【技術實現步驟摘要】
【】本專利技術涉及微生物試劑盒，特別涉及基于腸道微生物菌群預測化療藥物肝損傷的系統及其應用。
技術介紹
0、
技術介紹
1、奧沙利鉑(oxaliplatin,oxa)為目前nccn指南推薦治療胃癌及結直腸癌患者的一線基礎化療藥物，但是隨著含oxa化療方案使用周期數的增加，其對機體的毒副作用也隨之增強，其中肝損傷是含oxa化療方案常見的不良反應，常導致化療時間推延或者化療劑量減少，一定程度上減弱了抗腫瘤療效，最終影響患者的預后和生存。oxa化療后肝損傷病理主要表現為肝細胞脂肪樣變以及肝竇損傷。臨床中oxa化療相關肝損傷的診斷和肝損傷程度評價面臨困難。肝組織病理是診斷oxa化療相關肝損傷和損傷程度的金標準，但肝組織活檢作為侵入性檢查且受到倫理限制，因此臨床醫生無法獲得oxa化療患者的肝組織對肝損傷及損傷程度進行診斷。臨床醫生主要依據外周血肝細胞酶學指標alt、ast水平判斷oxa化療相關肝損傷的嚴重程度[7-8]。然而，oxa化療相關肝損傷較少出現肝細胞壞死，肝組織病理主要表現為不同程度的肝細胞脂肪樣變和肝竇損傷，因此，oxa化療后患者外周血肝細胞酶學指標alt、ast水平并不能完全預測oxa化療后肝細胞脂肪樣變和肝竇損傷病理損傷情況，對oxa化療相關肝損傷的診斷和損傷程度評估價值較差。因此，目前臨床中oxa化療相關肝損傷的診斷和損傷程度評價缺乏無創性生物標志物，急需找到一種可行的無創性生物標志物來協助臨床醫生對oxa化療相關肝損傷進行診斷、評價肝損傷程度和護肝療效。
2、人體腸道內棲居著約40萬億個細菌，
3、樹鼩作為一種小型哺乳動物，其基因組與人類的相似性遠高于小鼠和大鼠等嚙齒類動物，其生物學特性也較嚙齒類動物更加接近人類。本研究前期成功建立了oxa化療多周期化療肝損傷樹鼩模型，該模型中oxa多周期化療后樹鼩肝臟病理表現為肝細胞脂肪樣變和肝竇擴張，與臨床oxa多周期化療后肝組織典型病理改變相似，因此可以用于oxa多周期化療致肝損傷過程中腸道菌群的動態變化情況研究。本研究納入oxa多周期化療肝損傷樹鼩模型和oxa為基礎化療方案的結直腸癌患者的腸道菌群檢測結果。采用oxa對樹鼩進行多周期化療，應用16s?rdna測序技術分析oxa多周期化療致樹鼩肝損傷過程中腸道菌群的動態變化情況。對接受以oxa為基礎藥物化療的結直腸癌患者的腸道菌群進行16s?rdna測序技術分析，探索以oxa為基礎多周期化療過程中結直腸癌患者腸道菌群的變化情況。將結直腸癌患者和樹鼩的腸道菌群檢測結果進行綜合分析，篩選出在oxa化療期間可用于判定肝臟受損及損傷程度的微生物菌群做為標志物，通過測試該標志物來檢測判定oxa化療后是否出現肝臟損傷及損傷程度。
技術實現思路
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技術實現思路
1、鑒于上述內容，進一步對oxa為基礎化療方案的結直腸癌患者和樹鼩oxa多周期化療肝損傷情況和微生物菌群的變化趨勢進行研究，為后期開發微生物菌群試劑盒提供新的理論依據。
2、為達到上述目的，本專利技術所采用的技術方案是：
3、預測化療藥物對肝臟損傷情況的微生物菌群標志物，所述微生物菌群標志物為由埃希氏-志賀氏菌屬(escherichia-shigella)、普雷沃氏菌屬(prevotella)、考拉桿菌屬(phascolarctobacterium)、瘤胃球菌屬(ruminococcus)、另枝桿菌屬(alistipes)、瓊脂桿菌屬(agathobacter)、lachnospiraceae_nk4a136_group、營發酵單胞菌屬(dysgonomonas)、梭狀鏈桿菌屬(fusicatenibacter)、消化球菌屬(peptococcus)、芽孢桿菌屬(bacillus)、摩根氏菌屬(morganella)的一種或多種組成。
4、本專利技術還包括所述的微生物菌群標志物在制備預測化療藥物對肝臟損傷情況試劑盒上的應用，所述試劑盒包括提取動物和結直腸癌患者糞便微生物dna的引物對和記載在可讀載體上的如下條件：
5、(1)當埃希氏-志賀氏菌屬(escherichia-shigella)相對豐度高于8.5837％時，肝臟受到損傷；
6、(2)當另枝桿菌屬(alistipes)相對豐度高于0.0384％時，肝臟受到損傷。
7、進一步的，所述引物對的上游序列為341f:5’-cctacgggnggcwgcag-3’；下游序列為806r:5’-ggactachvgggtatctaat-3’。
8、本專利技術還包括所述的微生物菌群標志物在制備預測化療藥物對肝損傷程度系統上的應用，所述系統包括：(1)提取模塊：用于提取動物和人糞便dna并分析其中菌群的種類和豐度；(2)分析模塊：對提取模塊中得到的菌群數據進行相似性分析；(3)判定模塊：根據分析模塊的分析結果判定動物和人可能的肝損傷程度；
