【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及農(nóng)業(yè)害蟲防治，具體涉及沙蔥螢葉甲hsp基因及其在生物防治中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、沙蔥螢葉甲galeruca?daurica屬鞘翅目(coleoptera)葉甲科(chrysomelidae)螢葉甲亞科(galerucinae)，據(jù)報(bào)道該蟲現(xiàn)主要分布于俄羅斯、蒙古國、朝鮮、韓國以及中國的內(nèi)蒙古自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)、甘肅省等地。幼蟲主要取食百合科(liliaceae)蔥屬allium植物，是一種典型的草地害蟲。
2、熱激蛋白(heat?shockprotein,hsp)是一類受到外界刺激后在生物體內(nèi)迅速合成的蛋白。主要負(fù)責(zé)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，促進(jìn)變性蛋白質(zhì)修復(fù)。hsps在沙蔥螢葉甲的生長和發(fā)育中具有溫度敏感性，并且能夠?qū)Νh(huán)境變化做出及時(shí)的反應(yīng)，以維持昆蟲體內(nèi)的正常生理狀態(tài)。沙蔥螢葉甲以卵在極寒條件下越冬，幼蟲的生長發(fā)育也受到低溫環(huán)境的影響，hsp的適時(shí)表達(dá)提高了昆蟲的抗寒能力，參與了一系列的代謝調(diào)節(jié)和保護(hù)機(jī)制，提高昆蟲在寒冷環(huán)境中的生存能力，從而保證了其種群的快速繁衍，這種環(huán)境適應(yīng)性是維持其種群數(shù)量穩(wěn)定的重要生存策略。對于沙蔥螢葉甲而言，在天然草原極端惡劣、多變的低溫環(huán)境下，其昆蟲體內(nèi)蛋白質(zhì)與酶等的構(gòu)象和活性容易受到破壞，hsps在修復(fù)和穩(wěn)定這些生理活性分子方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，hsps基因在昆蟲對外界極端環(huán)境的適應(yīng)性當(dāng)中扮演著重要角色，因此在許多研究中常作為昆蟲響應(yīng)高低溫變化的分子指示標(biāo)記。
3、rna干擾(rna?interference，rnai)是一種由短片段rnas(sirnas)
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是為了解決上述問題，提供沙蔥螢葉甲hsp基因及其在生物防治中的應(yīng)用。
2、為了達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：
3、本專利技術(shù)提供了沙蔥螢葉甲hsp基因及其在生物防治中的應(yīng)用，所述兩種沙蔥螢葉甲hsp基因分別為gdhsp10與gdhsp60基因，核酸序列為seq?id?no:1和no:2所示。
4、在上述方案的基礎(chǔ)上，通過rna干擾的方式，沉默沙蔥螢葉甲hsp基因，從而降低沙蔥螢葉甲的抗寒能力，使其難以在低溫下存活，最終干擾沙蔥螢葉甲的正常生長發(fā)育導(dǎo)致其死亡。
5、根據(jù)seq?id?no:1和no:2設(shè)計(jì)上下游引物，經(jīng)pcr擴(kuò)增獲得沙蔥螢葉甲hsp基因的rna干擾序列片段，核苷酸序列如seq?id?no:3和no:4所示。
6、進(jìn)一步利用相關(guān)試劑盒，根據(jù)相應(yīng)的干擾序列片段合成dsrna。本專利技術(shù)提供沙蔥螢葉甲hsp基因的rna干擾序列片段合成的dsrna。
7、該dsrna在沙蔥螢葉甲防治中的應(yīng)用，注射dsrna到沙蔥螢葉甲2齡幼蟲腹部第8節(jié)段腹節(jié)，dsrna可特異性地沉默靶標(biāo)基因mrna表達(dá)，使用熱電偶法測定靶基因沉默后沙蔥螢葉甲2齡幼蟲的過冷卻點(diǎn)與結(jié)冰點(diǎn)。結(jié)果顯示：注射dsrna后各處理組靶基因的表達(dá)量較對照組有不同程度的降低，低溫脅迫耐受性也受到不同程度的影響，尤其是當(dāng)dsgdhsp10和dsgdhsp60共同作用時(shí)干擾效果最顯著。
8、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方案的有益效果：
9、(1)本專利技術(shù)獲得了沙蔥螢葉甲hsp基因、沙蔥螢葉甲hsp基因rna干擾序列片段以及沙蔥螢葉甲hsp基因rna干擾序列片段合成的dsrna，并提供了將dsrna用于沙蔥螢葉甲防治的生物學(xué)防治方法，通過rna干擾的方式特異性地沉默靶標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而降低沙蔥螢葉甲的抗寒能力，使其難以在低溫下存活，以達(dá)到害蟲防治的目的。
10、(2)本專利技術(shù)利用沙蔥螢葉甲的hsp基因，開發(fā)了能夠用于沙蔥螢葉甲防治的生物學(xué)防治方法，這種防治方法具有高度特異性，不影響非靶標(biāo)生物，對環(huán)境友好，能通過天然途徑降解為核酸，可針對草原有害生物進(jìn)行開發(fā)和應(yīng)用，為農(nóng)業(yè)和生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展提供了一條全新的解決途徑，促進(jìn)了以rnai為核心的害蟲防治技術(shù)的實(shí)踐和發(fā)展，具有很好的研發(fā)和應(yīng)用前景。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種沙蔥螢葉甲HSP基因，其特征是：核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1和NO:2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙蔥螢葉甲Hsp基因的RNA干擾序列片段，其特征是：核苷酸序列為SEQ?ID?NO:3和NO:4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的沙蔥螢葉甲Hsp基因的RNA干擾序列片段合成的dsRNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的dsRNA在沙蔥螢葉甲防治中的應(yīng)用。
5.一種防沙蔥螢葉甲的方法，其特征是：通過RNA干擾的方式，沉默沙蔥螢葉甲Hsp基因，降低沙蔥螢葉甲抗寒能力，使其難以在低溫下存活，增加了沙蔥螢葉甲的死亡率，以達(dá)到害蟲防治目的。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種沙蔥螢葉甲hsp基因，其特征是：核苷酸序列為seq?id?no:1和no:2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙蔥螢葉甲hsp基因的rna干擾序列片段，其特征是：核苷酸序列為seq?id?no:3和no:4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的沙蔥螢葉甲hsp基因的rna...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：譚瑤，張宏玲，孫飛龍，高霞，袁帥，李玲，李艷艷，韓海斌，楊佳樂，云曉鵬，杜磊，
申請(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。