【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及基因工程，更具體的說是丹參漆酶基因smlac25和smlac64及其應用。
技術介紹
1、丹參(salvia?miltiorrhiza)作為中國傳統中藥，具有活血調經、涼血消癰、清心安神的作用，是一種常用大宗中藥材，臨床上多用于治療腦血管疾病，有“一味丹參，共同四物”的美譽。目前，丹參的藥效物質已基本明了，丹參中所含的藥用成分主要以水溶性的酚酸類化合物和脂溶性的醌類化合物為主，除此之外還有少量黃酮等其他種類化合物。自上世紀80年代以來，我國科研工作者先后從丹參中分得丹參素、丹酚酸a、b、c、d、e、f、g、迷迭香酸、紫草酸、原紫草酸等多種酚酸類化合物。之后經過各國科研工作者的共同努力，又從丹參同屬植物中得到丹酚酸h、i、j、k、l1、l2、鼠尾草香豆素等化合物。丹酚酸類化合物(salvianolic?acids)是丹參活血化瘀的主要功效成分，具有抗血小板聚集、抗血栓、改善微循環、促進組織恢復、清除自由基和抗脂質過氧化等多種藥理活性。
2、但關于丹酚酸類化合物的生物合成途徑，僅明確到迷迭香酸的合成，迷迭香酸下游其它酚酸類成分如丹酚酸e等的生物合成途徑尚不明確，而丹酚酸e對心腦血管疾病的治療具有很好的效果，同時對心肌細胞、肝臟等具有保護功能，已被廣泛應用于臨床。
3、因此如何尋找一種丹酚酸e生物合成途徑中的關鍵酶以及相關基因，促進丹酚酸的合成，是本領域技術人員亟需解決的技術問題。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了丹參漆酶基因smlac2
2、為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、丹參漆酶基因smlac25和smlac64，所述基因smlac25編碼的蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no:3所示；所述基因smlac64編碼的蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no:4所示。
4、作為優選的技術方案，所述基因smlac25的核苷酸序列如seq?id?no:1所示；所述基因smlac64的核苷酸序列如seq?id?no:2所示。
5、seq?id?no:1
6、atgaagtttctcatcgtgtatttttcgttgctttttttcatatgtggctttgtagcagttcatggaaagatcctaagacagagatttgtgttacaagatgccccatacacacgattgtgcggcagtaagagcatattaaccgtgaacggaaaatttcccgggcccaccatatatgcgagagtgggagacacagtaattgtggacgtcatcaacagagctagtgaaaatattactattcactggcatggggtgaaacagccaagaaacccatggtcagatgggccggcttacataacccagtgcccgatccgaccgggaactaatttcagccaaagaatcgtgttgtctgatgaaatcgggactctatggtggcacgctcacatcgaatggtttcgcgctactgtctatggtgctctcgttgttttacctaacttgggagatcaatatcccttccctaaacctgctgccgaaattcccatcatattaggagaatggtggaacagtgatattagggaagttctgagggaaggccttcaaagcggatcggattttaatgcatctaatgctttcctcatcaatggtcaacctggagatctatatccttgttccaactcagatacattcaaagtgaaagtggactctggcaaaacatacctacttcgaatgatcaacaatgtgatgaacaacatcatgttcttcaaaatcgccaaccacaacctcaccgtagtcggctccgacgccgcctacacgaagccgttcacggccgagtacgtggcaatatctccgggccaaaccatagatgtcttgttcgtagccaaccaacaaccaagccactattacatggcctctcggccccacaacgtcgccgggaacttcgccaacacgaccacaaccgccatcctcgagtacaccggaaactacacggcaccctcgtctcctctcctccccaccctccccgactttgcagacgaggtcgcctctgacagtttcacagcacggctgcgaagcttagcgacagaggctcaccccattgacgtccctcaaacagtggacaaggagcttctgtttaccctctcggtaaacatattcgaatgcgctctaaacgagacttgcaacggaccgttgcaaggccggttcagaacgagcctcaacaacataacgttcgtgcagccaagaatctccattcttgatgcctattataaccgtgttaacggagtctacgaggaagatttccctcagaatccgcctttcccgttcaactacacgatggagttcgtgccacagctgctatggatacctcaaaatgggacagaagttagagtggtggagtataatacttcagtagagcttgtcttccaaggaacaaacattcttggtgggacataccatcctatgcatctccatggctacagcttctatgtggtcggaagaggcaacggaaactttgaccgggaaagggacccttccagctataatcttgtcgatcctcctctgcagaacaccattgcagttccaagaaacgggtggacagcgattaggttcaaggcgaataatccaggtgtttggcttctgcattgccatctggagcgccacgtgacctggggaatggagatggcgttcatcgtcagagagggaaagagccaagacgctaagatgctgcctccacctgcagacatgcccagatgctaa。
