【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及基因工程，具體涉及一種三聚體基序在生產(chǎn)可溶性三聚體蛋白中的應(yīng)用及包含該三聚體基序的重組新型冠狀病毒s蛋白。
技術(shù)介紹
1、自然界中，一些病毒表面的三聚體跨膜蛋白攜帶主要的中和表位，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，例如包膜rna病毒、sars-cov-2、流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒、彈狀病毒科的狂犬病毒、人類免疫缺陷病毒、埃博拉病毒、水泡型口炎病毒等。三聚體形式的蛋白質(zhì)具有靶向三聚體配體及信號通路的生物活性，例如新冠病毒的s蛋白，病毒依賴包膜上三聚體形式的s蛋白與宿主細(xì)胞表面ace2受體結(jié)合，從而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
2、膜蛋白依靠跨膜結(jié)構(gòu)域與膜上的磷脂雙分子層的疏水部分產(chǎn)生非極性相互作用，使得蛋白錨定在膜上。由于跨膜區(qū)包含特征性的非極性氨基酸序列，完整的膜蛋白疏水性較強(qiáng)，在裂解膜過程中容易形成沉淀，后續(xù)分離回收率較低，純化困難，且膜蛋白在天然宿主中低水平表達(dá)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了應(yīng)對膜蛋白的疏水性和低水平的表達(dá)對疫苗生產(chǎn)帶來的重重障礙，本專利技術(shù)通過引入源自肺表面活性蛋白c端結(jié)構(gòu)域的外源三聚體基序替換膜蛋白的跨膜區(qū)，不僅將膜蛋白轉(zhuǎn)變成可溶性、分泌性的三聚體融合蛋白，且保證了構(gòu)建后的重組蛋白具有與病毒天然表面抗原相似的三聚體結(jié)構(gòu)，其立體空間表位能夠有效的誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體。
2、一方面，本專利技術(shù)的目的在于保護(hù)一種三聚體基序在生產(chǎn)可溶性三聚體蛋白中的應(yīng)用，所述三聚體基序源自肺表面活性蛋白c端，通過二硫鍵共價結(jié)合形成三股反向平行的超螺旋結(jié)構(gòu)域。p>
3、作為一種優(yōu)選的實(shí)施方式，所述三聚體基序的氨基酸序列選自如seq?id?no.1所示的氨基酸序列中的一段或全部。
4、作為一種優(yōu)選的實(shí)施方式，通過將編碼目的蛋白c端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)的核酸序列替換為編碼三聚體基序的核酸序列，實(shí)現(xiàn)目的蛋白的可溶性表達(dá)。
5、本專利技術(shù)應(yīng)用特定的三聚體折疊基序替換三聚體跨膜蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域及胞質(zhì)尾區(qū)，在保留了跨膜蛋白的天然三聚體構(gòu)象的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)了跨膜蛋白的可溶性分泌表達(dá)。在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，有利于蛋白的分離純化，解決了跨膜蛋白不溶性的難點(diǎn)，為藥物靶點(diǎn)是三聚體跨膜蛋白的研發(fā)提供了新的設(shè)計(jì)思路，且人源化的三聚體折疊基序具有良好的生物相容性，在體內(nèi)具有較低的免疫原性，無毒害。
6、另一方面，本專利技術(shù)的目的還在于保護(hù)一種重組新型冠狀病毒s蛋白，所述重組s蛋白通過將原有的s蛋白的c端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)替換為上述的三聚體基序構(gòu)建而成。
7、作為一種優(yōu)選的實(shí)施方式，所述重組s蛋白通過刪除原有的s蛋白信號肽或突變?yōu)閔sv信號肽或hpa信號肽或hem信號肽、furin酶切位點(diǎn)突變?yōu)閝qaq，位于s蛋白的氨基酸序列位置986/987處氨基酸突變?yōu)楦彼帷端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)替換為上述的三聚體基序構(gòu)建而成。
8、作為一種優(yōu)選的實(shí)施方式，所述重組新型冠狀病毒s蛋白的核苷酸序列如seq?idno.2所示。
9、上述重組s蛋白不僅能夠進(jìn)行可溶性的細(xì)胞外表達(dá)，而且有效的維持了s蛋白的空間構(gòu)象(如在麻疹病毒中)。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種三聚體基序在生產(chǎn)可溶性三聚體蛋白中的應(yīng)用，其特征在于，所述三聚體基序源自肺表面活性蛋白C端，通過二硫鍵共價結(jié)合形成三股反向平行的超螺旋結(jié)構(gòu)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述三聚體基序的氨基酸序列選自如SEQID?NO.1所示的氨基酸序列中的一段或全部。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，通過將編碼目的蛋白C端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)的核酸序列替換為編碼三聚體基序的核酸序列，實(shí)現(xiàn)目的蛋白的可溶性表達(dá)。
4.重組新型冠狀病毒S蛋白，其特征在于，所述重組S蛋白通過將原有的S蛋白的C端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)替換為權(quán)利要求1中所述的三聚體基序構(gòu)建而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組新型冠狀病毒S蛋白，其特征在于，所述重組S蛋白通過刪除原有的S蛋白信號肽或突變?yōu)镠SV信號肽或HPA信號肽或HEM信號肽、Furin酶切位點(diǎn)突變?yōu)镼QAQ，位于S蛋白的氨基酸序列位置986/987處氨基酸突變?yōu)楦彼帷端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)替換為權(quán)利要求1中所述的三聚體基序構(gòu)建而成。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的重組新型冠狀
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的重組新型冠狀病毒S蛋白，其特征在于，所述重組新型冠狀病毒S蛋白能夠在麻疹病毒載體中分泌表達(dá)并維持S蛋白的空間構(gòu)象。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種三聚體基序在生產(chǎn)可溶性三聚體蛋白中的應(yīng)用，其特征在于，所述三聚體基序源自肺表面活性蛋白c端，通過二硫鍵共價結(jié)合形成三股反向平行的超螺旋結(jié)構(gòu)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述三聚體基序的氨基酸序列選自如seqid?no.1所示的氨基酸序列中的一段或全部。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，通過將編碼目的蛋白c端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)的核酸序列替換為編碼三聚體基序的核酸序列，實(shí)現(xiàn)目的蛋白的可溶性表達(dá)。
4.重組新型冠狀病毒s蛋白，其特征在于，所述重組s蛋白通過將原有的s蛋白的c端跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)替換為權(quán)利要求1中所述的三聚體基序構(gòu)建而成。
<...【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳曉琦，熊宇，楊志輝，申碩，王澤鋆，郭靖，張家友，
申請(專利權(quán))人：武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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