【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本說明書涉及用于檢測結合劑的無細胞和無病原體的系統、方法和試劑盒。本說明書還涉及表達模擬宿主-病原體相互作用的表面受體和配體的宿主納米顆粒和外來納米顆粒用于檢測生物樣品中存在的結合劑的用途。
技術介紹
1、中和劑(例如中和抗體)的檢測是人類和獸醫傳染病研究和開發應用的關鍵組成部分，特別是在疫苗和治療劑開發、流行病學監測、群體免疫監測、接觸追蹤(免疫持續時間)和針對新變體的上市疫苗的監測方面。特別是在快速發展的傳染病如sars-cov-2大流行和新變體出現的背景下，用于檢測人樣品中的中和劑的方法對于控制疾病的傳播是重要的。用于檢測中和劑，特別是用于檢測病原體中和劑或阻斷分子的現有方法和試劑盒不能密切模擬體外宿主-病原體相互作用的生理條件。此外，這些方法通常是耗時的，并且依賴于重組蛋白和單克隆和/或多克隆抗體的產生，這可能降低測定的靈敏度或特異性。因此，非常需要用于檢測的中和劑的改進方法，所述方法快速、完全可定制并且緊密復制宿主-病原體相互作用同時在生物安全級別2環境之外安全使用。
技術實現思路
1、在第一方面，本文描述了一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外系統。所述系統通常包括：宿主納米顆粒，其包括表達或經工程改造以表達由外來配體識別的表面受體的宿主細胞的片段；和外來納米顆粒，其在其表面上表達或經工程改造以表達所述外來配體，使得所述外來配體能夠被所述宿主納米顆粒的所述表面受體識別；其中所述宿主納米
2、在另一方面，本文描述了一種用于篩選樣品中結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透)的存在的試劑盒。所述試劑盒通常包括：第一容器，其包括宿主納米顆粒，所述宿主納米顆粒包括表達被外來配體識別的表面受體的哺乳動物宿主細胞的片段或由其組成；和第二容器，其包括外來納米顆粒，所述外來納米顆粒在其表面上表達所述外來配體，使得所述外來配體能夠被所述宿主納米顆粒的所述表面受體識別，其中所述宿主納米顆粒和/或所述外來納米顆粒還包括可檢測標記，并且其中當與缺乏所述結合劑的相應樣品相比，所述宿主納米顆粒或所述外來納米顆粒與所述樣品一起預孵育降低所述宿主納米顆粒與所述外來納米顆粒之間的結合/相互作用時，所述樣品中存在所述結合劑。
3、在另一方面，本文描述了一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外方法。所述方法通常包括：提供如本文所定義的宿主納米顆粒和外來納米顆粒；將所述宿主納米顆粒或所述外來納米顆粒與所述流體樣品一起預孵育以實現所述結合劑的結合/相互作用；將所述宿主納米顆粒與所述外來納米顆粒一起孵育并測量它們之間的結合/相互作用，其中與和缺乏所述結合劑的相應流體樣品一起預孵育相比，在與所述流體樣品一起預孵育之后，所述宿主納米顆粒與所述外來納米顆粒之間的結合/相互作用水平的降低指示所述流體樣品中存在結合劑。
4、本說明書涉及多個文獻，其內容通過引用整體并入本文。
5、一般定義
6、標題和其他標識符，例如(a)、(b)、(i)、(ii)等，僅為了便于閱讀說明書和權利要求書而呈現。在說明書或權利要求書中使用標題或其他標識符并不一定要求步驟或元素按照字母或數字順序或它們呈現的順序來執行。
7、單詞“一”當與術語“包含”在權利要求書和/或說明書中一起使用時可意味“一個”，但也可與“一個或更多個”、“至少一個”和“一個或超過一個”的意思一致。
8、如本說明書和權利要求書中所用，單詞“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性或開放性的且并不排除額外的未記載的要素或方法步驟。
9、術語“約”是用于指示值包括用于測定所述值的裝置或方法的誤差的標準差。一般來說，術語“約”是指最多10％的可能變化。因此，術語“約”包括數值的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％和10％的變化。除非另有說明，否則在范圍之前使用的術語“約”適用于該范圍的兩端。
10、本說明書的其他目的、優點和特征在閱讀以下僅通過示例的方式給出的具體實施方案的非限制性描述并參考附圖時將變得更加明顯。
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1.一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外系統，所述系統包括：
2.一種用于篩選樣品中結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透)的存在的試劑盒，所述試劑盒包括：
3.一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外方法，所述方法包括：
4.根據權利要求1至3中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒和/或所述外來納米顆粒是囊泡狀或線性形狀的。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒由宿主生產細胞產生或衍生。
6.根據權利要求5所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主生產細胞是真核(例如，酵母或哺乳動物)細胞。
7.根據權利要求5或6所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主生產細胞是：
8.根據權利要求1至7中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒是包括誘導宿主細胞出
9.根據權利要求8所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外源病毒結構蛋白與所述可檢測標記融合。
10.根據權利要求1至9中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒由微生物(例如，細菌、真菌、病毒或寄生蟲)、真核(例如，酵母或哺乳動物)生產細胞產生或衍生，或由自組裝病毒結構蛋白(例如，衣殼蛋白)形成。
11.根據權利要求10所述的系統、試劑盒或方法，其中產生或衍生所述外來納米顆粒的所述微生物或真核生產細胞是：
12.根據權利要求1至11中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒是包括誘導宿主細胞出芽的外源病毒結構蛋白(例如，晚期組裝(L)結構域蛋白或多蛋白，如HIV?Gag)的囊泡外來納米顆粒。
