【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，尤其涉及一種疫苗佐劑及其應用及豬繁殖與呼吸綜合征疫苗。
技術介紹
1、豬繁殖與呼吸綜合征（prrs，porcine?reproductive?and?respiratorysyndrome）是豬群中的一種高度接觸性傳染病，病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒，該病毒的主要宿主是自然界中的家豬和野豬。不同年齡、品種、性別的豬都可以感染prrsv（porcinereproductive?and?respiratory?syndrome?virus），其中妊娠母豬和哺乳仔豬受害比較嚴重。除了感染動物以外，公豬的精液也已經被確認為prrsv的普遍感染源。
2、目前預防和控制prrs的常用方法是免疫接種疫苗。世界上常用的prrs?疫苗主要有減毒活疫苗和滅活疫苗。prrsv減毒活疫苗保護效果明顯，但因為prrsv變異頻繁導致了疫苗具有很強的毒株特異性，且存在基因重組和毒力返強的風險。減毒活疫苗在免疫的早期階段（感染后7～9d）可以檢測到強烈的抗prrsv抗體反應，但早期產生的抗體是非中和性抗體，它們不但不能阻止病毒的感染，還會引起病毒的抗體依賴性增強，而prrsv特異性中和性抗體在病毒感染后28d才可被檢測到，且始終維持在一個較低的水平。減毒活疫苗誘導的細胞免疫反應在14d出現，水平低、增長慢。prrsv弱毒活疫苗可有效抵御同源野毒株的感染，降低臨床疾病的發生率，但其對異源野毒株的保護效果較差。
3、有研究報道，分別比較了3種商品化疫苗對不同強毒株的保護效力，結果表明弱毒活疫苗免疫后攻毒機體雖不表
4、豬感染prrsv后表現出發病緩慢、持續時間長的特點，感染數月后的豬體內仍然能夠分離到傳染性的毒株。推測病毒持續感染的原因，是因為病毒能在體內不斷變異，或者與被感染個體的年齡和遺傳因素有關，也與病毒的免疫逃避機制相關。但是研究表明prrsv在體內變異的發生頻率非常低，而病毒的免疫逃避影響宿主對prrs的體液和細胞免疫應答無效性，導致血液中病毒與抗體長期存在和病毒的持續感染。
5、prrsv感染pam以后，通過抑制i型干擾素介導的免疫應答，將pam變成適合自身生存的場所。prrsv利用細胞內的氨基酸核苷酸完成子代病毒的復制，待子代病毒成熟后，通過促進細胞凋亡等方式釋放病毒，繼續感染其他細胞和器官，造成其他系統和器官的病變，例如病毒血癥、淋巴結炎等。prrsv除了能夠通過促進肺泡巨噬細胞凋亡的方式導致細胞數量顯著降低，也能夠對肺泡巨噬細胞產生的i型干擾素促進分泌的抗病毒因子產生抑制作用，除此以外，prrsv也能夠增強細胞中的炎癥細胞因子(il-1和腫瘤壞死因子)的活性。許多研究發現，prrsv感染可以增加il-10基因mrna和蛋白表達，并通過調節il-10表達來抑制宿主的免疫應答。因此，肺泡巨噬細胞殺死病毒的能力受到抑制，淋巴結細胞被破壞，黏膜損傷，對疾病的易感性增強。同時，感染的肺泡巨噬細胞或外周血單核細胞調節細胞表面的抗原表達的能力減弱，影響細胞的抗原遞呈功能，導致感染豬的血液中的抗體不能及時將病毒從機體中清除，繼而導致抗體依賴性增強作用以及病毒血癥和持續感染的長期存在。更多關于大群和大齡豬長時間持續感染的試驗表明，持續感染的時問甚至能延長至半年。例如，用prrsv分離株mn-30-100人工感染80只4個月齡豬，感染30-100天后進行pcr檢測，結果表明，98％的豬的組織樣品，包括扁桃體和機體部分淋巴結都呈現陽性。感染110、120和135天的豬分別有80％、30％和20％呈現陽性結果。另一個相似的試驗中，用prrsv分離株vr-2332人工感染109只兩周齡小豬，感染189天后檢測，仍有大約10％-30％豬的組織檢測呈陽性。由于prrsv長期潛伏在豬體內的肺泡巨噬細胞，因此采用早期診斷的方法很難檢測到病毒。更為嚴重的是，病毒對機體的免疫抑制反應導致細菌性繼發性感染。例如，通過檢測221個感染prrsv的豬樣本，結果顯示，58％的患病豬在肺部除了prrsv感染以外，還存在其他細菌感染，主要包括豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌。而且，prrsv感染可以促進其他病毒例如圓環病毒2型(pcv-2)的增殖，造成多種病原同時感染，增加病情的嚴重性。prrsv不僅能夠抑制抗prrsv的特異性抗體的產生，還能抑制其他病毒的特異性抗體產生。例如，仔豬首先感染prrsv?bj-4毒株，然后接種豬瘟弱毒(prv)疫苗，那么仔豬產生的豬瘟弱病毒的特異性抗體水平很顯著低于單獨接種豬瘟疫苗的仔豬阻。
