【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程，尤其涉及大豆轉錄因子gmerf13及其應用。
技術介紹
1、本部分的陳述僅僅是提供了與本專利技術相關的
技術介紹
信息，不必然構成在先技術。
2、大豆不僅是一種重要的糧食作物，還是一種重要的油料作物。大豆富含豐富的蛋白質和油脂，其油脂含量高達20％以上。大豆油是人民日常生活中不可或缺的食用油之一。大豆，古人稱之為“菽”，五谷之一。
3、氮素是植物生長發育所必需的重要營養元素之一，它是植物體內蛋白質與核酸等生物大分子的重要組成部分。此外，一部分植物激素例如生長素，細胞分裂素等也是含氮化合物，它們對植物生長發育過程起著促進的作用。自然界中，供植物可以利用的氮素形態有限，僅包括硝態氮(no3-)、銨態氮(nh4+)以及尿素。植物不能直接利用空氣中豐富的氮元素。當前，農業生產主要通過大量施用氮肥來提高作物產量，使用氮肥不僅耗費大量的能源，也造成了嚴重的生態環境污染。如何通過植物自身提升其利用氮的能力是目前研究的重點。
4、gmerf13基因屬于ap2/erf轉錄因子。目前已發現，ap2/erf轉錄因子的典型特征是具有ap2/ereb(apetala2/ethylene?responsive?element?binding?factor)結構域，由40-70個保守氨基酸的組成。ap2/erf家族轉錄因子已成為各種脅迫反應的關鍵調節因子，在這些反應中，它們也對激素做出響應，從而提高植物在多種非生物脅迫條件下的存活率。但目前關于gmerf13基因對植物耐鹽、固氮、結瘤過程中的影響還尚不可
技術實現思路
1、為克服上述現有技術的不足，本專利技術提出了一種大豆轉錄因子gmerf13及其應用。本專利技術中通過將gmerf13基因在大豆williams?82(w82)品種中敲除，證明了gmerf13cr突變體比w82野生型獲得更強抗鹽脅迫能力、固氮能力，在鹽脅迫下更好調控根瘤表型，為在鹽脅迫條件下培育高效固氮的大豆品種提供了參考基因和理論支持。
2、為實現上述目的，本專利技術的一個或多個實施例提供了如下技術方案：
3、本專利技術的第一方面，提供大豆轉錄因子gmerf13在如下任意一種或多種中的應用：
4、1)提高植物抵抗鹽脅迫的能力中的應用；
5、2)提高植物固氮能力；
6、3)緩解鹽脅迫下植物根結瘤抑制中的應用；
7、4)促進根系發育或提升植物生物量中的應用；
8、所述gmerf13的編碼序列如seq?id?no.1所示；
9、所述gmerf13的編碼序列還可以是與seq?id?no.1表達相同氨基酸序列的其他核酸序列；
10、優選的，所述植物為大豆。
11、seq?id?no.1：
12、atggccaccacaatatcttgtgatttctcttcaatggaatctattcaacactatcttcttgagcctgaacacgattccaacgctctcatgaacatttccaaccacgaagtttgctattctgcaacgtacaatgcattcccaagccctacgttcagcttggagggtgtcgtccatgatgcaaacgattccttagcatgcaaaagagaacaccctagggaggagcgtgaagttcacgcgccaccggtatggaagcattaccggggtgtgaggcgtaggacttggggcaagttcgcggcagagataagggatccaaagaagaatggtgcaaggatttggctaggcacttatgaaactgaagaagcagcgggtttagcttatgatagagctgctttcaaaatgcgtggcagcaaagctaagttaaattttcctcatctcattggctctcacgcgcctccgcagccagtgagagtgacaaaggctttgaagcgaaactcgccagagaagaggaaaaatttggctgacttgttaaacaggttggccaagaatagaagccaaatacttatacaggtgcttgaaatgggtttacatgcaaattatgtcaatgttgaacaatggtag
13、在本專利技術的具體實施方式中，所述應用為抑制大豆轉錄因子gmerf13表達后獲得；
