【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及反應容器及生物化學分析方法。本申請基于2016年4月27日在日本申請的特愿2016-089362號主張優先權，將其內容援引于此。
技術介紹
1、一直以來已知通過對生物體分子進行解析來進行疾病或體質的診斷。
2、例如，已知有利用dna內記錄的單核苷酸多態性(single?nucleotidepolymorphism：snp)解析進行的體質診斷、利用體細胞突變解析進行的抗癌藥的投予判斷、利用病毒的蛋白質解析進行的感染癥應對等。
3、例如，對于癌癥的治療藥物，教示了通過在egfr-tki(酪氨酸激酶抑制劑)的投予前后對egfr(表皮生長因子受體)基因突變的擴增量(拷貝數)進行定量，可以成為治療效果的指標。以往一直進行使用了實時pcr(聚合酶鏈反應)的定量，但知道了檢查中使用的核酸的總量發生變化會對定量性造成影響，目前開發出了核酸的總量不會影響定量性的數字pcr技術。
4、數字pcr技術是指將pcr試劑與核酸的混合物分割成多個微小液滴、對這些微小液滴進行以混合物中的核酸中成為檢測對象的核酸為模板的pcr擴增、從而由含有模板核酸的微小液滴檢測出因pcr擴增所產生的熒光等信號、計算微小液滴總數中檢測到信號的微小液滴的比例、由此對試樣中的核酸進行定量的數字解析技術之一。
5、數字解析技術需要用于將與混合物及微小液滴結合而發光的熒光珠粒密封、且可利用顯微鏡進行讀取的密封容器。在該密封的容器內，為了能夠分別地辨別各熒光珠粒和液滴，在容器內的底面上均等地配置收納珠粒的微小孔穴，按照珠粒收
6、數字pcr中，按照存在于1個微小液滴內的成為模板的核酸為0個～1個的方式，將pcr反應試劑與核酸的混合物進行了稀釋。數字pcr中，為了提高核酸擴增的靈敏度，并且為了對多個微小液滴同時地進行核酸擴增，優選各微小液滴的體積小。例如，專利文獻1中公開了按照各孔的容積達到6nl(納升)的方式形成的微陣列狀的反應容器。另外，專利文獻2中公開了下述方法：對在流路內形成有多個深度為3μm、直徑為5μm的孔的微陣列、向流路內流入試樣并將試樣導入至各孔內之后，利用密封液擠出流路內的剩余試劑，從而向各孔內導入試樣。
7、現有技術文獻
8、專利文獻
9、專利文獻1：國際公開第2013/151135號
10、專利文獻2：國際公開第2014/007190號
技術實現思路
1、專利技術要解決的技術問題
2、具有流路的微陣列狀的反應容器可以通過對多個樹脂構件進行焊接來制造。數字pcr等數字解析技術中，有時使用可見光或熒光對反應容器內的反應狀態進行觀察，對反應容器有時要求透光性。作為以高精度將樹脂構件之間進行焊接的技術，已知將具有透光性的樹脂構件和具有光吸收性的樹脂構件進行激光焊接的激光透射焊接法。但是，通過激光透射焊接法焊接得到的多個樹脂構件由于含有帶有光吸收性的樹脂構件，因此作為整體的透光性低，在進行使用了可見光的明視野觀察時，存在視野變暗的問題。
3、本專利技術鑒于上述事實而作出，其目的在于提供能夠以高精度對具有透光性的樹脂進行焊接、同時能夠獲得明視野觀察下的充分亮度的反應容器；以及使用了該反應容器的生物化學分析方法。
4、用于解決技術問題的手段
5、本專利技術第一方式的反應容器具備：具有在第一表面上開口的多個凹部的透明的基材；和紅外線吸收性的蓋構件，其按照成為在所述第一表面中含有所述多個凹部的區域的內側、在該蓋構件與所述第一表面之間空有間隙的狀態的方式，在所述區域的外側焊接在所述基材上，所述蓋構件能夠將可見光波長區域中的至少一部分范圍的光透射。
6、上述第一方式中，所述蓋構件可以是可見光波長區域中的480nm以上且570nm以下范圍的光的透射率為25％以上。
7、上述第一方式中，可以是在相對于所述第一表面垂直的方向上，所述蓋構件的所述第一表面一側的紅外線吸收率最高。
8、上述第一方式中，上述方式的反應容器可以進一步具備按照能夠接觸于收納在所述凹部內的液體的方式配置在所述凹部內的檢測電極。
9、上述第一方式的反應容器可以在所述第一表面上具有多個所述區域，按照多個所述區域成為相互間獨立的多個反應區間的方式將多個所述區域的各自的外周焊接在所述蓋構件上。
10、上述第一方式中，所述蓋構件的總光線透射率可以為0.01～60％。
11、本專利技術第二方式的生物化學分析方法是使用了上述第一方式的反應容器的生物化學分析方法，其含有下述工序：將按照1個檢測對象物質進入所述凹部的方式稀釋而成的試樣送液至所述基材與所述蓋構件之間的所述間隙中的送液工序；向所述間隙中送液油性的密封液、將多個凹部分別地進行密封的密封工序；在所述密封工序之后，使用所述一部分范圍的光對所述凹部內的試樣進行明視野觀察的第一觀察工序；以及在所述密封工序之后，透過所述基材對所述凹部內的試樣照射激發光，同時對所述試樣對應于所述激發光所產生的熒光進行觀察的第二觀察工序。
