【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子生物學領域，尤其是涉及蛋白質組合物及其應用與急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒。
技術介紹
1、心血管疾病是全球主要致死的疾病之一，心肌梗死是致死的最主要原因。急性心肌梗死是指冠脈血管出現急性閉塞、血流中斷、心肌持續缺血、缺氧導致壞死，臨床表現為持久性的胸骨后疼痛不能緩解、頻發心律失常，心源性休克和心衰等。急性心肌梗死的病因主要有冠脈栓塞、痙攣、休克低血壓、氧供需嚴重失衡等等；發病因素有：1.年齡、性別：男性患者是女性的2-3倍；絕大多數40歲以上，約占總數的95％，個別患者不到30歲，發病率隨年齡而明顯增高；近年來年輕患者比例越來越高。2.發病前的合并疾?。悍逝?、高血壓、高脂血癥及糖尿病等，將近半數的既往有心絞痛史。3.誘發因素：過勞、吸煙、酗酒、暴飲暴食、激動、休克等等，還有部分患者在睡眠或靜息狀態中發作。
2、急性心肌梗死同時也是急性炎癥爆發的過程，缺血再灌注使粘附分子、炎癥介質動員大量白細胞，廣泛聚集、粘附，加重微循環障礙；氧化應激過程中，大量兒茶酚胺自氧化，更多氧自由基加重心肌損傷。心肌受損區大量產生et、tnf-α等加重惡性心律失常。臨床常用的心肌損傷標志物分別于胸痛發作后：1.myo：2-4h，2.ck-mb?4h，3.ctn?i/ctnt?4-8h,4.ast?6-7h,5.ldh?8-10h開始升高。
3、心肌梗死合并惡性心律失常主要指心室顫動和無脈性室性心動過速，院內死亡率很高。心肌梗死急性期伴惡性心律失常的機制包括：1.細胞離子通道功能異常，2.不同缺血狀態
4、急性心肌梗死繼發的惡性心律失常是心源性猝死發生的最高危因素。流行病學研究顯示我國死于心源性猝死達54.4萬人/年，居于世界首位。及時準確的預測患者惡性心律失常以便進行治療就顯得尤為重要。尋找急性心肌梗死合并惡性心律失常導致心源性猝死的機制意義重大。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種蛋白質組合物。
2、本專利技術所要解決的另一技術問題在于提供上述蛋白質組合物的應用。
3、本專利技術所要解決的另一技術問題在于提供一種急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒。
4、本專利技術采用的技術方案是：
5、一種蛋白質組合物，由tgfb?i和vwf抗體組成。
6、上述蛋白質組合物在制備急性心肌梗死合并惡性心律檢測制劑或醫療器械方面的應用。
7、優選的，上述蛋白質組合物的應用，所述醫療器械為急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒。
8、一種應用上述蛋白質組合物的急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒，包含2種蛋白檢測組：
9、第一檢測組包括：包被有tgfbi抗體的多孔板、tgfbi純品作為標準品、生物素標記抗體、辣根過氧化物酶標記親和素、生物素標記抗體稀釋液、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液、樣本稀釋液、洗滌液、底物溶液和終止液，其中，
10、所述tgfb?i標準品濃度為0，78，156，312，625，1250，2500，5000pg/ml所述生物素標記抗體為生物素化的抗tgfbi抗體；
11、所述辣根過氧化物酶標記親和素為鏈霉親和素；
12、所述生物素標記抗體稀釋液為：0.05％疊氮鈉，0.01m磷酸緩沖液ph?7.2；
13、所述辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液：0.01m磷酸緩沖液ph7.2，0.05％硫柳汞；
14、所述樣本稀釋液為86％氯化鈉、4.5％磷酸氫二鈉、3.5％磷酸二氫鈉、5％山羊血清，1％?proc?l?i?n-300，ph值為6-7；
15、所述洗滌液：nac?l?9.0g，0.5％吐溫20?5ml，加蒸餾水至1000ml；
