【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，特別涉及基于核酸適體的藥物靶向遞送工具及其應用。
技術介紹
1、阿爾茨海默病(ad)是老年人中最普遍的癡呆癥形式，其特征是認知能力的逐漸喪失。ad的病理特征包括神經原纖維纏結形成(tau蛋白聚集)、淀粉樣蛋白-β肽(aβ)沉積、神經元丟失和過度炎癥反應。研究報道，微管相關蛋白tau在包括ad、額顳葉癡呆和慢性創傷性腦病等神經系統性疾病的發病機制中起著核心作用。
2、到目前為止，tau蛋白已經成為治療多種神經系統性疾病的潛在靶標。多種可穩定神經微管結構或防止tau蛋白聚集的小分子抑制劑和抗體被陸續研發。然而，這些干預分子都只能延長纖維性纏結形成的滯后期，而不能停止或消除其影響，另一方面，血腦屏障(bbb)是限制許多治療性抗體和候選藥物運輸到腦區的主要障礙。
3、在過去幾十年里，生物體中的遺傳信息庫(dna)和基因表達載體(rna)在基因沉默治療劑的開發、新型納米材料的構建和生物催化劑的制備中起著關鍵作用。核酸適體，一種單鏈dna或rna分子，可形成特定三維結構并以高親和力地選擇性結合各種靶標，因其具有較高的親和力和特異性得到了廣泛的關注，又被稱為“化學抗體”。與抗體相比，核酸適體具有獨特的優勢，包括生產成本低、容易合成與修飾、免疫原性較低、高穩定性、較高的親和力、再現性和可重復性等。
4、更重要的是，核酸適體可以與劇毒或非免疫原性抗原結合，這是基于抗體生產方法無法實現的特性與優勢。核酸適體(1-5kda)的尺寸小于多肽(8kda)和抗體(15-150kda)，僅為抗體
5、基于上述研究背景，本專利技術通過引入靶向tau的核酸適體，高效捕獲大腦中游離的tau，同時，利用內源性細胞作為載體穿越bbb，實現了具有高效靶向性的核酸適體功能化的細胞遞送系統，為治療ad提供了新的研究思路，同時也為其他中樞神經系統(cns)相關疾病的精準治療提供了新的方案。
技術實現思路
1、為了改善上述技術問題，一方面，本專利技術提供一種特異性結合tau蛋白的核酸適體修飾的免疫細胞。
2、在本專利技術的一個實施方案中，所述核酸適體的核苷酸序列與seq?id?no:1-28中的任一項有98％以上的同一性；優選的，所述核酸適體具有與seq?id?no:1-28中的任一項相同的核苷酸序列，更優選的，所述核酸適體的核苷酸序列如seq?id?no:28所示。
3、在本專利技術的一個實施方案中，所述免疫細胞選自巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、單核細胞和肥大細胞；優選的所述免疫細胞為巨噬細胞。
4、在本專利技術的一個實施方案中，所述修飾通過所述核酸適體上的基團與所述免疫細胞膜上存在的基團結合進行；優選的，所述修飾通過所述核酸適體上的生物素與所述免疫細胞膜上的鏈霉親和素結合進行；優選的，所述修飾通過所述核酸適體上存在炔基的基團與所述免疫細胞膜上存在疊氮的基團結合進行；更優選的，所述修飾通過所述核酸適體上的dbco基團與在所述免疫細胞上摻入的ac4mannaz共價交聯進行。
5、在另一方面，本專利技術提供藥物組合物，其包含前述核酸適體修飾的免疫細胞和藥學上可接受的載體。
6、在另一方面，本專利技術提供前述核酸適體修飾的免疫細胞或前述藥物組合物以有效量治療受試者的tau相關疾病中的用途，所述tau相關疾病選自阿爾茨海默病(ad)、肌萎縮側索硬化/帕金森病-癡呆綜合征(als-pdc)、嗜銀顆粒性癡呆(agd)、英國型淀粉樣血管病、腦淀粉樣血管病、慢性創傷性腦病(cte)、皮質基底節變性(cbd)、克雅氏病(cjd)、拳擊員癡呆、彌漫性神經原纖維纏結伴鈣化、唐氏綜合癥、dravet綜合癥、癲癇、額顳葉癡呆(ftd)、與17號染色體相關的帕金森病額顳葉癡呆(ftdp-17)、額顳葉變性、神經節膠質瘤、神經節細胞瘤、gerstmann-straussler-scheinker病、hallervorden-spatz病、亨廷頓病、包涵體肌炎、鉛腦病、lytico-bodig病、腦膜血管瘤病、多系統萎縮、強直性肌營養不良、niemann-pick病類型c(np-c)、非關島運動神經元病伴神經原纖維纏結、皮克氏病(pid)、腦炎后帕金森病、朊病毒蛋白腦淀粉樣血管病、進行性皮質下神經膠質增生、進行性核上性麻痹(psp)、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結性癡呆、纏結型癡呆、多發性梗塞性癡呆、缺血性中風和結節性硬化癥。
