【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體涉及一種檢測肝病標記物chi3l1的樣品墊處理液。
技術介紹
1、肝纖維化是慢性肝病的一個病理過程，也是肝炎向肝硬化和肝癌發展的重要階段，由于肝硬化和肝癌難以治愈的，所以早期監測肝纖維化，將肝病控制在纖維化階段，可避免其發展到肝硬化和肝癌的的嚴重階段。
2、殼多糖酶3樣蛋白1（chi3l1，簡稱殼酶蛋白）是一種含383個氨基酸，在炎癥和組織重塑中起重要作用。chi3l1在肝臟中高度特異表達且可能直接參與肝纖維化的形成和維持。在肝纖維化過程中，chi3l1的濃度與肝纖維化的進展速度呈現正相關。因此，chi3l1作為一種高靈敏度和高特異性的肝纖維化分期和診斷的血清檢測標志物。
3、目前，市面檢測chi3l1的方法包括熒光免疫層析法、磁微粒化學發光法、酶聯免疫吸附法和膠體金法等。
4、而在膠體金法中，是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學中抗原抗體能夠特異性結合原理，達到檢測的目的。膠體金法通過膠體金試紙來實現上述檢測目的，膠體金試紙中的試紙條由樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜(nc膜)和吸水墊組成，各部分銜接粘貼在pvc底板上。樣品墊是試紙條的重要組成部分，樣品墊用于接收檢測樣品，使樣品均勻分布，還能起到預過濾的作用。樣品墊的物理性質、化學成分、處理方式等都會對膠體金試紙條檢測產生重要影響。樣品墊在使用前一般需要經過樣品墊處理液的處理。因此，樣品墊處理液具有重要作用，會影響膠體金試紙條在檢測時的靈敏度和特異性。
5、綜上，研發一種能提高膠體金試紙條靈敏度的樣品墊處理液是
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種檢測肝病標記物chi3l1的樣品墊處理液，提高膠體金試紙條檢測chi3l1的靈敏度。
2、為解決上述技術問題，本專利技術提供了一種樣品墊處理液，包含緩沖液、封閉劑和表面活性劑。
3、優選的，表面活性劑包括一種非離子雙子表面活性劑，該非離子雙子表面活性劑由甲醇、麥芽糖、戌二酸酐和2-羥基丁酸制備得到。
4、優選的，表面活性劑的添加量為1-2wt%。
5、優選的，樣品墊處理液的ph為7.0-8.0。
6、優選的，緩沖液包含tris-hcl緩沖液、磷酸鹽pb緩沖液、硼酸鹽緩沖液中的至少一種。
7、優選的，緩沖液的濃度為0.1m-1m。
8、優選的，封閉劑包含酪蛋白、牛血清白蛋白（bsa）中的至少一種。
9、優選的，封閉劑的添加量為0.1-1wt%。
10、本專利技術一實施例中，該非離子雙子表面活性劑的制備步驟包括：
11、合成甲醇麥芽糖苷。稱取甲醇、麥芽糖和磷酸進行反應，反應完成后進行過濾，收集濾液，在濾液中加入naoh溶液，調節濾液的ph至中性，然后蒸餾除去甲醇，得到甲醇麥芽糖苷。
12、優選的，甲醇、麥芽糖和磷酸以質量比10-1000：10-500：1-10的比例使用。
13、優選的，反應條件為：真空，100-120℃。
14、優選的，naoh濃度為0.1-1m。
15、優選的，蒸餾條件為：100-120℃，1-5kpa。
16、合成甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯。稱取甲醇麥芽糖苷、戌二酸酐和對甲苯甲酸進行反應，反應完成后，加入naoh溶液，調節ph至中性，真空干燥，過濾，收集濾液，得到甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯。
17、優選的，甲醇麥芽糖苷、戌二酸酐和對甲苯甲酸以質量比100-500：100-500：1-10的比例使用。
18、優選的，反應條件為：100-120℃。
19、優選的，naoh濃度為0.1-1m。
20、合成非離子雙子表面活性劑。稱取甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯、2-羥基丁酸和對甲苯甲酸進行反應，反應完成后，用乙醇洗滌，靜置分層，加入naoh溶液，調節ph至中性，真空干燥后，加入甲醇溶解，經洗滌、分離提純后得到純的非離子雙子表面活性劑。
21、優選的，甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯、2-羥基丁酸和對甲苯甲酸以質量比10-100：100-500：1-10的比例使用。
22、優選的，反應條件為：100-120℃，反應4-8h。
23、優選的，naoh濃度為0.1-1m。
24、更優選的，非離子雙子表面活性劑的具體制備步驟如下：
25、合成甲醇麥芽糖苷，以質量比10-1000：10-500：1-10的比例稱取甲醇、麥芽糖和磷酸，然后把反應溫度控制在100-120℃，并保持反應體系真空。采用斐林試劑確定反應是否到達終點，確定反應完全后，進行過濾，收集濾液，待濾液溫度下降到60-80℃左右，在濾液中加入0.1mol/l的naoh溶液，調節濾液的ph至中性。然后在100-120℃，1-5kpa條件下用旋轉蒸發器蒸餾除去甲醇，得到甲醇麥芽糖苷。
