【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)學(xué)，具體涉及一種抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、a族鏈球菌(streptococcus?pyogenes，group?a?streptococcus,gas)為β溶血性鏈球菌，又稱為a族乙型溶血性鏈球菌，是一種常見的革蘭陽(yáng)性病原菌，人是其唯一自然宿主，通過(guò)呼吸道和皮膚接觸感染。gas感染可引起化膿性與非化膿性疾病，前者包括咽旁或咽后的蜂窩組織炎和/或膿腫、皮膚感染、頸淋巴結(jié)炎、乳突炎、鼻竇炎、中耳炎等；后者則包括猩紅熱、化膿性扁桃體炎、丹毒、過(guò)敏性紫癜、急性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性心臟病、鏈球菌感染后腎小球腎炎等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年由gas引起的急性咽峽炎和皮膚感染分別超過(guò)6億和1億。gas相關(guān)嚴(yán)重疾病患者約有1800多萬(wàn)例，每年至少有超過(guò)50萬(wàn)人死于嚴(yán)重的gas感染所致疾病。
2、上呼吸道感染為臨床常見疾病，其中90％為病毒感染，細(xì)菌性感染發(fā)生率約為10％，而在細(xì)菌性感染病例中，gas感染占90％以上。來(lái)自臨床的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，上呼吸道感染患者抗菌素處方率為98.3％。但實(shí)際情況是，一方面，如果排除了gas感染的可能性，90％以上上呼吸道感染患者都無(wú)需使用抗生素進(jìn)行治療，濫用抗菌素增加了耐藥菌株的產(chǎn)生、藥物過(guò)敏和毒副作用的危害，同時(shí)造成不必要的醫(yī)療費(fèi)用支出。另一方面，真正gas感染患者則需要盡快及時(shí)給予有效抗生素治療，避免引起如風(fēng)濕性心臟病、菌血癥等嚴(yán)重后遺癥。因此，gas感染的快速準(zhǔn)確診斷對(duì)臨床呼吸道感染疾病治療和避免抗生素濫用都具有非常重要的作用和意義。
3、
4、現(xiàn)有g(shù)as抗原快速檢測(cè)試劑的檢測(cè)靶標(biāo)均為細(xì)胞壁所含多糖抗原，通常采用利用提取多糖抗原制備的多克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)，而提取多糖抗原的純度不高且難以控制，由此制備的多克隆抗體性能不高可能是導(dǎo)致現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)靈敏度不盡如人意的主要原因。因此，有必要尋找新的檢測(cè)靶點(diǎn)，制備高性能的檢測(cè)抗體，從而提高現(xiàn)有試劑的檢測(cè)性能。
5、除了細(xì)胞壁所含多糖抗原，在鏈球菌多糖抗原的外層還具有m、t、r和s四種型特異性蛋白，其中m蛋白主要見于a族，位于gas細(xì)菌的表面，含量豐富。m蛋白氨基末端高度變異，是a族鏈球菌分型的基礎(chǔ)。根據(jù)m蛋白的氨基酸序列差異性建立的血清分型法，a族鏈球菌可分為150多個(gè)血清型，但在我國(guó)臨床上最常見的血清型主要為m1、m3、m5、m6、m12、m18和m24。另一方面，m蛋白的羧基末端存在高度保守的氨基酸序列，對(duì)其研究主要集中在疫苗領(lǐng)域，未見其在檢測(cè)方面的應(yīng)用報(bào)道。
6、因此，為了彌補(bǔ)以上不足，本專利技術(shù)設(shè)計(jì)以m蛋白羧基末端高度保守氨基酸序列作為新的檢測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)尋找其中高度保守的優(yōu)勢(shì)抗原表位序列，合成高純度的表位肽作為免疫原，制備高活性單克隆抗體，從而在不影響特異性的同時(shí)進(jìn)一步提高現(xiàn)有g(shù)as抗原快速檢測(cè)技術(shù)的靈敏度。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為此，本專利技術(shù)的目的在于首先篩選確定a族鏈球菌m蛋白羧基末端高度保守序列中的優(yōu)勢(shì)抗原表位序列，然后合成高純度的保守表位肽抗原作為免疫原，免疫小鼠提供利用融合的雜交瘤細(xì)胞株制備的抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體，并且經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證獲得的單克隆抗體能夠識(shí)別我國(guó)臨床上常見的a族鏈球菌主要血清型m1、m3、m5、m6、m12、m18和m24，與a族鏈球菌m蛋白多克隆抗體配合使用建立雙抗體夾心法檢測(cè)產(chǎn)品，可以顯著提高現(xiàn)有a族鏈球菌檢測(cè)試劑的檢測(cè)靈敏度。
2、因此，本專利技術(shù)一個(gè)方面涉及一種抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，輕鏈可變區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，其中，
3、所述重鏈cdr1的氨基酸序列為seq?id?no.2所示序列或與seq?id?no.2所示序列相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列；
4、所述重鏈cdr2的氨基酸序列為seq?id?no.3所示序列或與seq?id?no.3所示序列相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列；
5、所述重鏈cdr3的氨基酸序列為seq?id?no.4所示序列或與seq?id?no.4所示序列相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列；
6、所述輕鏈cdr1的氨基酸序列為seq?id?no.6所示序列或與seq?id?no.6所示序列相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列；