12、上述第二方式的生物化學分析方法可以在所述密封工序之后、所述第二觀察工序之前進一步含有在所述凹部內進行信號放大反應的反應工序。
13、上述第二方式中，所述信號放大反應可以是酶反應。
14、上述第二方式中，所述酶反應可以是等溫反應。
15、上述第二方式中，所述酶反應可以是侵入反應。
16、上述第二方式中，所述試樣可以含有：成為分析對象物的dna、rna、mirna、mrna或蛋白質；和針對所述分析對象物的特異性標記物質。
17、上述第二方式中，所述分析對象物可以含有核酸，所述特異性標記物質可以含有與所述分析對象物不同的核酸、酶、粒子、抗體及脂質體中的至少1種。
18、此外，作為粒子，可舉出聚合物珠粒、磁性珠粒、熒光珠粒、熒光標記磁性珠粒、二氧化硅珠粒、金屬膠體。
19、上述第二方式中，所述密封液可以含有氟系油和硅系油中的至少任一種。
20、專利技術效果
21、根據本專利技術上述方式的反應容器，可以在以高精度對具有透光性的樹脂進行焊接的同時、獲得明視野觀察下的充分的亮度。
22、根據本專利技術上述方式的生物化學分析方法，可以使用上述反應容器進行明視野觀察及熒光觀察。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種反應容器，其具備：
2.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述蓋構件的可見光波長區域中的480nm以上且570nm以下范圍的光的透射率為25％以上。
3.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述隔壁部按照從所述蓋構件的下表面的外周邊緣部向所述基材突出的方式設置。
4.根據權利要求1所述的反應容器，其中，在相對于所述第一表面垂直的方向上，所述蓋構件的所述第一表面一側的紅外線吸收率最高。
5.根據權利要求1所述的反應容器，其進一步具備按照能夠接觸于收納在所述凹部內的液體的方式配置在所述凹部內的檢測電極。
6.根據權利要求1所述的反應容器，其中，
7.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述蓋構件的總光線透射率為0.01～60％。
8.一種生物化學分析方法，其是使用了權利要求1～7中任一項所述的反應容器的生物化學分析方法，其含有下述工序：
9.根據權利要求8所述的生物化學分析方法，其中，在所述密封工序之后、所述第二觀察工序之前，進一步含有在所述凹部內進行信號放大反應的反應工序。p>
10.根據權利要求9所述的生物化學分析方法，其中，所述信號放大反應是酶反應。
11.根據權利要求10所述的生物化學分析方法，其中，所述酶反應是等溫反應。
12.根據權利要求10所述的生物化學分析方法，其中，所述酶反應是侵入反應。
13.根據權利要求8～12中任一項所述的生物化學分析方法，其中，所述試樣含有：
14.根據權利要求13所述的生物化學分析方法，其中，
15.根據權利要求8所述的生物化學分析方法，其中，所述密封液含有氟系油和硅系油中的至少任一種。
...【技術特征摘要】
1.一種反應容器，其具備：
2.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述蓋構件的可見光波長區域中的480nm以上且570nm以下范圍的光的透射率為25％以上。
3.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述隔壁部按照從所述蓋構件的下表面的外周邊緣部向所述基材突出的方式設置。
4.根據權利要求1所述的反應容器，其中，在相對于所述第一表面垂直的方向上，所述蓋構件的所述第一表面一側的紅外線吸收率最高。
5.根據權利要求1所述的反應容器，其進一步具備按照能夠接觸于收納在所述凹部內的液體的方式配置在所述凹部內的檢測電極。
6.根據權利要求1所述的反應容器，其中，
7.根據權利要求1所述的反應容器，其中，所述蓋構件的總光線透射率為0.01～60％。
8.一種生物化學分析方法，其是使用...
【專利技術屬性】
技術研發人員：松川昌洋，牧野洋一，星野昭裕，
申請(專利權)人：凸版印刷株式會社，
類型：發明
國別省市：
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