【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其涉及七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用及其分子機制的研究方法和應用。
技術介紹
1、七十味珍珠丸（ranasampel，rnsp）是我國沿用歷史悠久的名貴藏藥，具有鎮定安神、活血通絡、調理氣血、開竅醒神之功效。臨床常用于缺血性腦卒中、腦震蕩、神經血管性頭痛、面癱、阿爾茨海默病等疾病，但在糖尿病認知功能障礙的研究未見報道。此外，佐太作為七十味珍珠丸的主要組方成分之一，是很多名貴藏藥的重要原料。在藏醫藥理論指導下，佐太中的水銀經炮制加工后不但消除了劇毒，而且具有神奇的療效。研究表明，佐太在復方藥物中具有增強諸藥療效的作用，但其增效作用的起效形式和機制還未明確。
技術實現思路
1、針對上述存在的問題，本專利技術旨在提供七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用及其分子機制的研究方法和應用，基于轉錄組學技術，通過對差異基因功能富集分析、關鍵靶點篩選免疫組化實驗等技術，研究分析了七十味珍珠丸中主要組分佐太在治療糖尿病認知功能障礙中的可能機制。
2、為了實現上述目的，本專利技術所采用的技術方案如下：
3、七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用，具體為七十味珍珠丸通過調節關鍵靶點kdr、tek、flt1、edn1、col18a1、agt和itga6實現對認知功能障礙的調節。
4、更加具體的，七十味珍珠丸通過提高kdr、tek、flt1、edn1、col18a1、agt和itga6的表達改善認知功能障礙。
5、進一步的，本
6、s1：使用七十味珍珠丸原藥和不含佐太的減方七十味珍珠丸分別喂養實驗動物，同時設置模型組和對照組進行對照；
7、s2：通過轉錄測序進行差異基因篩選；
8、s3：通過ppi網絡分析和hub基因鑒定，確定七十味珍珠丸和減方七十味珍珠丸調節實驗動物海馬組織的關鍵靶點；
9、s4：免疫組化檢測關鍵靶點蛋白的表達情況。
10、具體的，步驟s3中ppi網絡分析包括stress、radiality、closeness、epc、degree、mcc、mnc七個參數分析。
11、具體的，七十味珍珠丸調節實驗動物海馬組織關鍵靶點包括kdr、tek、flt1、edn1、col18a1、agt、itga6；減方七十味珍珠丸調節實驗動物海馬組織的關鍵靶點包括spp1、kdr、edn1。
12、具體的，步驟s4中，七十味珍珠丸組與模型組相比，實驗動物海馬ca3區和dg區的flt1、edn1、agt、itga6表達升高；減方七十味珍珠丸組與模型組相比，實驗動物海馬ca3區和dg區的edn1和spp1表達升高。
13、進一步的，本專利技術還包括檢測flt1、edn1、agt和itga6水平的試劑在制備診斷認知功能障礙的產品中的應用。
14、具體的，所述產品包括試劑盒和熒光探針。
15、本專利技術的有益效果是：
16、本專利技術基于轉錄組學技術，通過生物信息學篩選關鍵靶點、免疫組化實驗驗證，探討了七十味珍珠丸和減方七十味珍珠丸在治療糖尿病認知功能障礙中的可能機制；結果發現，七十味珍珠丸原藥組和減方七十味珍珠丸組共有的關鍵通路包括神經活性配體-受體相互作用、腎素分泌、鈣信號通路等，關鍵靶點篩選與免疫組化結果顯示，與模型組相比原藥組小鼠海馬ca3區和dg區flt1、edn1、agt、itga6的平均積分光密度更高（p<0.05或p<0.01），減方七十味珍珠丸組小鼠海馬ca3區和dg區edn1和spp1的表達與模型組相比顯著升高（p<0.01），但對flt1、agt、itga6靶點無明顯調節作用。由此可得，七十味珍珠丸通過改善db/db小鼠海馬flt1、edn1、agt、itga6的表達，對db/db小鼠認知功能障礙起到緩解作用，而且本專利技術中還對減方七十味珍珠丸與原藥的藥效基礎進行了初步對比，發現兩者在關鍵靶點和調節通路上存在一定的差異。
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1.七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用，其特征在于：七十味珍珠丸通過調節關鍵靶點Kdr、Tek、Flt1、Edn1、Col18a1、Agt和Itga6實現對認知功能障礙的調節。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：七十味珍珠丸通過提高Kdr、Tek、Flt1、Edn1、Col18a1、Agt和Itga6的表達改善認知功能障礙。
3.如權利要求1所述七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用的分子機制研究方法，其特征在于，包括以下步驟，
4.根據權利要求3所述的研究方法，其特征在于：步驟S3中PPI網絡分析包括Stress、Radiality、Closeness、EPC、Degree、MCC、MNC七個參數分析。
5.根據權利要求4所述的研究方法，其特征在于：七十味珍珠丸調節實驗動物海馬組織關鍵靶點包括Kdr、Tek、Flt1、Edn1、Col18a1、Agt、Itga6；減方七十味珍珠丸調節實驗動物海馬組織的關鍵靶點包括Spp1、Kdr、Edn1。
6.根據權利要求5所述的研究方法，其特征在于：步驟S4中，七十味珍
7.檢測Flt1、Edn1、Agt和Itga6水平的試劑在制備診斷認知功能障礙的產品中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述產品包括試劑盒和熒光探針。
...【技術特征摘要】
1.七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用，其特征在于：七十味珍珠丸通過調節關鍵靶點kdr、tek、flt1、edn1、col18a1、agt和itga6實現對認知功能障礙的調節。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：七十味珍珠丸通過提高kdr、tek、flt1、edn1、col18a1、agt和itga6的表達改善認知功能障礙。
3.如權利要求1所述七十味珍珠丸在認知功能障礙調節中的應用的分子機制研究方法，其特征在于，包括以下步驟，
4.根據權利要求3所述的研究方法，其特征在于：步驟s3中ppi網絡分析包括stress、radiality、closeness、epc、degree、mcc、mnc七個參數分析。
5.根據權利要...
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