【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物醫藥，特別涉及一種rsv?pre-f截短體及其生產方法和應用。
技術介紹
1、呼吸道合胞病毒(respiratory?syncytial?virus，簡稱rsv)是引起嬰幼兒和老年人呼吸道感染的主要病毒之一，也是造成兒童下呼吸道感染死亡的主要原因之一。rsv屬單股負鏈包膜rna病毒，為副粘病毒科，肺炎病毒屬。rsv的包膜表面包含三種蛋白：g蛋白、f蛋白和sh蛋白。g蛋白主要負責病毒對宿主細胞的附著，f蛋白主要介導病毒對宿主細胞的融合與進入，而sh蛋白不參與以上兩個過程。
2、f蛋白相對保守，常被用作疫苗抗原設計。介導病毒與宿主細胞膜融合的f蛋白以融合前(pre-fusion)與融合后(post?fusion)兩種形式存在。亞穩態的pre-f蛋白可通過構象改變介導膜融合，形成穩定的融合后f蛋白。通過對rsv?f蛋白的結構及其誘導產生的中和抗體進行分析比較發現，f蛋白表面主要存在ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、ⅴ六種不同的抗原表位。臨床最早用于治療rsv感染所引起的呼吸道疾病的治療性單抗(帕利珠單抗，palivizumab)，是ⅱ號位點的特異性抗體。而表位和ⅴ表位是pre-f蛋白的特有表位，研究發現針對位點的特異性抗體擁有更好的中和活性。
3、目前rsv?f蛋白構建的主要策略是通過二硫鍵和空腔填充將f蛋白穩定至融合前構象，為后續rsv疫苗研發提供了新的思路。在此基礎上，通過不同策略穩定f蛋白從而進一步優化ds-cav1結構，獲得較為穩定的pre-f蛋白結構。穩定的pre-f蛋白結構有利于在免疫后誘導產生更高水平
4、然后，rsv?f蛋白的構建面臨如下技術難題：完整的rsv?f蛋白結構相對復雜，通過結構設計使f蛋白維持融合前構象的不確定因素多，構建難度大，表達量低；截短后的rsv?f蛋白能夠被pre-f特異性抗體識別，截短體蛋白不穩定，不能維持融合前構象，免疫后誘導的中和抗體水平低，截短體的穩定化構象需要進一步優化。
5、有鑒于此，特提出本申請實施例的技術方案。
技術實現思路
1、本申請的一個或者多個實施例提供一種rsv?pre-f截短體及其生產方法和應用。技術方案包括：
2、本申請的一個或者多個實施例提供一種rsv?pre-f蛋白的截短體，所述截短體的結構如結構式i所示：
3、rsv信號肽-[f2多肽的截短肽-f1多肽的截短肽]n-x1-x2式i；
4、其中，
5、x1為無或者嵌合肽1；
6、x2為無或者標簽片段；
7、“-”為肽鍵或者連接子；
8、[f2多肽的截短肽-f1多肽的截短肽]為可串聯結構單元；
9、n為1-5范圍內任意正整數；
10、所述f2多肽的截短肽保留β2片層的全部或者部分區域，所述f1多肽的截短肽保留β7片層的全部或者部分區域，且每個所述可串聯結構單元中，f2多肽的截短肽中的半胱氨酸突變與f1多肽的截短肽中的半胱氨酸突變形成二硫鍵；
11、所述截短體不含弗林蛋白酶的酶切位點片段；
12、所述截短體滿足如下條件：
13、(1)所述f2多肽的截短肽的截取起點為第26位或者第50位，截取終點為第103位至105位中的任意一位；以及，
14、(2)所述f1多肽的截短肽的截取起點為第145位，截取終點為第306位或者第321位。
15、在本申請的一些實施方式中，所述f2多肽的截短肽的n端連接有嵌合肽2；
16、可選地，所述嵌合肽2包括rsv?g蛋白。
17、在本申請的一些實施方式中，所述截短體的物種來源包括人和牛中的一種或者多種。
18、在本申請的一些實施方式中，所述f2多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：y44c、t50c和y53c。
19、在本申請的一些實施方式中，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：q302c、l306c和i309c。
20、在本申請的一些實施方式中，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：s155c、a170c、v179c、s180c、s186c、s190f、v207l、s290c。
21、在本申請的一些實施方式中，所述截短體具有如下氨基酸突變：p102a。
22、在本申請的一些實施方式中，所述截短體具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：c37g和c313g。
23、在本申請的一些實施方式中，所述連接子為柔性短肽；
24、可選地，所述柔性短肽為gs、g、s、gs、sg、ss、gg、pg、ggg、ggs、sss、gsg、sgs、gpg、gsgs、gggs、gpgs、gggg、gsgg、ggsg、sggg、gssg、sgsg、gssg、ggpgg或者ggggs。
25、在本申請的一些實施方式中，所述標簽片段包括多聚組氨酸；可選地，所述多聚組氨酸包括8his片段。
26、在本申請的一些實施方式中，所述嵌合肽1包括結構性多肽和功能性多肽中的一種或者多種；所述結構性多肽使多個所述截短體的單體形成多聚體，所述功能性多肽增強所述截短體的生物學活性；
27、可選地，所述結構性多肽包括聚集基序、gcn4亮氨酸拉鏈和納米顆粒綴合片段中的一種或者多種；
28、可選地，所述功能性多肽包括抗原特異性結合片段。
29、在本申請的一些實施方式中，所述截短體如seq?id?no.11、seq?id?no.12、seq?idno.14、seq?id?no.15、seq?id?no.16、seq?id?no.17、seq?id?no.19至seq?id?no.22以及seq?id?no.23至seq?id?no.27中的任一序列所示。
30、本申請的一個或者多個實施例提供一種核酸分子，所述核酸分子編碼所述的rsvpre-f蛋白的截短體。
31、本申請的一個或者多個實施例提供一種載體，所述載體包括所述的核酸分子。
