【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于益生菌凍干，具體涉及一種乳酸乳球菌復(fù)合凍干保護(hù)劑的制備方法。
技術(shù)介紹
1、乳酸乳球菌是一類重要的微生物，屬于革蘭氏陰性菌，常被應(yīng)用于食品發(fā)酵領(lǐng)域，它具有顯著的酸化能力和蛋白質(zhì)水解活性，能夠賦予發(fā)酵食品良好的風(fēng)味。利用乳酸乳球菌發(fā)酵牛奶會(huì)在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生大量核黃素，有利于人體健康和維生素的補(bǔ)充。乳酸乳球菌也被認(rèn)為是一種潛在的益生菌資源，能夠產(chǎn)生抗菌肽等有益代謝物，可以有效抑制食源性病原體的生長(zhǎng)，有利于食品保鮮。
2、目前常采用真空冷凍干燥技術(shù)生產(chǎn)乳酸乳球菌凍干菌粉，以賦予其抵抗外界不利環(huán)境的能力、延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間、提高菌株存活率、有利于保存和運(yùn)輸。制備得到的凍干菌粉也可以應(yīng)用于發(fā)酵劑的制備、益生菌膠囊的制備等。但是真空冷凍干燥過(guò)程會(huì)對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜完整性、流動(dòng)性和通透性造成不利影響，影響胞內(nèi)酶，造成細(xì)菌的機(jī)械性損傷。研究表明，應(yīng)用凍干保護(hù)劑對(duì)菌體進(jìn)行保護(hù)，可以有效提升其冷凍干燥存活率。許多物質(zhì)可以作為凍干保護(hù)劑應(yīng)用，例如：碳水化合物能夠防止冰晶的形成并提供機(jī)械性保護(hù)；脫脂乳粉可以為菌體提供強(qiáng)大的保護(hù)屏障，隔絕菌體細(xì)胞與冰晶和氧氣相接觸，減少應(yīng)變損傷；甘露醇可以提高玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度，提高冷凍干燥速度等。目前，以10％脫脂乳粉、5％蔗糖作為凍干保護(hù)劑，可以將科氏乳桿菌的凍干存活率提升至67％；以10％蔗糖、2.5％麥芽糖和12％羥脯氨酸作為凍干保護(hù)劑，鼠李糖乳桿菌凍干存活率為55.84％；以5％蔗糖、8％脫脂乳粉和4％谷氨酸鈉作為凍干保護(hù)劑，嗜熱鏈球菌凍干存活率達(dá)到90.59％。
3、cn11338853
4、cn111356760a的專利技術(shù)《細(xì)菌或李斯特菌菌株的凍干組合物和方法》告知：凍干配方的設(shè)計(jì)可取決于活性藥物成分的要求和預(yù)期的給藥途徑。配方可以由緩沖劑和執(zhí)行一種或多種功能的一種或多種賦形劑組成。這樣的賦形劑可為，例如，ph調(diào)節(jié)劑、填充劑(例如蔗糖、甘露醇、麥芽糖、海藻糖、右旋糖和乳糖)、穩(wěn)定劑例如冷凍保護(hù)劑(例如peg)和凍干保護(hù)劑(例如二糖)，或張力調(diào)節(jié)劑(例如nacl、甘露醇、蔗糖、甘氨酸，和甘油)。
5、cn104560717a的專利技術(shù)《一種用于飼用屎腸球菌凍干制劑的保護(hù)劑及制備方法》告知：保護(hù)劑成分的選擇及配制：分別配制濃度為7％的脫脂奶粉溶液，1％的麥芽糊精、低聚半乳糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖和甘油溶液，0.1％的谷氨酸鈉、甘氨酸和賴氨酸溶液，2％的山梨醇和甘露醇溶液，滅菌后進(jìn)行單因素試驗(yàn)(其中氨基酸類保護(hù)劑過(guò)濾除菌，其余保護(hù)劑滅菌條件為115℃，20min)。
6、cn1623408a的專利技術(shù)《一種優(yōu)化的乳酸菌和益生菌冷凍保護(hù)劑組合物》告知：本專利技術(shù)對(duì)蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糊精、山梨醇、甘油、側(cè)金盞花醇等13種材料對(duì)乳酸菌的凍干保護(hù)效果進(jìn)行了比較研究，采用l16(45)正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)試驗(yàn)，設(shè)計(jì)出冷凍保護(hù)劑最佳配方組合，該組合為蔗糖、麥芽糊精、山梨醇和谷氨酸鈉，其最佳的濃度比為4∶4∶3∶4。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種乳酸乳球菌復(fù)合凍干保護(hù)劑及其制備方法。
2、為了解決上述問(wèn)題，本專利技術(shù)提供一種乳酸乳球菌復(fù)合凍干保護(hù)劑，所述復(fù)合凍干保護(hù)劑由以下重量含量的成分組成：(4.2±0.1)％海藻糖，(2.0±0.1)％甘露醇，(11.9±0.1)％脫脂乳粉和(4.1±0.1)％谷氨酸鈉，余量為去離子水。
3、本專利技術(shù)還同時(shí)提供了一種乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，包括將乳酸乳球菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，離心獲得菌泥(菌體)，將所述菌泥與上述復(fù)合凍干保護(hù)劑進(jìn)行質(zhì)量比1:(1±0.1)充分混合，隨后進(jìn)行真空冷凍干燥(凍干)。
4、乳酸乳球菌擴(kuò)大培養(yǎng)為：將活化好的乳酸乳球菌zfm559菌株以(5±0.2)％(體積％)比例接種于m17液體培養(yǎng)基(含有0.5％葡萄糖)中，(30±1)℃條件下培養(yǎng)(12±1)h。
5、離心獲得的菌體用0.1m?pbs清洗，而后再與乳酸乳球菌凍干保護(hù)劑(凍干保護(hù)劑水溶液)以質(zhì)量比1:(1±0.1)混合均勻。
6、作為本專利技術(shù)的乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法的改進(jìn)：離心條件為(6000±600)g，(4±0.5)℃，(10±1)min。
