【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及人類皰疹病毒免疫療法。具體地，本專利技術(shù)涉及重組蛋白，其包括源自多種人巨細(xì)胞病毒(cmv)或愛潑斯坦-巴爾(epstein-barr)病毒(ebv)抗原的多個細(xì)胞毒性t細(xì)胞表位，其中當(dāng)在免疫治療中使用時能夠引發(fā)細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答，而不僅限于此。
技術(shù)介紹
1、愛潑斯坦-巴爾病毒以極高的發(fā)病率存在，超過90％的成年人顯示出一定的暴露跡象。ebv還作為一種終身潛伏感染持續(xù)存在以及可以是無癥狀的。然而，ebv可導(dǎo)致單核細(xì)胞增多癥，也被稱為腺熱，其在一些個體中導(dǎo)致顯著的發(fā)病率。ebv可與若干自身免疫疾病相關(guān)，如狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥。重要的是，已知ebv與許多癌癥有關(guān)，如鼻咽癌(npc)、伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。npc是常見于中國和東南亞人群的癌癥(在大多數(shù)其它人群中罕見)。因為在早期階段的癥狀難以識別，所以患者常呈現(xiàn)中級(第三期)或晚期(iv期)疾病。診斷為鼻咽癌的患者首選是放療和化療，很有限地選擇手術(shù)。放/化療對大多數(shù)患者有效，但是大約20％的人或者有不良應(yīng)答或者復(fù)發(fā)，此組具有不良預(yù)后。呈現(xiàn)ⅲ和ⅳ期腫瘤的患者僅具有50至60％(低于單獨ⅳ期患者)的5年總生存率。npc最常見的形式是與ebv相關(guān)聯(lián)，這使得這些腫瘤易于通過靶向并殺死ebv感染的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫治療。
2、在健康個體中的原發(fā)性cmv一般無癥狀、建立偶有再活化并從粘膜表面脫落的潛伏狀態(tài)。在某些情況下，原發(fā)性cmv感染伴隨有單核細(xì)胞增多癥樣疾病的臨床癥狀，類似于epstein-barr病毒所引起的癥狀。在兩個重要的臨床情況中cm
3、初次暴露至cmv導(dǎo)致強烈的初級免疫應(yīng)答，其保持為長期記憶應(yīng)答以便在再活化后用來限制病毒復(fù)制。現(xiàn)在有可靠證據(jù)表明體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答在控制cmv感染中起到至關(guān)重要的作用。在鼠cmv模型中進(jìn)行的研究提供t細(xì)胞免疫重要性上的初始證據(jù)，其中的t細(xì)胞功能喪失與增加的病毒感染再活化和傳播是一致的(reddehase,weiland等人，1985；mutter,reddehase等人，1988)。此外，病毒特異性t細(xì)胞免疫重建與從急性病毒感染恢復(fù)是一致的。在不同臨床環(huán)境下人類隨訪研究中進(jìn)一步強調(diào)病毒特異性t細(xì)胞的作用。這些研究表明，抗病毒t細(xì)胞免疫不足的異源干細(xì)胞移植患者表現(xiàn)出患cmv相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險增加。對細(xì)胞免疫在控制cmv疾病中作用的可信服證據(jù)來自這種研究，其中在異源干細(xì)胞移植患者中供體來源cmv特異性cd8+t細(xì)胞的過繼轉(zhuǎn)移不僅恢復(fù)抗原特異性細(xì)胞免疫而且也預(yù)防cmv相關(guān)的臨床并發(fā)癥(riddell,watanabe等人，1992；walter,greenberg等人，1995)。
4、鑒于這些研究，多種cmv疫苗已經(jīng)在臨床前和臨床試驗中進(jìn)行評估。
5、這些cmv疫苗策略已經(jīng)評估了糖蛋白b(gb)、pp65和ie-1作為潛在的靶，并通過多個遞送平臺將其遞送，這些遞送平臺包括減毒cmvtowne株(jacobson,sinclair等人，2006)，編碼全長抗原和表位的重組病毒載體(bernstein,reap等人，2009；zhong?andkhanna2009)、dna(wloch,smith等人，2008)、致密體(frankenberg,pepperl-klindworth等人，2002)、和亞基(drulak,malinoski等人，2000)疫苗。然而，這些方法沒有顯示出令人信服的臨床療效，因而并沒有進(jìn)入臨床實踐。
6、典型地，已經(jīng)提出，為了引發(fā)保護(hù)性的、cd8+細(xì)胞毒性的t細(xì)胞應(yīng)答，病毒抗原必須以核酸形式(例如，使用病毒載體遞送系統(tǒng))而不是以外源遞送蛋白形式進(jìn)行遞送，以使得表達(dá)蛋白質(zhì)被正確處理并提呈至t細(xì)胞(koup&douek,2012)。這些疫苗遞送平臺中的大多數(shù)，特別是減毒活疫苗以及基于病毒載體的疫苗，已經(jīng)提出了一些監(jiān)管問題，如覺察到的長期理論健康風(fēng)險(liu；soderberg-naucler?2006；anderson和schneider?2007)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)解決對使用安全遞送技術(shù)的皰疹病毒免疫療法開發(fā)的需要。本專利技術(shù)涉及降低發(fā)育中胎兒和免疫損傷個體(例如固體器官和造血干細(xì)胞移植接受者和晚期hiv疾病感染者)的cmv相關(guān)損傷的風(fēng)險。本專利技術(shù)還涉及治療如在免疫受損移植患者中、或在預(yù)防或治療ebv相關(guān)癌癥如鼻咽癌(npc)中存在的ebv感染的癥狀。
2、本專利技術(shù)意想不到地發(fā)現(xiàn)，與過去的假設(shè)相反，施用給個體的外源多表位蛋白可引發(fā)保護(hù)性、cd8+細(xì)胞毒性t細(xì)胞應(yīng)答。
3、因此，本專利技術(shù)廣義地涉及分離的多表位蛋白，其包括能夠引發(fā)細(xì)胞毒性t細(xì)胞應(yīng)答的多個人類皰疹病毒細(xì)胞毒性t細(xì)胞(ctl)表位。
4、在第一個方面，分離的蛋白包括來自兩個或更多不同皰疹病毒抗原的多個ctl表位的每個各自的氨基酸序列，所述分離的蛋白還包括在至少兩個所述ctl表位之間的干擾氨基酸或氨基酸序列，所述氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶體釋放氨基酸或氨基酸序列，以及任選地，與抗原處理相關(guān)的轉(zhuǎn)運子(transporter)(tap)識別基序，其中所述分離的蛋白作為外源蛋白施用給動物時能夠引發(fā)細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。
