【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，尤其涉及到一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因glu16a-1、突變葡聚糖酶及其在麥糟中的應用。
技術介紹
1、β-葡聚糖是葡萄糖結構單元以β-糖苷鍵連接而成的一類非淀粉類多糖，廣泛存在于高等植物、真菌、細菌等生物體中。β-葡聚糖酶能催化β-葡聚糖分解成具有益生元價值的可溶性寡糖，在工業、農業及醫療領域具有重要應用價值。而β-1,3-1,4-葡聚糖酶(ec3.2.1.6)屬于β-葡聚糖酶并且能專一性地水解β-葡聚糖中的β-1,3-1,4-糖苷鍵。啤酒釀造過程中產生的富含β-葡聚糖的麥糟的綠色高值轉化一直是一個難題，使用β-葡聚糖酶進行降解并轉化成益生寡糖是一種經濟高效的手段。
2、疏棉狀嗜熱絲孢菌(thermomyces?lanuginosus)發酵啤酒麥糟可以產生寡糖，并且其分泌酶的耐高溫特性使得在工業中具有一定的應用前景。在麥糟發酵中被特異性誘導2種β-1,3-1,4-葡聚糖酶，其中分泌量較高的是gh16家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶glul6a(gil301070474)。故如何高效地利用β-1,3-1,4-葡聚糖酶，使其在工業、農業及醫療領域發揮重要應用價值值得我們重點關注。
技術實現思路
1、本專利技術提供了一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因glu16a-1、突變葡聚糖酶及其在麥糟中的應用。研究發現，該突變葡聚糖酶在降解燕麥來源的葡聚糖和啤酒氣爆麥糟方面發揮著重要應用。實驗證明，所得突變葡聚糖酶活性可達到110iu/mg，
2、為了達到上述目的，本專利技術提供了一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因glu16a-1，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
3、作為優選，由其核苷酸編碼的蛋白質序列如seq?id?no.2所示。
4、作為優選，所述突變基因glu16a-1的突變位點為v147s。
5、本專利技術還提供了一種含有突變基因glu16a-1的重組載體的構建方法，包括以下步驟：
6、獲取β-1,3-1,4-葡聚糖酶glu16a基因，將其與質粒pet22b(+)連接，獲得pet22b-glu16a重組質粒，所得重組質粒的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；
7、以上述重組質粒為模板，設計v147s，即glu16a-1的突變引物，進行定點突變，以獲得含有突變基因glu16a-1的重組載體。
8、作為優選，突變引物的序列如下：
9、v147s-sense：accacatgtcactccacaccagcgatggt
10、v147s-antisense：tgtggagtgacatgtggttgaaggtatt
11、本專利技術還提供了一種含有上述任一項技術方案所述的突變基因glu16a-1的突變葡聚糖酶glu16a-v147s，突變基因glu16a-1的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
12、本專利技術還提供了一種根據上述技術方案所述的突變葡聚糖酶glu16a-v147s在降解燕麥來源的葡聚糖中的應用，突變基因glu16a-1的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
13、作為優選，相比于野生型葡聚糖酶wt，突變葡聚糖酶的酶活性是其1.15倍。
14、本專利技術還提供了一種根據上述技術方案所述的突變葡聚糖酶glu16a-v147s在降解啤酒生產中產生的啤酒麥糟中的應用，其特征在于，突變基因glu16a-1的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
15、作為優選，相比于野生型葡聚糖酶wt，突變葡聚糖酶的酶活性是其1.18倍。
16、與現有技術相比，本專利技術的優點和積極效果在于：
17、本專利技術異源表達了glul6a并對其進行了突變研究，研究得到了β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因glu16a-1，該基因的突變位點為v147s，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示，蛋白質序列如seq?id?no.2所示。本專利技術還進一步研究了基于該突變基因所得的突變葡聚糖酶在降解燕麥來源的葡聚糖和汽爆預處理的啤酒麥糟中的應用。實驗證明，所得突變葡聚糖酶活性可達到110iu/mg，比野生型酶活性提高了15％，并且在降解啤酒生產中產生的啤酒氣爆麥糟方面也有著廣泛的應用，比野生型酶活性提高了18％。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因Glu16A-1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID?NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的突變基因Glu16A-1，其特征在于，由其核苷酸編碼的蛋白質序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.根據權利要求2所述的突變基因Glu16A-1，其特征在于，所述突變基因Glu16A-1的突變位點為V147S。
4.一種含有突變基因Glu16A-1的重組載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，突變引物的序列如下：
6.一種含有權利要求1-3任一項所述的突變基因Glu16A-1的突變葡聚糖酶Glu16A-V147S，其特征在于，突變基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
7.根據權利要求6所述的突變葡聚糖酶Glu16A-V147S在降解燕麥來源的葡聚糖中的應用，其特征在于，突變基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，相比于
9.根據權利要求6所述的突變葡聚糖酶Glu16A-V147S在降解啤酒生產中產生的啤酒麥糟中的應用，其特征在于，突變基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，相比于野生型葡聚糖酶WT，突變葡聚糖酶的酶活性是其1.18倍。
...【技術特征摘要】
1.一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突變基因glu16a-1，其特征在于，其核苷酸序列如seqid?no.1所示。
2.根據權利要求1所述的突變基因glu16a-1，其特征在于，由其核苷酸編碼的蛋白質序列如seq?id?no.2所示。
3.根據權利要求2所述的突變基因glu16a-1，其特征在于，所述突變基因glu16a-1的突變位點為v147s。
4.一種含有突變基因glu16a-1的重組載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，突變引物的序列如下：
6.一種含有權利要求1-3任一項所述的突變基因glu16a-1的突變葡聚糖酶glu16a-v147s，其特征在于，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡淑敏，王祿山，余俊紅，吳秀蕓，黃淑霞，閆鵬，劉佳，
申請(專利權)人：青島啤酒股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。