【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及細(xì)胞生物學(xué)，尤其涉及一種提高nk細(xì)胞活率的方法。
技術(shù)介紹
1、在異體免疫細(xì)胞體外培養(yǎng)方面，尤其是nk細(xì)胞體外培養(yǎng)，是從臍帶血中分離出免疫nk細(xì)胞，通過(guò)模擬人體微環(huán)境體外培養(yǎng)、擴(kuò)增、制劑回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，產(chǎn)生免疫應(yīng)答。nk細(xì)胞現(xiàn)階段培養(yǎng)周期為13-17天，其細(xì)胞活率會(huì)因?yàn)楣┱呒?xì)胞和培養(yǎng)時(shí)間增加而出現(xiàn)差異，后期收獲得到目的細(xì)胞活率低于標(biāo)準(zhǔn)(細(xì)胞鮮活制劑比低于80％)。細(xì)胞量大，凋亡的死細(xì)胞增多會(huì)增加臨床風(fēng)險(xiǎn)，會(huì)見(jiàn)提高細(xì)胞制劑活率尤為重要。現(xiàn)階段大多數(shù)細(xì)胞制備采用400-500g不調(diào)升降速度離心，這樣操作可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破碎，多次洗滌后會(huì)降低細(xì)胞活率，所以急需找到一種既可以提高分離活細(xì)胞和死細(xì)胞又可以提高細(xì)胞活率的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本專利技術(shù)的目的在于提出一種提高nk細(xì)胞活率的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)無(wú)法提高細(xì)胞活率以及分離活細(xì)胞和死細(xì)胞的問(wèn)題。
2、基于上述目的，本專利技術(shù)提供了一種提高nk細(xì)胞活率的方法，包括如下步驟：
3、步驟一、收集擴(kuò)增培養(yǎng)得到的nk細(xì)胞懸液經(jīng)350g離心力，升速8降速6條件下第一次離心8-12min后，去除上清液得到第一次離心細(xì)胞；
4、步驟二、在第一次離心細(xì)胞中加入pbs重懸，經(jīng)第二次離心得到第二次離心細(xì)胞；
5、步驟三、在第二次離心細(xì)胞中加入pbs重懸，經(jīng)第三次離心得到第二次離心細(xì)胞，即nk細(xì)胞。
6、優(yōu)選的，第二次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心5-7mi
7、更優(yōu)選的，第二次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心6min。
8、優(yōu)選的，第三次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心5-8min。
9、更優(yōu)選的，第三次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心6min。
10、優(yōu)選的，第一次離心的時(shí)間為10min。
11、優(yōu)選的，第一次離心時(shí)均加入淋巴細(xì)胞分離液。
12、優(yōu)選的，所述第一次離心在含有密度梯度離心液的sepmate?pbmc分離管中進(jìn)行。
13、本專利技術(shù)的有益效果：本專利技術(shù)可以有效去除細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞，提高細(xì)胞活率，通過(guò)本專利技術(shù)獲得的細(xì)胞活率能夠大于95％。極大的促進(jìn)力臨床回輸研究。本專利技術(shù)使用sepmatepbmc分離管提取的單個(gè)核細(xì)胞的活率相對(duì)傳統(tǒng)分離pbmc方法提取的活率有所提高，并且縮短操作時(shí)間，提高工作效率。
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1.一種提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第二次離心是采用400G離心力，升速8降速6條件下離心5-7min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第二次離心是采用400G離心力，升速8降速6條件下離心6min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第三次離心是采用400G離心力，升速8降速6條件下離心5-8min。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第三次離心是采用400G離心力，升速8降速6條件下離心6min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第一次離心的時(shí)間為10min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第一次離心時(shí)均加入淋巴細(xì)胞分離液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高NK細(xì)胞活率的方法，其特征在于，所述第一離心在含有密度梯度離心液的Sepmate?PBMC分離管中進(jìn)行。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種提高nk細(xì)胞活率的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高nk細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第二次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心5-7min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述提高nk細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第二次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心6min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提高nk細(xì)胞活率的方法，其特征在于，第三次離心是采用400g離心力，升速8降速6條件下離心5-8min。
...【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉俊，薛正蓮，周德豐，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：安徽工程大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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