5、在一些實施方案中，提供一種分離的蛋白，其包括來自兩個或更多不同皰疹病毒抗原的多個ctl表位的每個的各自氨基酸序列，還包括在至少兩個所述ctl表位之間的干擾氨基酸或氨基酸序列，所述干擾氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶體釋放氨基酸或氨基酸序列，以及任選地，與抗原處理相關(guān)的轉(zhuǎn)運子(tap)識別基序，其中所述分離的蛋白作為外源蛋白施用給動物時能夠引發(fā)細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。
6、適當(dāng)?shù)兀蛛x的蛋白包含選擇表位以提供人類群體的廣泛覆蓋。這些包括hla?i類特異性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-b44、-b51、-b57和-b58。
7、在一些實施方案中，所述表位限制到hla-ⅰ類特異性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種蛋白，所述蛋白包括由i)來自皰疹病毒的兩個或更多個不同的抗原的多個CTL表位和ii)干擾氨基酸序列組成的氨基酸序列，其中至少兩個所述CTL表位通過一個干擾氨基酸序列隔開，所述干擾氨基酸序列由a)包括AD、K和/或R的一個或兩個氨基酸序列，以及任選地b)與抗原處理相關(guān)的轉(zhuǎn)運子(TAP)識別基序序列組成，其中所述蛋白作為外源蛋白施用給動物時能夠引發(fā)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述CTL表位限制到HLA-Ⅰ類特異性HLA-A1、-A2、-A3、-A11、-A23、-A24、-A26、-A29、-A30、-B7、-B8、-B27、-B35、-B38、-B40、-B41、-B44、-B51、-B57和/或-B58。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括來自巨細(xì)胞病毒(CMV)或愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV)的至少一個CTL表位。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白，其中所述蛋白包括以來自巨細(xì)胞病毒(CMV)的至少一個CTL表位，并且至少一個CMV?CTL表位源自pp50、pp65、pp150和/或IE-1。<...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種蛋白，所述蛋白包括由i)來自皰疹病毒的兩個或更多個不同的抗原的多個ctl表位和ii)干擾氨基酸序列組成的氨基酸序列，其中至少兩個所述ctl表位通過一個干擾氨基酸序列隔開，所述干擾氨基酸序列由a)包括ad、k和/或r的一個或兩個氨基酸序列，以及任選地b)與抗原處理相關(guān)的轉(zhuǎn)運子(tap)識別基序序列組成，其中所述蛋白作為外源蛋白施用給動物時能夠引發(fā)細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述ctl表位限制到hla-ⅰ類特異性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-b44、-b51、-b57和/或-b58。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括來自巨細(xì)胞病毒(cmv)或愛潑斯坦-巴爾病毒(ebv)的至少一個ctl表位。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白，其中所述蛋白包括以來自巨細(xì)胞病毒(cmv)的至少一個ctl表位，并且至少一個cmv?ctl表位源自pp50、pp65、pp150和/或ie-1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述至少一個ctl表位具有選自由seq?id?no:1-21所示的氨基酸序列組成的組的氨基酸序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq?id?no:1-13所示的ctl表位氨基酸序列的每一個。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq?id?no:11所示的ctl表位氨基酸序列。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白，其中所述至少一個ctl表位包括至少一個ebv?ctl表位，所述至少一個ebv?ctl表位源自選自由以下組成的組的抗原：bmlf1、lmp2a、brlf1、lmp2、ebna3a、bzlf1、ebna3c、ebna1和ebna3b。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蛋白，其中所述至少一個ctl表位具有選自由seq?id?no:22-41所示的氨基酸序列組成的組的氨基酸序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq?id?no:49所示的氨基酸序列。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，其中所述tap識別基序序列具有式：(r/n:i/q:w/y)n，其中n為大于或等于1的任意整數(shù)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，所述蛋白包括二十(20)個以下的ctl表位。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的蛋白，所述蛋白包括十(10)個、十一(11)個、十二(12)個、十三(13)個、十四(14)個、十五(15)個、十六(16)個、十七(17)個、十八(18)個或十九(19)個ctl表位。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：R·康納，D·維賈延德拉，
申請(專利權(quán))人：昆士蘭醫(yī)學(xué)研究所理事會，
類型：發(fā)明
國別省市：
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