26、合成甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯，以質量比100-500：100-500：1-10的比例稱取甲醇麥芽糖苷、戌二酸酐和對甲苯甲酸，然后把反應溫度控制在100-120℃，反應一段時間后，根據是否有水生成來判斷反應是否達到終點，反應結束后，冷卻到60-80℃，然后加入0.1mol/l的naoh溶液，調節ph至中性，真空干燥，過濾，收集濾液，得到甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯。
27、合成非離子雙子表面活性劑，以質量比10-100：100-500：1-10的比例稱取甲醇麥芽糖苷戌二酸雙酯、2-羥基丁酸和對甲苯甲酸，然后把溫度控制在100-120℃，反應4-8h后，用乙醇洗滌，除去過量的2-羥基丁酸，靜置分層，然后加入0.1mol/l的naoh溶液，調節ph至中性，真空干燥后，加入甲醇溶解，經洗滌、分離提純后得到純的非離子雙子表面活性劑。非離子雙子表面活性劑有良好的潤濕作用，使抗原蛋白容易被潤濕，實現與標記的膠體金特異性結合。當非離子雙子表面活性劑在上述樣品墊處理液中的添加量為1-2%時，能改善膠體金的釋放情況，能促進標記的膠體金的釋放，減少nc膜對標記的膠體金的吸附。
28、本專利技術一實施例中，樣品墊的處理步驟包括：
29、將樣品墊浸泡在上述樣品墊處理液中，浸泡4-8h后取出樣品墊，在30-40℃烘箱干燥8-16h。
30、與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：本專利技術提供了一種非離子雙子表面活性劑，該非離子雙子表面活性劑具有較好的潤濕作用，能使抗原蛋白與標記的膠體金實現特異性結合。本專利技術還提供了一種樣品墊處理液，樣品墊處理液中包括1-2wt%非離子雙子表面活性劑和1-5wt%?α-甲基-d-甘露糖苷，將樣品墊用該樣品墊處理液處理后，組裝成用于檢測肝病標記物chi3l1的膠體金試紙條時，由于1-2wt%非離子雙子表面活性劑能促進標記的膠體金的釋放，減少nc膜對標記的膠體金的吸附，1-5wt%?α-甲基-d-甘露糖苷通過和蛋白結合，對蛋白起到保護作用，最終使得膠體金試紙條在檢測時具有較好的檢測靈敏度。
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1.一種樣品墊處理液，包括緩沖液、封閉劑和表面活性劑，其特征在于，所述表面活性劑包括一種非離子雙子表面活性劑，所述非離子雙子表面活性劑由甲醇、麥芽糖、戌二酸酐和2-羥基丁酸制備得到。
2.根據權利要求1所述的樣品墊處理液，其特征在于，所述樣品墊處理液的pH為7.0-8.0；所述緩沖液包含Tris-HCl緩沖液、磷酸鹽PB緩沖液、硼酸鹽緩沖液中的至少一種；所述封閉劑包含酪蛋白、牛血清白蛋白中的至少一種。
3.根據權利要求1所述的樣品墊處理液，其特征在于，所述緩沖液的濃度為0.1-1M；所述封閉劑的添加量為0.1-1wt%；所述表面活性劑的添加量為1-2wt%。
4.一種非離子雙子表面活性劑的制備方法，包括如下步驟：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，甲醇、麥芽糖和磷酸以質量比10-1000：10-500：1-10的比例使用。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，甲醇麥芽糖苷、戌二酸酐和對甲苯甲酸以質量比100-500：100-500：1-10的比例使用。
7.根據權利要求4所述的制備方法，
8.一種樣品墊，其特征在于，所述樣品墊采用如權利要求1-3任一項所述的樣品墊處理液進行處理。
9.根據權利要求8所述的樣品墊，其特征在于，所述樣品墊的處理包括：
10.權利要求8所述的樣品墊在檢測肝病標記物CHI3L1的膠體金試紙中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種樣品墊處理液，包括緩沖液、封閉劑和表面活性劑，其特征在于，所述表面活性劑包括一種非離子雙子表面活性劑，所述非離子雙子表面活性劑由甲醇、麥芽糖、戌二酸酐和2-羥基丁酸制備得到。
2.根據權利要求1所述的樣品墊處理液，其特征在于，所述樣品墊處理液的ph為7.0-8.0；所述緩沖液包含tris-hcl緩沖液、磷酸鹽pb緩沖液、硼酸鹽緩沖液中的至少一種；所述封閉劑包含酪蛋白、牛血清白蛋白中的至少一種。
3.根據權利要求1所述的樣品墊處理液，其特征在于，所述緩沖液的濃度為0.1-1m；所述封閉劑的添加量為0.1-1wt%；所述表面活性劑的添加量為1-2wt%。
4.一種非離子雙子表面活性劑的制備方法，包括如下步驟：
5.根據權利要求4所述的制...
【專利技術屬性】
技術研發人員：請求不公布姓名，
申請(專利權)人：杭州普望生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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