13.根據權利要求1至12中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒衍生自SARS-CoV-2病毒和/或在其表面上表達或經工程改造以表達SARS-CoV-2刺突蛋白或其一部分。
14.根據權利要求1至13中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒在其表面上表達或經工程改造以表達血管緊張素轉換酶2(ACE2)和/或跨膜絲氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)。
15.根據權利要求1至14中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來配體是在微生物細胞上表達的表面配體、自身抗原或過敏原。
16.根據權利要求1至15中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述可檢測標記在內部表達或在所述外來納米顆粒或所述宿主納米顆粒的表面上表達。
17.根據權利要求1至16中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述可檢測標記是熒光或發光分子(例如，蛋白質)。
18.根據權利要求1至17中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述可檢測標記在與底物、蛋白質或酶接觸時是可檢測的。
19.根據權利要求1至18中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述樣品是血液、血清、淚液、唾液、血漿、尿液、鼻分泌物、支氣管肺泡灌洗液(BALF)、糞便或腦脊液。
20.根據權利要求1至19中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述結合劑是抗體或其抗原結合片段、肽、蛋白質、核酸(例如，適體或核酶)或小分子。
21.根據權利要求1至20中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述結合劑識別所述宿主納米顆粒的表面受體或所述外來納米顆粒的外來配體。
22.根據權利要求1至21中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述結合劑防止或減弱所述宿主納米顆粒和所述外來納米顆粒的膜的融合。
23.根據權利要求1至22中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述結合劑防止或減弱所述外來納米顆粒內化/滲透到所述宿主納米顆粒中。
24.根據權利要求1至23中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒包括表達或經工程改造以表達被所述外來配體識別的所述表面受體的所述宿主細胞的質膜片段。
25.根據權利要求1至24中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒和/或所述外來納米顆粒被固定在固體載體上或用于固定在固體載體上。
26.根據權利要求1至24中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒和/或所述外來納米顆粒處于懸浮液中。
27.根據權利要求2和4至2...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外系統，所述系統包括：
2.一種用于篩選樣品中結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透)的存在的試劑盒，所述試劑盒包括：
3.一種用于檢測流體樣品(例如，生物流體樣品)中的結合劑(例如，破壞宿主-微生物相互作用和/或融合/滲透的中和劑或阻斷劑)的體外方法，所述方法包括：
4.根據權利要求1至3中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒和/或所述外來納米顆粒是囊泡狀或線性形狀的。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒由宿主生產細胞產生或衍生。
6.根據權利要求5所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主生產細胞是真核(例如，酵母或哺乳動物)細胞。
7.根據權利要求5或6所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主生產細胞是：
8.根據權利要求1至7中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述宿主納米顆粒是包括誘導宿主細胞出芽的外源病毒結構蛋白(例如，晚期組裝(l)結構域蛋白或多蛋白，如hiv?gag)的囊泡納米顆粒。
9.根據權利要求8所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外源病毒結構蛋白與所述可檢測標記融合。
10.根據權利要求1至9中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒由微生物(例如，細菌、真菌、病毒或寄生蟲)、真核(例如，酵母或哺乳動物)生產細胞產生或衍生，或由自組裝病毒結構蛋白(例如，衣殼蛋白)形成。
11.根據權利要求10所述的系統、試劑盒或方法，其中產生或衍生所述外來納米顆粒的所述微生物或真核生產細胞是：
12.根據權利要求1至11中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒是包括誘導宿主細胞出芽的外源病毒結構蛋白(例如，晚期組裝(l)結構域蛋白或多蛋白，如hiv?gag)的囊泡外來納米顆粒。
13.根據權利要求1至12中任一項所述的系統、試劑盒或方法，其中所述外來納米顆粒衍生自sars-cov-2病毒和/或在其表面上表達或經工程改造以表達sars-cov-2刺突蛋白或其一部分。
14.根據權利要求1至13中任一項所述的系統...
【專利技術屬性】
技術研發人員：M·曼吉翁，J·尚佩爾，
申請(專利權)人：AB驗證公司FAS伊萬諾生物科學，
類型：發明
國別省市：
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