6、prrs滅活疫苗雖然安全性好，但僅誘導極微弱的細胞免疫反應，其免疫保護效果不理想。prrsv免疫逃避，造成豬體的長時間持續帶毒感染，是由于prrsv主要侵蝕機體的巨噬細胞，感染后巨噬細胞當中的m1和m2類型的發生改變，使偏向于m2型細胞分化，該細胞不能殺滅prrsv，又由于巨噬細胞有“回巢現象”，沒有殺滅的prrsv就回巢到淋巴組織，造成其他淋巴細胞的感染。遇到較強的野毒株，感染時會對內臟器官造成損傷。因此，如何減少prrsv產生的免疫抑制，從而，較快的產生高含量的中和抗體，維持時間長，并能減少不同毒株的病毒血癥，增強疫苗的安全性是prrs疫苗發展的重要方向。
技術實現思路
1、本專利技術實施例提供一種疫苗佐劑，旨在解決長時間保持免疫細胞對prrsv記憶，對不同毒株都有保護作用，改變prrsv難以防控的問題。
2、本專利技術實施例是這樣實現的，一種疫苗佐劑，所述疫苗佐劑為將蛋氨酸、水飛薊賓、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、二甲雙胍和穩定劑加入去離子水中得到的水溶性懸液；
3、所述水溶性懸液中的蛋氨酸的濃度為0.5~2.5mg/ml，水飛薊賓的濃度為0.2~1mg/ml，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的濃度為0.5~1.5mg/ml，二甲雙胍的濃度為0.5~5mg/ml，穩定劑的濃度為0.5~1.5g/ml。
4、本專利技術實施例提供的疫苗佐劑中各組分的功效/作用如下：
5、蛋氨酸：較為普遍的應用是營養添加劑。本專利技術擴大了蛋氨酸的應用，可以作用于cd8+細胞，快速激活分裂，可以防止免疫細胞的枯竭。prrsv除了對肺泡巨噬細胞，更多的是引起免疫細胞枯竭，失去免疫功能。蛋氨酸可以使枯竭的免疫細胞恢復，對抗病毒的感染。
6、水飛薊賓：是菊科的藥用植物，數千年來一直被用于治療各種肝臟疾病。具有多種藥理活性，包括抗細胞凋亡，抗纖維化，抗氧化和抗炎活性。本專利技術擴大了水飛薊賓的應用，通過激活?gas6/axl減少在缺氧情況下cd8+細胞的枯竭，恢復免疫系統的對病毒的抑制作用。
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【技術保護點】
1.一種疫苗佐劑，其特征在于，所述疫苗佐劑為將蛋氨酸、水飛薊賓、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、二甲雙胍和穩定劑加入去離子水中得到的水溶性懸液；
2.如權利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于，所述穩定劑為磷酸緩沖鹽。
3.如權利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于，所述疫苗佐劑的pH值為7.2~7.8。
4.如權利要求1-3任一項所述的疫苗佐劑在豬繁殖與呼吸綜合征疫苗中的應用。
5.一種豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，其特征在于，所述豬繁殖與呼吸綜合征疫苗由如權利要求1~3任意一項所述的疫苗佐劑與豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原按照預設的重量比例混合制備而成。
【技術特征摘要】
1.一種疫苗佐劑，其特征在于，所述疫苗佐劑為將蛋氨酸、水飛薊賓、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、二甲雙胍和穩定劑加入去離子水中得到的水溶性懸液；
2.如權利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于，所述穩定劑為磷酸緩沖鹽。
3.如權利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于，所述疫苗佐劑的ph...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高俊鋒，賴志，李凱亮，孔維蘇，馬晶晶，盤金華，劉俊偉，潘雅怡，武帥豪，孫沁兵，
申請(專利權)人：龍闊蘇州生物工程有限公司，
類型：發明
國別省市：
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