7、在另一方面，本專利技術提供前述核酸適體修飾的免疫細胞或前述藥物組合物在制備用于治療tau相關疾病的藥物中的用途，所述tau相關疾病選自阿爾茨海默病(ad)、肌萎縮側索硬化/帕金森病-癡呆綜合征(als-pdc)、嗜銀顆粒性癡呆(agd)、英國型淀粉樣血管病、腦淀粉樣血管病、慢性創傷性腦病(cte)、皮質基底節變性(cbd)、克雅氏病(cjd)、拳擊員癡呆、彌漫性神經原纖維纏結伴鈣化、唐氏綜合癥、dravet綜合癥、癲癇、額顳葉癡呆(ftd)、與17號染色體相關的帕金森病額顳葉癡呆(ftdp-17)、額顳葉變性、神經節膠質瘤、神經節細胞瘤、gerstmann-straussler-scheinker病、hallervorden-spatz病、亨廷頓病、包涵體肌炎、鉛腦病、lytico-bodig病、腦膜血管瘤病、多系統萎縮、強直性肌營養不良、niemann-pick病類型c(np-c)、非關島運動神經元病伴神經原纖維纏結、皮克氏病(pid)、腦炎后帕金森病、朊病毒蛋白腦淀粉樣血管病、進行性皮質下神經膠質增生、進行性核上性麻痹(psp)、亞急性硬化性全腦炎、僅纏結性癡呆、纏結型癡呆、多發性梗塞性癡呆、缺血性中風和結節性硬化癥。
8、在另一方面，本公開提供前述核酸適體修飾的免疫細胞的制備方法，所述方法包括在免疫細胞的培養基中加入25μm的ac4mannaz，然后加入核酸適體，室溫孵育；優選的將前述核酸適體與免疫細胞孵育0-120min，更優選為60min。
9、在本專利技術的一個實施方式中，前述核酸適體的濃度為100-2000nm；優選為1500nm。
10、有益效果
11、本專利技術提供的調節tau蛋白表達的組合物，可以高效且特異性地靶向大腦中的tau蛋白，能顯著改善ad小鼠的認知功能。
12、本專利技術合成的能夠與tau蛋白特異性結合的核酸適體apt，其可以在室溫孵育1500nm的apt?60min的條件下，與單核/巨噬細胞進行交聯，形成apt-mono，通過流式分析驗證其交聯效率達到了99％，同時通過激光共聚焦驗證了apt-mono具有本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種特異性結合Tau蛋白的核酸適體修飾的免疫細胞。
2.根據權利要求1所述的免疫細胞，所述核酸適體的核苷酸序列與SEQ?ID?NO:1-28中的任一項有98％以上的同一性；
3.根據權利要求1或2所述的免疫細胞，所述免疫細胞選自巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、單核細胞和肥大細胞；優選的所述免疫細胞為巨噬細胞。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的免疫細胞，所述修飾通過所述核酸適體上的基團與所述免疫細胞膜上存在的基團結合進行。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的免疫細胞，所述修飾通過所述核酸適體上的生物素與所述免疫細胞膜上的鏈霉親和素結合進行。
6.根據權利要求1-4中任一項所述的免疫細胞，所述修飾通過所述核酸適體上存在炔基的基團與所述免疫細胞膜上存在疊氮的基團結合進行；
7.一種藥物組合物，其包含權利要求1-6中任一項所述的免疫細胞和藥學上可接受的載體。
8.權利要求1-6中任一項所述的免疫細胞或權利要求7所述的藥物組合物在制備用于治療Tau相關疾病的藥物中的用途，
9.權利要
10.根據權利要求9所述的制備方法，所述核酸適體的濃度為100-2000nM；
...【技術特征摘要】
1.一種特異性結合tau蛋白的核酸適體修飾的免疫細胞。
2.根據權利要求1所述的免疫細胞，所述核酸適體的核苷酸序列與seq?id?no:1-28中的任一項有98％以上的同一性；
3.根據權利要求1或2所述的免疫細胞，所述免疫細胞選自巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、單核細胞和肥大細胞；優選的所述免疫細胞為巨噬細胞。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的免疫細胞，所述修飾通過所述核酸適體上的基團與所述免疫細胞膜上存在的基團結合進行。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的免疫細胞，所述修飾通過所述核酸適體上的生物素與所述免疫細胞膜上的鏈霉親和素結合進行。
<...【專利技術屬性】
技術研發人員：譚蔚泓，邱麗萍，卓雨婷，謝斯滔，
申請(專利權)人：中國科學院杭州醫學研究所，
類型：發明
國別省市：
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