14、進一步，所述抑制大豆轉錄因子gmerf13表達通過crispr/cas9敲除gmerf13基因、rna干擾或藥物抑制gmerf13的基因或蛋白實現；
15、優選的，通過crispr/cas9敲除gmerf13基因實現。
16、本專利技術中，大豆gmerf13基因敲除后，在鹽脅迫下，根瘤數目抑制的幅度明顯降低。
17、本專利技術的第二方面，提供一組敲除gmerf13基因的sgrna，所述sgrna的核酸序列如seq?id?no.2-4所示。
18、seq?id?no.2：aagccctacgttcagcttgg(sgrna1)；
19、seq?id?no.3：taggacttggggcaagttcg(sgrna2)；
20、seq?id?no.4：ttgcagaatagcaaacttcg(sgrna3)。
21、本專利技術的第三方面，提供一種載體，所述載體包含所述的sgrna。
22、在本專利技術的具體實施方式中，所述載體還包括能夠在植物細胞和大腸桿菌中表達的雙元表達載體；
23、優選的，所述雙元表達載體為pges401。
24、本專利技術的第四方面，提供一種宿主，所述宿主包含上述第三方面的載體；
25、所述宿主細胞可以為原核細胞或真核細胞。
26、更具體的，所述宿主細胞是細菌細胞、真菌細胞或植物細胞中的任意一種或多種；
27、其中所述細菌細胞為埃希氏菌屬、農桿菌屬、芽孢桿菌屬、鏈霉菌屬、假單胞菌屬或葡萄球菌屬內的任何種；
28、更具體的，所述細菌細胞為大腸桿菌(如大腸桿菌dh5α)、根癌農桿菌(如eha105)、發根農桿菌、乳酸乳球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌或熒光假單胞菌。
29、所述真菌細胞包括酵母菌；
30、優選的，所述宿主包括大腸桿菌、根癌農桿菌或非可再生植物部分。
31、本專利技術的第五方面，提供上述的sgrna、載體或宿主在如下任意一種或多種中的應用；
32、1)提高植物抵抗鹽脅迫的能力中的應用；
33、2)提高植物固氮能力；
34、3)緩解鹽脅迫下植物根結瘤抑制中的應用；
35、4)促進根系發育或提升植物生物量中的應用；
36、優選的，所述植物為大豆。
37、本專利技術的第六方面，提供一種提高植物抵抗鹽脅迫的能力的方法，包括在植物中抑制gmerf13表達；
38、或，向植物中導入本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.大豆轉錄因子GmERF13在如下任意一種或多種中的應用：
2.如權利要求1中所述應用，其特征在于，所述應用為抑制大豆轉錄因子GmERF13表達后獲得；
3.一組敲除GmERF13基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核酸序列如SEQ?ID?NO.2-4所示。
4.一種載體，其特征在于，所述載體包含權利要求3所述的sgRNA。
5.如權利要求4所述的載體，其特征在于，所述載體還包括能夠在植物細胞和大腸桿菌中表達的雙元表達載體；
6.一種宿主，其特征在于，所述宿主包含權利要求5中所述的載體；
7.權利要求3所述的sgRNA、權利要求5所述的載體或權利要求6所述的宿主在如下任意一種或多種中的應用；
8.一種提高植物抵抗鹽脅迫的能力的方法，其特征在于，在植物中抑制GmERF13表達；
9.一種提高植物固氮能力的方法，其特征在于，在植物中抑制GmERF13表達；
10.一種緩解鹽脅迫下植物根結瘤抑制或促進根系發育或提升植物生物量的方法，其特征在于，在植物中抑制GmERF1
...【技術特征摘要】
1.大豆轉錄因子gmerf13在如下任意一種或多種中的應用：
2.如權利要求1中所述應用，其特征在于，所述應用為抑制大豆轉錄因子gmerf13表達后獲得；
3.一組敲除gmerf13基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna的核酸序列如seq?id?no.2-4所示。
4.一種載體，其特征在于，所述載體包含權利要求3所述的sgrna。
5.如權利要求4所述的載體，其特征在于，所述載體還包括能夠在植物細胞和大腸桿菌中表達的雙元表達載體；
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