16、所述底物溶液為3,3’,5,5’–四甲基聯苯胺；
17、所述終止液：2mo?l/l硫酸；
18、上述內容通過常規方法即可制備得到。
19、上述內容的具體操作方法為：
20、1)取離體血漿樣本，檢測前在4℃環境下過夜后，2500rpm離心10min，用樣本稀釋液進行1:100倍稀釋后進行檢測；
21、2)標準品制備：標準品于6000rpm離心30s后，用樣品稀釋液1ml充分溶解標準品，使用移液器對準凍存管底部反復吹打至少5次助溶，充分混勻得到標準品s7。取1.5ml離心管7枚(s0-s6)，各加入250μl樣本稀釋液，吸取250μl標準品s7到第一個離心管中(s6)，輕輕吹打混勻；從s6中吸取250μl到第二個ep管中(s5)，輕輕吹打混勻；以此類推進行標準品的倍比稀釋；s0為樣本稀釋液；
22、3)操作步驟：
23、a)針對設置的標準品孔、待測樣本孔，每孔分別加標準品或待測樣本100μl，輕輕晃動混勻，貼上板貼，37℃溫育2小時；
24、b)棄去孔內液體，甩干，不用洗滌；
25、c)每孔加生物素標記抗體100μl，貼上新的板貼，37℃溫育1小時；
26、d)棄去孔內液體，甩干，用洗滌液洗板3次，每次浸泡2分鐘，每孔加200μl，甩干；
27、e)每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl，貼上新的板貼，37℃溫育1小時；
28、f)棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡2分鐘，每孔加200μl，甩干；
29、g)每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色20分鐘；
30、h)每孔加終止液50μl，終止反應；
31、i)反應終止后5分鐘內用酶標儀在450nm處測量各孔的光密度(od值)；
32、4)數據處理：
33、使用curveexpert(vers?ion?1.4)軟件對od值進行處理，使用標準品od值繪制合適的標準曲線并得到相應函數后，將各樣品孔od值代入方程式后得到各孔樣本濃度值。
34、第二檢測組包括：包被有vwf抗體的多孔板、vwf純品作為標準品、生物素標記抗體、辣根過氧化物酶標記親和素、生物素標記抗體稀釋液、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液、樣本稀釋液、洗滌液、底物溶液和終止液，其中，
35、所述vwf蛋白標準品濃度為0，6.25，12.5，25，50，100，200，400ng/m?l；
36、所述生物素標記抗體為生物素化的抗vwf蛋白抗體；
37、所述辣根過氧化物酶標記親和素為鏈霉親和素；
38、所述生物素標記抗體稀釋液為：0.05％疊氮鈉，0.01m磷酸緩沖液ph7.2；
39、所述辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液：0.01m磷酸緩沖液ph7.2，0.05％硫柳汞；
40、所述樣本稀釋液為85％本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種蛋白質組合物，其特征在于：由TGFBI和vWF抗體組成。
2.權利要求1所述蛋白質組合物在制備急性心肌梗死合并惡性心律檢測制劑或醫療器械方面的應用。
3.根據權利要求2所述的蛋白質組合物的應用，其特征在于：所述醫療器械為急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒。
4.一種應用權利要求1所述蛋白質組合物的急性心肌梗死合并惡性心律早期篩查診斷試劑盒，其特征在于：包含2種蛋白檢測組：
【技術特征摘要】
1.一種蛋白質組合物，其特征在于：由tgfbi和vwf抗體組成。
2.權利要求1所述蛋白質組合物在制備急性心肌梗死合并惡性心律檢測制劑或醫療器械方面的應用。
3.根據權利要求2所述的蛋白質組...
【專利技術屬性】
技術研發人員：何國偉，侯海濤，張建亮，宋昱，郭牧，楊沁，
申請(專利權)人：泰達國際心血管病醫院，
類型：發明
國別省市：
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