【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及細(xì)菌藥敏快檢，尤其是涉及一種增菌培養(yǎng)基及其制備方法與應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、近年來，隨著家禽養(yǎng)殖規(guī)模和數(shù)量的迅猛增長，細(xì)菌性疾病帶來的危害越來越大，疾病表現(xiàn)也越來越復(fù)雜，與此同時，細(xì)菌的耐藥性越來越普遍，多重耐藥屢見不鮮，耐藥菌株的廣泛傳播給臨床治療帶來了很大的困難。針對以上細(xì)菌耐藥問題，開發(fā)簡單、快捷、低成本、結(jié)果易判定的新型細(xì)菌藥敏快檢技術(shù)勢在必行。目前，家禽細(xì)菌病有效治療藥物的篩選主要依靠專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的藥敏試驗(yàn)，但是，家禽常見細(xì)菌性病原中，特別是多殺性巴氏桿菌、鴨疫里默氏桿菌等細(xì)菌營養(yǎng)要求較為嚴(yán)苛，臨床較難分離和培養(yǎng)，現(xiàn)有的商品化培養(yǎng)基單獨(dú)使用會造成某些細(xì)菌病原的漏檢，因此，實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)往往需要配制2至3種培養(yǎng)基來處理病料，這雖能給臨床用藥提供具體且準(zhǔn)確的指導(dǎo)，但送檢時間長，費(fèi)用高。另一方面，實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)篩選出的藥物養(yǎng)殖場未必有，也不一定能及時買到，導(dǎo)致實(shí)際生產(chǎn)中很難每次發(fā)生疾病都進(jìn)行送檢，養(yǎng)殖戶依然盲目用藥，從而影響了治療效果，養(yǎng)殖場混合感染日趨嚴(yán)重。有效藥物選擇困難，造成治愈率低和藥費(fèi)損失。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)目的是提供一種增菌培養(yǎng)基及其制備方法與應(yīng)用，開發(fā)的一種簡單、快捷、低成本、用于可視化藥敏檢測，實(shí)現(xiàn)家禽細(xì)菌性病原有效治療藥物的現(xiàn)場快速精準(zhǔn)篩選。
2、本專利技術(shù)提供了一種增菌培養(yǎng)基，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨15.0-20.0份、蛋白胨3.5-5.5份、葡萄糖1.5-3.5份、酵母浸膏5.0-6.5份、磷酸氫二鉀2.0-2
3、優(yōu)選的，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨18.0份、蛋白胨4.3份、葡萄糖2.0份、酵母浸膏5.5份、磷酸氫二鉀2.2份、磷酸氫二鈉2.5份、磷酸二氫鉀1.2份、氯化鈉5.0份、蛋白胨15.0份、牛心浸粉17.5份、大豆蛋白胨10.0份、0.1％nad(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)2.0份、56℃滅活30min的新生犢牛血清50份、甘露醇2.6份、丙酮酸鈉4.4份、放線菌酮0.25份、0.05％溴麝香草酚藍(lán)0.8-2.0份、0.1％亞甲基藍(lán)2.5-4.5份、蒸餾水1000份，ph值為7.2。
4、本專利技術(shù)提供了一種增菌培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：
5、s1、按照特定比例將胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、酵母浸膏、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、蛋白胨、牛心浸粉、大豆蛋白胨、甘露醇、丙酮酸鈉、放線菌酮加至蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，冷卻到室溫后，調(diào)節(jié)ph值至6.8-7.5得到配制好的溶液；將配制好的溶液在高壓滅菌，冷卻至室溫得到培養(yǎng)基液體；
6、s2、稱取煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，完全溶解于滅菌純化水中，用0.22微米濾膜過濾；吸取濾液加入到步驟s1得到的培養(yǎng)基液體中，混勻；
7、s3、新生犢牛血清經(jīng)滅活，用0.22微米濾膜過濾；吸取過濾后的血清加入步驟s2所得培養(yǎng)基液體中，混勻；
8、s4、稱取溴麝香草酚藍(lán)，加0.05m氫氧化鈉溶解后，用滅菌純化水定容，配制成0.05％溶液；用0.22微米濾膜過濾；稱取亞甲基藍(lán)，溶于滅菌純化水，并用滅菌純化水定容，配制成0.1％溶液；用0.22微米濾膜過濾；分別吸取溴麝香草酚藍(lán)濾液和亞甲基藍(lán)濾液加入到步驟s3所得培養(yǎng)基液體中，混勻，4℃保存。
9、本專利技術(shù)提供了一種增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用。
10、增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用，包括以下步驟：
11、s1、采樣品，根據(jù)臨床癥狀采集病料樣本；
12、s2、加藥物，選擇幾種擬篩查的治療藥物，分別標(biāo)記；處理后加入對應(yīng)的藥物篩查管中；
13、s3、加樣本，各種樣本以適當(dāng)?shù)姆绞郊尤氲胶Y查管中；
14、s4、培養(yǎng)檢測，將篩查管放于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h后觀察結(jié)果，不加樣品和藥物的陰性對照管和只加樣品不加藥物的樣品對照管同步培養(yǎng)。