7、seq?id?no:2
8、atgttttcttataggaagcttaaggttttcatcctatgcttcttaggtattattatgctcggaggcatgggtccagtccatgctttagttcataagtttgaggtgagaagatcttcacacaccaggctatgcagcaccaaaagcatgttaacagtaaacgggcagttcccagggccaactatatatgctagaaggggagaattggtggtaatcgatgttatcaatcgcgccgatgcaaatataagtatccattg本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.丹參漆酶基因SmLAC25和SmLAC64，其特征在于，所述基因SmLAC25編碼的蛋白質的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；所述基因SmLAC64編碼的蛋白質的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。
2.根據權利要求1所述的丹參漆酶基因SmLAC25和SmLAC64，其特征在于，所述基因SmLAC25的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；所述基因SmLAC64的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。
3.丹參漆酶SmLAC25和SmLAC64，其特征在于，所述丹參漆酶SmLAC25的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；所述丹參漆酶SmLAC64的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。
4.一種含有權利要求1或2所述SmLAC25和/或SmLAC64丹參漆酶基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料為表達盒、表達載體、克隆載體、宿主細胞和/或工程菌。
5.權利要求1或2所述基因或權利要求4所述生物材料的應用，其特征在于，所述應用為以下任意一種：
6.權利要求3所述的丹參漆酶SmLAC25和/或SmL
7.一種提高生物體內丹酚酸E含量的方法，其特征在于，將權利要求1或2所述的丹參漆酶基因SmLAC25和/或SmLAC64導入到生物體內，以獲得過表達丹參漆酶基因SmLAC25和/或SmLAC64的生物體，進而生物體內丹酚酸E的含量得到提高。
8.根據權利要求7所述的提高生物體內丹酚酸E含量的方法，其特征在于，所述生物體為微生物或植物。
9.一種體外制備丹酚酸E的方法，其特征在于，采用權利要求3所述的丹參漆酶SmLAC25和/或SmLAC64催化迷迭香酸生成丹酚酸E。
10.根據權利要求9所述的體外制備丹酚酸E的方法，其特征在于，反應體系如下：500μL反應體系中含有0.2-0.6mM?Cu2+，20-50μg純化的蛋白，100-200μM底物迷迭香酸，15-30mMpH為6.0-7.5醋酸緩沖液補足500μL；反應條件為25-30℃，120rpm，振蕩反應2-4h后，加入等體積的甲醇終止反應。
...【技術特征摘要】
1.丹參漆酶基因smlac25和smlac64，其特征在于，所述基因smlac25編碼的蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no:3所示；所述基因smlac64編碼的蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no:4所示。
2.根據權利要求1所述的丹參漆酶基因smlac25和smlac64，其特征在于，所述基因smlac25的核苷酸序列如seq?id?no:1所示；所述基因smlac64的核苷酸序列如seq?id?no:2所示。
3.丹參漆酶smlac25和smlac64，其特征在于，所述丹參漆酶smlac25的氨基酸序列如seq?id?no:3所示；所述丹參漆酶smlac64的氨基酸序列如seq?id?no:4所示。
4.一種含有權利要求1或2所述smlac25和/或smlac64丹參漆酶基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料為表達盒、表達載體、克隆載體、宿主細胞和/或工程菌。
5.權利要求1或2所述基因或權利要求4所述生物材料的應用，其特征在于，所述應用為以下任意一種：
6.權...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧善發，李彩麗，姜茂昌，
申請(專利權)人：中國醫學科學院藥用植物研究所，
類型：發明
國別省市：
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