32、本申請的一個或者多個實施例提供一種工程細胞，所述工程細胞：
33、(1)表達所述的rsv?pre-f蛋白的截短體；或者
34、(2)包括所述的核酸分子或者所述的載體。
35、本申請的一個或者多個實施例提供一種所述的rsv?pre-f蛋白的截短體的生產方法，所述生產方法包括如下步驟：
36、培養所述的工程細胞；以及，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體的結構如結構式I所示：
2.根據權利要求1所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述F2多肽的截短肽的N端連接有嵌合肽2；
3.根據權利要求1所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體的物種來源包括人和牛中的一種或者多種。
4.根據權利要求1所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述F2多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：Y44C、T50C和Y53C。
5.根據權利要求1所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述F1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：Q302C、L306C和I309C。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述F1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：S155C、A170C、V179C、S180C、S186C、S190F、V207L、S290C。
7.根據權利要求1至5中任一項所述的RSV?pre-F蛋白
8.根據權利要求1至5中任一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：C37G和C313G。
9.根據權利要求1至5中任意一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述連接子為柔性短肽；
10.根據權利要求1至5中任意一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述標簽片段包括多聚組氨酸；可選地，所述多聚組氨酸包括8His片段。
11.根據權利要求1至5中任意一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體，其特征在于，所述嵌合肽1包括結構性多肽和功能性多肽中的一種或者多種；所述結構性多肽使多個所述截短體的單體形成多聚體，所述功能性多肽增強所述截短體的生物學活性；
12.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權利要求1至11中任一項所述的RSVpre-F蛋白的截短體。
13.載體，其特征在于，所述載體包括權利要求12所述的核酸分子。
14.工程細胞，其特征在于，所述工程細胞：
15.權利要求1至11中任一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體的生產方法，其特征在于，所述生產方法包括如下步驟：
16.免疫組合物，其特征在于，所述免疫組合物包括：
17.權利要求1至11中任一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體在制備呼吸道合胞病毒抗體檢測試劑盒中的應用。
18.呼吸道合胞病毒抗體檢測試劑盒，其包括權利要求1至11中任一項所述的RSV?pre-F蛋白的截短體。
...【技術特征摘要】
1.rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體的結構如結構式i所示：
2.根據權利要求1所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述f2多肽的截短肽的n端連接有嵌合肽2；
3.根據權利要求1所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體的物種來源包括人和牛中的一種或者多種。
4.根據權利要求1所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述f2多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：y44c、t50c和y53c。
5.根據權利要求1所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：q302c、l306c和i309c。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：s155c、a170c、v179c、s180c、s186c、s190f、v207l、s290c。
7.根據權利要求1至5中任一項所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體具有如下氨基酸突變：p102a。
8.根據權利要求1至5中任一項所述的rsv?pre-f蛋白的截短體，其特征在于，所述截短體具有如下氨基酸突變中的一個或者多個：c37g和c313g...
【專利技術屬性】
技術研發人員：崔保峰，胡浩，蔣浩然，周茹，王姍姍，滕忠坤，王文宇，王婧，周翠云，鄭海東，于旭博，
申請(專利權)人：蘇州聚微生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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