【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物，具體涉及一株南海島礁魚源熱帶芽胞桿菌產蛋白酶菌株btzb2及其應用。
技術介紹
1、南海(south?china?sea)作為我國面積最大、島嶼最多、最接近赤道的海域，不僅蘊藏著豐富的微生物資源，而且具有重要的戰略地位。南海具有水溫高、貧營養和浮游生物占主導地位等特點(張喆等，2016)，南海微生物資源豐富，是促進南海海洋生態系統物質循環和能量流動的重要因素。su等(2022)研究發現，近海海域的抗性基因是深遠海及南海島礁海域的2.39-2.66倍，從深遠海、島礁海域及海洋生物中挖掘微生物資源是未來的研究方向之一(hu?et?al.,2022)。
2、金帶齒頜鯛(gnathodentex?aurolineatus)隸屬于脊索動物門(chordata)，輻鰭魚綱(actinopterygii)，鱸形目(perciformes)，俗名黃點鯛。金帶齒頜鯛主要分布于我國南海海域及東沙群島、南沙群島、西沙群島、中沙群島等(方宏達和呂向立，2019)，是南沙渚碧礁海域的常住種(李媛潔，2020)，永暑礁海域的優勢種(張俊，2015)，在食物鏈中顯示出相對較高的營養地位，在維持珊瑚礁系統的生態平衡方面發揮著至關重要的作用(gao?etal.,2020)。魚類腸道內存在大量微生物資源，其在宿主生長、發育、代謝及免疫調控過程中扮演著重要的角色(ma?et?al.,2021)。
3、蛋白酶是參與消化的重要酶類之一。目前已報道的高產蛋白酶菌株有貝萊斯芽胞桿菌(bacillus?velezensis)(馮菲
4、金帶齒頜鯛是南海典型珊瑚礁食肉魚類之一，其腸道微生物群落具有較高的碳源代謝能力(王晶晶等，2022)。為從南海典型島礁魚類腸道微生物中挖掘可培養蛋白酶菌株資源，從南海渚碧礁海域金帶齒頜鯛腸道菌群中富集篩選蛋白酶產生菌株，并明確其環境適應性及其蛋白酶活性，可為南海魚源功能微生物菌劑資源的開發應用提供優質的菌種資源。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一株南海島礁魚源熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株btzb2，該菌株具有較好的產蛋白酶能力，且環境適應性良好。
2、本專利技術的目的還在于提供上述熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株btzb2在產蛋白酶中的應用。
3、本專利技術的上述第一個目的可以通過以下技術方案來實現：一株南海島礁魚源熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株btzb2，它的保藏編號為gdmccno：62254，保藏日期為2022年12月08日。
4、該熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)btzb2分離自南海渚碧礁海域金帶齒頜鯛腸道微生物群落。
5、進一步的，本專利技術中的熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)btzb2通過以下方法獲得：吸取南海渚碧礁海域金帶齒頜鯛腸道樣品的復蘇液于蛋白酶富集液，30℃、180r/min富集培養24h，取富集液涂布酪蛋白平板，于30℃下培養12h-36h，在培養期間每12h觀察，直至酪蛋白平板產生明顯水解圈，挑選產生明顯水解圈的菌株進行劃線分離純化。
6、將初篩得到的蛋白酶產生菌株分別接入營養肉湯初始發酵培養液中，30℃振蕩培養24h。再將培養好的種子液分別轉接于蛋白酶發酵培養液中。30℃、180r/min，搖瓶發酵培養48h。48h取樣，以轉速10000r、4℃離心10min，所得上清液為粗酶液。分別采用福林-酚法測定粗酶液的酶活力。根據分離菌株的產酶能力，篩選得到菌株btzb2。經分子生物學、生理生化及革蘭氏染色等鑒定，確定該菌株為熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)。
7、本專利技術的上述第二個目的可以通過以下技術方案來實現：上述熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株btzb2在產蛋白酶中的應用。
8、本專利技術中熱帶芽胞桿菌btzb2的培養條件為：菌株在鹽度5～45、ph?4～10、溫度20～30℃、初始菌濃度104～107cfu/ml均可正常生長，可適應于養殖池塘環境。在鹽度5～30、ph?4～10、溫度30℃、初始菌濃度105cfu/ml時，酶活在109.34～229.06u/ml之間。該菌株最優產蛋白酶條件下，發酵48h產蛋白酶活力達319.48u/ml，發酵24h粗酶液的比活力889.97u/mg，48h粗酶液的比活力2400.83u/mg。菌株btzb2具有較好的產蛋白酶能力，可作為水產發酵飼料的有益菌源。
9、與現有技術相比，本專利技術具有如下優點：
10、(1)本專利技術中的熱帶芽胞桿菌btzb2分離自南海渚碧礁海域金帶齒頜鯛腸道微生物群落，菌株在鹽度5～45、ph?4～10、溫度20～30℃、初始菌濃度104～107cfu/ml均可正常生長，可適應于養殖池塘環境；
11、(2)本專利技術中的熱帶芽胞桿菌btzb2在鹽度5～30、ph?4～10、溫度30℃、初始菌濃度105cfu/ml時，酶活在109.34～229.06u/ml之間，該菌株最優產蛋白酶條件下，發酵48h產蛋白酶活力達319.48u/ml，發酵24h粗酶液的比活力889.97u/mg，48h粗酶液的比活力2400.83u/mg；該菌株btzb2具有較好的產蛋白酶能力，可作為水產發酵飼料的有益菌源，這為南海魚源功能微生物菌劑資源的開發應用提供優質的菌種資源。
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1.一株南海島礁魚源熱帶芽胞桿菌(Bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株BTZB2，其特征在于：它的保藏編號為GDMCC?No：62254，保藏日期為2022年12月08日。
2.權利要求1所述的熱帶芽胞桿菌(Bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株BTZB2在產蛋白酶中的應用。
【技術特征摘要】
1.一株南海島礁魚源熱帶芽胞桿菌(bacillus?tropicus)產蛋白酶菌株btzb2，其特征在于：它的保藏編號為gdmcc?no：62254，保藏日...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡曉娟，曹煜成，徐煜，楊鏗，蘇浩昌，文國樑，徐武杰，陳作志，王晶晶，
申請(專利權)人：中國水產科學研究院南海水產研究所，
類型：發明
國別省市：
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