7、所述輕鏈cdr2的氨基酸序列為las或與序列l(wèi)as相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列；
8、所述輕鏈cdr3的氨基酸序列為seq?id?no.7所示序列或與seq?id?no.7所示序列相比具有1個(gè)保守氨基酸替換的氨基酸序列。
9、在進(jìn)一步的方面中，本專利技術(shù)還涉及一種單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，所述重鏈可變區(qū)氨基酸序列為seq?id?no.1所示序列，所述輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為seq?id?no.5所示序列。
10、本專利技術(shù)還涉及上述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段為fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、單鏈抗體或人源化抗體，這些抗體或抗原結(jié)合片段由于保留了重鏈和輕鏈的可變區(qū)，因此能夠識(shí)別和結(jié)合a族鏈球菌m蛋白。
11、此外，本專利技術(shù)還涉及包含編碼上述抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸的一種核酸分子，以及包含上述核酸分子的表達(dá)載體，所述表達(dá)載體能夠表達(dá)上述的抗體或其抗原結(jié)合片段。同時(shí)本專利技術(shù)還涉及包含上述核酸分子或上述表達(dá)載體的重組體，其可以產(chǎn)生上述抗體或其抗原結(jié)合片段。
12、另一方面，本專利技術(shù)涉及一種抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，所述單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌上述的單克隆抗體。進(jìn)一步地，本專利技術(shù)涉及抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，所述單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞株2e184，保藏號(hào)為cgmcc?no.45621。
13、再一方面，本專利技術(shù)涉及上述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段在制備檢測(cè)a族鏈球菌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。進(jìn)一步地，本專利技術(shù)涉及一種檢測(cè)a族鏈球菌的試劑盒，所述試劑盒包含本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抗A族鏈球菌M蛋白保守表位肽的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包括CDR1、CDR2和CDR3，輕鏈可變區(qū)包括CDR1、CDR2和CDR3，其中，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)序列為SEQ?ID?NO.1所示序列，所述輕鏈氨基酸序列為SEQ?ID?NO.5所示序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的單克隆抗體，其特征在于，其由保藏號(hào)為CGMCC?No.45621的小鼠雜交瘤細(xì)胞株2E184分泌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述抗體或抗原結(jié)合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、單鏈抗體或人源化抗體。
5.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸包含編碼權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸。
6.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體包含權(quán)利要求5所述的核酸分子。
7.一種重組體，其特征在于，所述重組體包含權(quán)利要求5所述的核酸分子或權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體。
<...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗a族鏈球菌m蛋白保守表位肽的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，輕鏈可變區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，其中，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)序列為seq?id?no.1所示序列，所述輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.5所示序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的單克隆抗體，其特征在于，其由保藏號(hào)為cgmcc?no.45621的小鼠雜交瘤細(xì)胞株2e184分泌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述抗體或抗原結(jié)合片段為fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、單鏈抗體或人源化抗體...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周逸，羅威，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京新興四寰生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。