15、優(yōu)選的，所述步驟s1中，消化道癥狀采集肛拭子或糞便；呼吸道癥狀采集鼻咽拭子；死亡家禽采集病變明顯的組織或臟器；步驟s2中，粉末狀藥物先用純凈水稀釋成藥物治療劑量的10倍，再吸取1.0ml加入到對應(yīng)的藥物篩查管中；液體藥物直接吸取1.0ml加入到對應(yīng)的藥物篩查管中；步驟s3中，組織滲出液樣品吸取0.1-0.2ml加入到篩查管中；糞便、臟器和組織取黃豆粒大小加入到篩查管中。
16、優(yōu)選的，陰性對照管無褪色或變色；樣品對照管褪色且渾濁，表明樣品中有病原菌；有效藥物藥物篩查管顏色與陰性對照管一致，無褪色或變色。
17、因此，本專利技術(shù)采用上述的一種增菌培養(yǎng)基及其制備方法與應(yīng)用，本培養(yǎng)基使用方便，不限定使用環(huán)境，可用于養(yǎng)殖現(xiàn)場、獸藥、飼料及疫苗經(jīng)銷商門店、實(shí)驗(yàn)室等環(huán)境使用。其單增菌效果優(yōu)于目標(biāo)菌各自的選擇性增菌液。該培養(yǎng)基能夠?qū)崿F(xiàn)家禽常見致病菌如大腸桿菌、沙門氏菌、變形桿菌、克雷伯氏菌、金黃色葡萄球菌、多殺性巴氏桿菌、鏈球菌、鴨疫里默氏桿菌以及魏氏梭菌的快速增殖，在與非目標(biāo)菌共存情況下，培養(yǎng)3-16h后各菌的濃度均從10cfu/ml增至105cfu/ml以上，菌濃度有4個數(shù)量級的增加，增菌效果良好。
18、下面通過附圖和實(shí)施例，對本專利技術(shù)的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
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1.一種增菌培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨15.0-20.0份、蛋白胨3.5-5.5份、葡萄糖1.5-3.5份、酵母浸膏5.0-6.5份、磷酸氫二鉀2.0-2.5份、磷酸氫二鈉2.0-3.5份、磷酸二氫鉀1.0-1.5份、氯化鈉2.5-7.5份、蛋白胨12.0-18.0份、牛心浸粉15.0-22.0份、大豆蛋白胨8.0-12.0份、0.1％NAD煙酰胺腺嘌呤二核苷酸1.0-5.0份、56℃滅活30min的新生犢牛血清30-100份、甘露醇2.0-4.0份、丙酮酸鈉3.0-5.0份、放線菌酮0.23-0.45份、0.05％溴麝香草酚藍(lán)0.8-2.0份、0.1％亞甲基藍(lán)2.5-4.5份、蒸餾水1000份，pH值為6.8-7.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增菌培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨18.0份、蛋白胨4.3份、葡萄糖2.0份、酵母浸膏5.5份、磷酸氫二鉀2.2份、磷酸氫二鈉2.5份、磷酸二氫鉀1.2份、氯化鈉5.0份、蛋白胨15.0份、牛心浸粉17.5份、大豆蛋白胨10.0份、0.1％NAD煙酰胺腺嘌呤二核苷酸2.0
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述的一種增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述的一種增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述步驟S1中，消化道癥狀采集肛拭子或糞便；呼吸道癥狀采集鼻咽拭子；死亡家禽采集病變明顯的組織或臟器；步驟S2中，粉末狀藥物先用純凈水稀釋成藥物治療劑量的10倍，再吸取1.0mL加入到對應(yīng)的藥物篩查管中；液體藥物直接吸取1.0mL加入到對應(yīng)的藥物篩查管中；步驟S3中，組織滲出液樣品吸取0.1-0.2mL加入到篩查管中；糞便、臟器和組織取黃豆粒大小加入到篩查管中。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種增菌培養(yǎng)基在篩查家禽細(xì)菌性疾病有效治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于：陰性對照管無褪色或變色；樣品對照管褪色且渾濁，表明樣品中有病原菌；有效藥物藥物篩查管顏色與陰性對照管一致，無褪色或變色。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種增菌培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨15.0-20.0份、蛋白胨3.5-5.5份、葡萄糖1.5-3.5份、酵母浸膏5.0-6.5份、磷酸氫二鉀2.0-2.5份、磷酸氫二鈉2.0-3.5份、磷酸二氫鉀1.0-1.5份、氯化鈉2.5-7.5份、蛋白胨12.0-18.0份、牛心浸粉15.0-22.0份、大豆蛋白胨8.0-12.0份、0.1％nad煙酰胺腺嘌呤二核苷酸1.0-5.0份、56℃滅活30min的新生犢牛血清30-100份、甘露醇2.0-4.0份、丙酮酸鈉3.0-5.0份、放線菌酮0.23-0.45份、0.05％溴麝香草酚藍(lán)0.8-2.0份、0.1％亞甲基藍(lán)2.5-4.5份、蒸餾水1000份，ph值為6.8-7.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增菌培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料包括：胰蛋白胨18.0份、蛋白胨4.3份、葡萄糖2.0份、酵母浸膏5.5份、磷酸氫二鉀2.2份、磷酸氫二鈉2.5份、磷酸二氫鉀1.2份、氯化鈉5.0份、蛋白胨15.0份、牛心浸粉17.5份、大豆蛋白胨10.0份、0.1％nad煙酰胺腺嘌呤二核苷酸2.0份、56℃滅活30min的新生犢牛血清50份、甘露醇2.6份、丙酮酸鈉4.4份、放線菌酮0.25份、0.05％溴麝香草酚...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：倪宏波，張曉軒，馬赫，劉瑞，溫建新，
申請(專利權(quán))人：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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