【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及抗體制備，特別涉及抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體及其應用。
技術介紹
1、cd69又稱活化誘導分子(activation?inducer?molecule，aim)、早期活化抗原-1(early?activation?antigen-1，ea-1)、leu23、mlr-3或bl?ac/p26，是淋巴細胞活化最早表達的膜表面分子。人cd69是由199個氨基酸組成的完整的ii型跨膜糖蛋白，包括40個殘基的細胞內(nèi)區(qū)、21個殘基的跨膜區(qū)和138個殘基的細胞外區(qū)，細胞外區(qū)有c-型凝集素(ca2+依賴性糖基識別區(qū)域(crd))，因此，cd69亦屬于c-型凝集素受體家族。此外，cd69也屬于自然殺傷細胞(natural?killer?cell，nk)特異的遺傳因子復合體家族的一員，不同的是，nkr-p1、ly-49與nkg2分子只表達在nk細胞上，而cd69可在多種細胞上表達，說明cd69有多種特性。
2、cd69是已知的免疫細胞早期激活分子，對多種血細胞的激活、增殖和分化起重要作用，可在活化的b細胞、t細胞、nk細胞、巨噬細胞、單核細胞和粒細胞、胸腺細胞上表達。cd69作為t淋巴細胞激活后最早表達的表面分子，當其表達之后，還可作為細胞共刺激信號促進t細胞的進一步活化和增殖，cd69可通過引發(fā)細胞外ca2+內(nèi)流、上調(diào)細胞內(nèi)tnf-α、ifn-γ等細胞因子的分泌以及il-2及其受體的合成與表達，增強轉錄因子ap-1的活性，并通過細胞內(nèi)的信號傳導增強t細胞的增殖。cd69這種僅在細胞活化后表達的特性，使其成為細胞活化的標
3、鑒于cd69在血液和免疫疾病中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用及其在免疫激活中作為生物標志物的突出價值，開發(fā)一種靈敏度高、特異性強的cd69蛋白檢測方法具有重要意義。當前，免疫檢測如酶聯(lián)免疫吸附(elisa)法被開發(fā)并廣泛用于定量測量血漿、血清、細胞裂解物和培養(yǎng)上清液以及組織樣品中的cd69蛋白水平，其核心技術是特異性識別cd69的抗體。但現(xiàn)階段市面上的cd69體外elisa試劑盒伴有抗體親和力較低、檢測靈敏度較差的缺點，難以實現(xiàn)樣本中痕量蛋白的檢測。因此，急需開發(fā)能夠特異性識別人cd69的高靈敏性單克隆抗體。
技術實現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術存在的上述問題，本專利技術提供了抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體及其應用，本專利技術提供的抗體具有特異性高、親和力好、抗干擾能力強等優(yōu)勢，有利于提高cd69蛋白檢測的特異性、準確性、靈敏度和信噪比，以其開發(fā)雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測體系具有選擇性和特異性高、檢測限低以及線性范圍寬等優(yōu)勢。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術具體通過以下技術方案實現(xiàn)：
3、本專利技術第一方面提供了一種抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體，為第一抗體或第二抗體，其中：所述第一抗體輕鏈可變區(qū)上互補決定區(qū)cdr1-3的氨基酸序列分別如seq?idno.3-5所示，重鏈可變區(qū)上互補決定區(qū)cdr1-3的氨基酸序列分別如seq?id?no.8-10所示；所述第二抗體輕鏈可變區(qū)上互補決定區(qū)cdr1-3的氨基酸序列分別如seq?id?no.13-15所示，重鏈可變區(qū)上互補決定區(qū)cdr1-3的氨基酸序列分別如seq?id?no.18-20所示。
4、進一步地，所述第一抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示；所述第二抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?idno.12所示，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.17所示。
5、進一步地，所述第一抗體輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.6所示；所述第二抗體輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.11所示，重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.16所示。
6、進一步地，所述第一抗體或所述第二抗體為全長抗體或抗體片段；所述抗體片段選自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一種。
7、本專利技術第二方面提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼如上所述的第一抗體和/或第二抗體。
8、本專利技術第三方面提供了一種重組載體或宿主細胞，包含編碼如上所述的第一抗體和/或第二抗體的核酸分子。
9、本專利技術第四方面提供了如上所述的抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體、如上所述的核酸分子、如上所述的重組載體或宿主細胞在制備免疫檢測人cd69蛋白的試劑盒中的應用。
10、本專利技術第五方面提供了一種免疫檢測人cd69蛋白的試劑盒，所述試劑盒包括如上所述的第一抗體和/或第二抗體。
11、進一步地，所述試劑盒為酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。
12、更進一步地，所述試劑盒為雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，所述試劑盒包括所述第一抗體和所述第二抗體，且所述第一抗體為捕獲抗體，偶聯(lián)有可檢測標記的所述第二抗體為檢測抗體。
13、本專利技術的優(yōu)點及積極效果為：
14、本專利技術提供的第一抗體和第二抗體具有對人cd69蛋白的特異性高、親和力好、抗干擾能力強等優(yōu)勢，能夠降低免疫檢測的背景、假陽性率和假陰性率，有利于提高檢測特異性、準確性、靈敏度和信噪比，為人cd69蛋白的免疫檢測提供了核心原材料。以第一抗體作為捕獲抗體、第二抗體作為檢測抗體開發(fā)的人cd69蛋白雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測體系，具有選擇性和特異性高、檢測限低以及線性范圍寬等優(yōu)勢，檢測限低至38.50pg/ml，可實現(xiàn)檢測樣本中人cd69蛋白尤其是痕量蛋白水平的高精度、高特異性和高靈敏度檢測，為定性或定量檢測人cd69蛋白提供了有力的手段。
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1.一種抗人CD69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，為第一抗體或第二抗體，其中：
2.根據(jù)權利要求1所述的抗人CD69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；
3.根據(jù)權利要求2所述的抗人CD69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體輕鏈的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，重鏈的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；
4.根據(jù)權利要求1所述的抗人CD69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體或所述第二抗體為全長抗體或抗體片段；
5.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼如權利要求1-4任一項所述的第一抗體和/或第二抗體。
6.一種重組載體或宿主細胞，其特征在于，包含如權利要求5所述的核酸分子。
7.如權利要求1-4任一項所述的抗人CD69蛋白的兔單克隆抗體、如權利要求5所述的核酸分子或如權利要求6所述的重組載體或宿主細胞在制備免疫檢測人CD69蛋白的試劑盒中的應用。
9.根據(jù)權利要求8所述的免疫檢測人CD69蛋白的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。
10.根據(jù)權利要求9所述的免疫檢測人CD69蛋白的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，所述試劑盒包括所述第一抗體和所述第二抗體，且所述第一抗體為捕獲抗體，偶聯(lián)有可檢測標記的所述第二抗體為檢測抗體。
...【技術特征摘要】
1.一種抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，為第一抗體或第二抗體，其中：
2.根據(jù)權利要求1所述的抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示；
3.根據(jù)權利要求2所述的抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.6所示；
4.根據(jù)權利要求1所述的抗人cd69蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述第一抗體或所述第二抗體為全長抗體或抗體片段；
5.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼如權利要求1-4任一項所述的第一抗體和/或第二抗體。
6.一...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：申一林，盛飛，代海艷，吳海，胡文娟，李倩倩，左健蘭，
申請(專利權)人：武漢愛博泰克生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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