9、所述提取模塊至少包括化療6周與未進行化療的動物的腸道微生物數據，以及接受多周期奧沙利鉑為基礎化療方案后，出現或未出現轉氨酶升高的結直腸癌患者的腸道微生物數據；
10、所述微生物數據包括微生物種類和豐度。
11、進一步的，所述化療藥物為奧沙利鉑。
12、進一步的，所述對象為樹鼩和/或人的結直腸癌患者。
13、本專利技術具有如下有益效果：
14、1、本申請利用樹鼩做為模型動物進行實驗，該動物的基因組與人類的相似性遠高于小鼠和大鼠等嚙齒類動物，其生物學特性也較嚙齒類動物更加接近人類。本研究采用oxa對樹鼩進行多周期化療，應用16s?rdna測序技術分析oxa多周期化療致樹鼩肝損傷過程中腸道菌群的動態變化情況。同時，對接受以oxa為基礎藥物化療的結直腸癌患者的腸道菌群進行分析，探索以oxa為基礎多周期化療過程中結直腸癌患者腸道菌群的動態變化情況。將結直腸癌患者和樹鼩的腸道菌群檢測結果進行綜合分析，找出在oxa化療期間可用于判定肝臟損傷及損傷程度的微生物菌群做為標志物，通過測試該標志物來檢測判定oxa化療后是否出現肝臟損傷及損傷程度。本專利技術的微生物標志物用于評估臨床患者在oxa多周期化療過程中是否出現肝臟損傷及損傷程度，特異性好，靈敏度高。本專利技術所提供的基于微生物菌群標志的檢測試劑盒，所檢測菌群細化到菌屬，且菌屬豐度較高，避免了極低豐度檢測的誤判率，更便于實際臨床應用。
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1.預測化療藥物對肝臟損傷情況的微生物菌群標志物，其特征在于，所述微生物菌群標志物為由埃希氏-志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella)、普雷沃氏菌屬(Prevotella)、考拉桿菌屬(Phascolarctobacterium)、瘤胃球菌屬(Ruminococcus)、另枝桿菌屬(Alistipes)、瓊脂桿菌屬(Agathobacter)、Lachnospiraceae_NK4A136_group、營發酵單胞菌屬(Dysgonomonas)、梭狀鏈桿菌屬(Fusicatenibacter)、消化球菌屬(Peptococcus)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、摩根氏菌屬(Morganella)的一種或多種組成。
2.基于權利要求1所述的微生物菌群標志物在制備預測化療藥物對肝臟損傷情況試劑盒上的應用，其特征在于，所述試劑盒包括提取動物和結直腸癌患者糞便微生物DNA的引物對和記載在可讀載體上的如下條件：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述引物對的上游序列為341F:5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3；下游序列為806R:5
4.基于權利要求1所述的微生物菌群標志物在制備預測化療藥物對肝損傷程度系統上的應用，其特征在于，所述系統包括：(1)提取模塊：用于提取動物和結直腸癌患者的糞便DNA并分析其中菌群的種類和豐度；(2)分析模塊：對提取模塊中得到的菌群數據進行相似性分析；(3)判定模塊：根據分析模塊的分析結果判定動物和結直腸癌患者可能的肝損傷程度；
5.如權利要求2或4所述的應用，其特征在于，所述化療藥物為奧沙利鉑。
6.如權利要求2或4所述的應用，其特征在于，所述物種為樹鼩和/或人。
...【技術特征摘要】
1.預測化療藥物對肝臟損傷情況的微生物菌群標志物，其特征在于，所述微生物菌群標志物為由埃希氏-志賀氏菌屬(escherichia-shigella)、普雷沃氏菌屬(prevotella)、考拉桿菌屬(phascolarctobacterium)、瘤胃球菌屬(ruminococcus)、另枝桿菌屬(alistipes)、瓊脂桿菌屬(agathobacter)、lachnospiraceae_nk4a136_group、營發酵單胞菌屬(dysgonomonas)、梭狀鏈桿菌屬(fusicatenibacter)、消化球菌屬(peptococcus)、芽孢桿菌屬(bacillus)、摩根氏菌屬(morganella)的一種或多種組成。
2.基于權利要求1所述的微生物菌群標志物在制備預測化療藥物對肝臟損傷情況試劑盒上的應用，其特征在于，所述試劑盒包括提取動物和...
【專利技術屬性】
技術研發人員：林有智，陸玉蕾，楊春，易飛，廖小莉，
申請(專利權)人：廣西醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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