7、作為本專利技術(shù)的乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法的進(jìn)一步改進(jìn)：真空冷凍干燥為(-80±5)℃預(yù)凍(2±0.1)h，隨后在0.1mpa條件下凍干(30±2)h。
8、本專利技術(shù)還同時(shí)提供了一種乳酸乳球菌凍干菌粉的儲(chǔ)藏方法，包括將利用上述方法制備而得的乳酸乳球菌凍干菌粉在-20℃～25℃下進(jìn)行儲(chǔ)藏。
9、作為本專利技術(shù)的儲(chǔ)藏方法的改進(jìn)：儲(chǔ)藏溫度條件分別為-20℃,4℃,和25℃，儲(chǔ)藏30天。
10、本專利技術(shù)還同時(shí)提供了利用上述真空冷凍干燥方法制備而得的乳酸乳球菌凍干菌粉，以及該凍干菌粉儲(chǔ)藏穩(wěn)定性的研究。
11、本專利技術(shù)經(jīng)過(guò)對(duì)多種凍干保護(hù)劑成分成分的考核，采用海藻糖、甘露醇、脫脂乳粉和谷氨酸鈉作為凍干保護(hù)劑成分，通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化的方式，獲得乳酸乳球菌凍干保護(hù)劑最優(yōu)配比，從而減少冷凍干燥過(guò)程對(duì)乳酸乳球菌造成的損害，為乳酸乳球菌zfm559在食品和發(fā)酵領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
12、本專利技術(shù)菌株的保藏信息如下：
13、保藏名稱：乳酸乳球菌zfm559?lactococcus?lactis?zfm559，保藏單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏編號(hào)：cctcc?no:m2022443，保藏時(shí)間2022年04月21日。
14、本專利技術(shù)在專利技術(shù)過(guò)程中，進(jìn)行了如下的內(nèi)容：
15、s1.本專利技術(shù)將所述乳酸乳球菌zfm559活化后的菌液擴(kuò)大培養(yǎng)，通過(guò)離心獲得菌泥。將菌泥與不同濃度的單一凍干保護(hù)劑充分混合，隨后進(jìn)行真空冷凍干燥過(guò)程。
16、s2.根據(jù)不同濃度的單一凍干保護(hù)劑對(duì)乳酸乳球菌zfm559菌種存活率的結(jié)果判斷，篩選各單一凍干保護(hù)劑的最優(yōu)濃度范圍。
17、s3.根據(jù)最優(yōu)濃度范圍，進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。以乳酸乳球菌zfm559凍干存活率作為響應(yīng)值，獲得針對(duì)乳酸乳球菌zfm559的最優(yōu)凍干保護(hù)劑濃度配比。
18、s4.針對(duì)s3獲得的乳酸乳球菌zfm559凍干菌粉，在不同溫度條件下進(jìn)行儲(chǔ)藏。
19、所述步驟s1中，
20、單一凍干保護(hù)劑分別為海藻糖、甘露醇、脫脂乳粉和谷氨酸本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種乳酸乳球菌復(fù)合凍干保護(hù)劑，其特征在于：所述復(fù)合凍干保護(hù)劑由以下重量含量的成分組成：(4.2±0.1)％海藻糖，(2.0±0.1)％甘露醇，(11.9±0.1)％脫脂乳粉和(4.1±0.1)％谷氨酸鈉，余量為去離子水。
2.一種乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，其特征在于：包括將乳酸乳球菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，離心獲得菌泥，將所述菌泥與如權(quán)利要求1所述的復(fù)合凍干保護(hù)劑進(jìn)行質(zhì)量比1:(1±0.1)充分混合，隨后進(jìn)行真空冷凍干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，其特征在于：離心條件為(6000±600)g，(4±0.5)℃，(10±1)min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，其特征在于：真空冷凍干燥為(-80±5)℃預(yù)凍(2±0.1)h，隨后在0.1MPa條件下凍干(30±2)h。
5.一種乳酸乳球菌凍干菌粉的儲(chǔ)藏方法，其特征在于：包括將利用如權(quán)利要求2～4任一方法制備而得的乳酸乳球菌凍干菌粉在-20℃～25℃下進(jìn)行儲(chǔ)藏。
6.一種如權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)真空冷凍干燥方法制備的乳酸乳球菌
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種乳酸乳球菌復(fù)合凍干保護(hù)劑，其特征在于：所述復(fù)合凍干保護(hù)劑由以下重量含量的成分組成：(4.2±0.1)％海藻糖，(2.0±0.1)％甘露醇，(11.9±0.1)％脫脂乳粉和(4.1±0.1)％谷氨酸鈉，余量為去離子水。
2.一種乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，其特征在于：包括將乳酸乳球菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，離心獲得菌泥，將所述菌泥與如權(quán)利要求1所述的復(fù)合凍干保護(hù)劑進(jìn)行質(zhì)量比1:(1±0.1)充分混合，隨后進(jìn)行真空冷凍干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳酸乳球菌的真空冷凍干燥方法，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：顧青，葛思彤，韓佳潤(rùn)，酈萍，周青青，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江工商大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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