的第22-138位的蛋白質；
11、b2)將seq?id?no.1的第22-138位所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與b1)所示的蛋白質具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白質；
12、b3)在b1)或b2)的n端和/或c端連接標簽或信號肽得到的具有相同功能的融合蛋白質。
13、所述單域抗體bcma-vhh#81和所述第二單域抗體bcma-vhh#54可通過接頭(linker)連接。
14、所述單域抗體bcma-vhh#81可位于所述第二單域抗體bcma-vhh#54的n端或c端。在本專利技術的一個實施方案中，所述單域抗體bcma-vhh#81位于所述第二單域抗體bcma-vhh#54的c端。
15、所述接頭(linker)可為柔性肽接頭，例如包括甘氨酸、絲氨酸、脯氨酸和/或賴氨酸殘基的肽接頭。所述肽接頭可由1-40個氨基酸組成。
16、進一步地，所述接頭(linker)包括但不限于：(g)n、(s)n、(gxs)n、(sxg)n、(gssgg)n、(ggsgg)n、(gsggsg)n、(gsgsgs)n、(ggqgg)n、(eaaak)n和iegrmd，以及它們的各種組合。其中：n可以是1-10之間的任何整數；x可以是1-6之間的任何整數。在本專利技術的一個實施方案中，所述接頭為(ggggs)3。
17、上述單域抗體bcma-vhh#81和第二單域抗體bcma-vhh#54共同構成所述嵌合抗原受體的抗原結合區。
18、進一步地，所述嵌合抗原受體的抗原結合區從n端到c端依次可為單域抗體bcma-vhh#81、接頭、第二單域抗體bcma-vhh#54，其含有2種不同的抗bcma單域抗體，可以靶向識別腫瘤抗原bcma的兩個不同表位，因此也可稱為雙表位單域抗體(bcma-vhh#54-vhh#81)。所述雙表位單域抗體的氨基酸序列可如seq?id?no.1的第22-271位所示。含有所述雙表位單域抗體的嵌合抗原受體也可稱為雙表位嵌合抗原受體(雙表位car)。
19、進一步地，所述嵌合抗原受體還包括鉸鏈區、跨膜區、細胞內信號區和cd27。
20、所述鉸鏈區位于跨膜區的n端和抗原結合區的c端，可來源于cd8a(cd8α)、cd4、cd5、cd7、cd28、cd134、cd137、icos、igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igd、ige或igm的鉸鏈區。
21、所述跨膜區可來源于t細胞受體的α、β或ζ鏈、cd8a(cd8α)、cd4、cd9、cd45、cd16、cd19、cd22、cd28、cd28t、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd152或cd154的跨膜結構域。
22、所述細胞內信號區可包含激活結構域和/或共刺激結構域。所述激活結構域可來源本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.靶向BCMA的單域抗體，其特征在于，所述單域抗體包含氨基酸序列分別是SEQIDNo.1的第179-186位的互補決定區CDR1、SEQ?ID?No.1的第204-211位的互補決定區CDR2和SEQ?ID?No.1的第250-260位的互補決定區CDR3。
2.根據權利要求1所述的單域抗體，其特征在于，所述單域抗體為下述任一種：
3.嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括權利要求1或2所述的單域抗體。
4.根據權利要求3所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括第二單域抗體，所述第二單域抗體為下述任一種：
5.根據權利要求3或4所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括鉸鏈區、跨膜區、細胞內信號區和CD27。
6.根據權利要求3-5中任一所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述鉸鏈區和跨膜區來源于CD8a或CD28。
7.根據權利要求3-6中任一所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體為下述任一種：
8.生物材料，其特征在于，所述生物材料為下述任一種：>
9.根據權利要求8所述的生物材料，其特征在于，所述核酸分子為下述任一種：
10.修飾的免疫效應細胞，其特征在于，所述修飾的免疫效應細胞包含權利要求1或2所述的單域抗體、權利要求3-7中任一所述的嵌合抗原受體、或權利要求8或9中所述的核酸分子。
11.根據權利要求10所述的修飾的免疫效應細胞，其特征在于，所述免疫效應細胞包括T細胞、NK細胞、NKT細胞、γδT細胞、αβT細胞、調節性T細胞、MAIT細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、外周血單核細胞和單核細胞。
12.權利要求1或2所述的單域抗體、權利要求3-7中任一所述的嵌合抗原受體、權利要求8或9所述的生物材料、或權利要求10或11所述的修飾的免疫效應細胞在制備具有如下任一種功能的產品中的用途：
13.權利要求1或2所述的單域抗體或編碼權利要求1或2所述單域抗體的核酸分子的下述任一種用途：
...【技術特征摘要】
1.靶向bcma的單域抗體，其特征在于，所述單域抗體包含氨基酸序列分別是seqidno.1的第179-186位的互補決定區cdr1、seq?id?no.1的第204-211位的互補決定區cdr2和seq?id?no.1的第250-260位的互補決定區cdr3。
2.根據權利要求1所述的單域抗體，其特征在于，所述單域抗體為下述任一種：
3.嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括權利要求1或2所述的單域抗體。
4.根據權利要求3所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括第二單域抗體，所述第二單域抗體為下述任一種：
5.根據權利要求3或4所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括鉸鏈區、跨膜區、細胞內信號區和cd27。
6.根據權利要求3-5中任一所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述鉸鏈區和跨膜區來源于cd8a或cd28。
7.根據權利要求3-6中任一所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊鑫，朱建高，楊文君，
申請(專利權)人：浙江康佰裕生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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