【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及細(xì)胞體外培養(yǎng)，具體涉及一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法。
技術(shù)介紹
1、體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞是指在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中，通過(guò)特定的培養(yǎng)條件和細(xì)胞增殖技術(shù)，使胰島細(xì)胞在體外大量增殖，從而獲取足夠的胰島細(xì)胞以供研究或治療使用。胰島細(xì)胞是胰腺中的重要細(xì)胞類(lèi)型，能夠分泌胰島素和胰高血糖素等激素，對(duì)于維持人體血糖平衡具有重要作用。
2、現(xiàn)有的從干細(xì)胞分化為胰島細(xì)胞的過(guò)程中，分化效率和細(xì)胞純度是關(guān)鍵因素，目前的技術(shù)難以達(dá)到理想的分化效率和純度，這影響了最終獲得的胰島細(xì)胞的質(zhì)量和數(shù)量，在體外培養(yǎng)環(huán)境中，胰島細(xì)胞的功能容易受到影響，包括胰島素分泌和響應(yīng)葡萄糖刺激的能力，長(zhǎng)時(shí)間的體外培養(yǎng)可能導(dǎo)致胰島細(xì)胞的功能降低，甚至喪失。
3、為此提出一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的在于：為解決上述
技術(shù)介紹
中提出的問(wèn)題，本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法。
2、本專(zhuān)利技術(shù)為了實(shí)現(xiàn)上述目的具體采用以下技術(shù)方案：
3、一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，包括以下具體步驟：
4、步驟一：從體細(xì)胞中采集細(xì)胞樣本，通過(guò)基因重編程技術(shù)將其轉(zhuǎn)化為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞ipscs；
5、步驟二：使用生物相容性材料和細(xì)胞外基質(zhì)成分，構(gòu)建具有特定微結(jié)構(gòu)的三維培養(yǎng)系統(tǒng)；
6、步驟三：在三維培養(yǎng)系統(tǒng)中加入特定的生長(zhǎng)因子，以引導(dǎo)i?pscs定向分化為胰島細(xì)胞；
7、步驟四：通過(guò)調(diào)整生長(zhǎng)因子的濃度、比例和時(shí)序等參數(shù)，以及優(yōu)化
8、步驟五：在三維培養(yǎng)系統(tǒng)中加入適量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和胰島素生長(zhǎng)因子-1，以維持胰島細(xì)胞的正常代謝和功能；
9、步驟六：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，確保其符合移植標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫抑制處理，以降低移植后免疫排斥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；
10、步驟七：將經(jīng)過(guò)準(zhǔn)備和檢測(cè)的胰島細(xì)胞移植到體內(nèi)，在移植后，需要密切監(jiān)測(cè)患者的生命體征和血糖水平等指標(biāo)，以確保移植效果和身體的安全。
11、進(jìn)一步地，所述步驟二中的生物相容性材料可以為明膠或膠原，細(xì)胞外基質(zhì)成分可以為層粘連蛋白或纖連蛋白。
12、進(jìn)一步地，所述三維培養(yǎng)系統(tǒng)的構(gòu)建包括以下步驟：
13、步驟a：選擇生物相容性好、無(wú)毒性、能夠支持細(xì)胞生長(zhǎng)和黏附的材料；
14、步驟b：通過(guò)各種方法電紡絲或3d打印制備具有不同形狀、結(jié)構(gòu)和功能的三維支架；
15、步驟c：對(duì)支架進(jìn)行預(yù)處理，以去除潛在的污染物和細(xì)菌，并提高其生物相容性；
16、步驟d：將胰島細(xì)胞以單細(xì)胞懸浮液的形式接種到三維支架上；
17、步驟e：將接種有細(xì)胞的三維支架放入培養(yǎng)箱中，在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行培養(yǎng)；
18、步驟f：根據(jù)需要和細(xì)胞生長(zhǎng)情況，定期更換培養(yǎng)液，以提供細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子。
19、進(jìn)一步地，所述步驟三中加入的特定生長(zhǎng)因子為pdgf-aa、fgf10、ra。
20、進(jìn)一步地，所述步驟五中需要定期更換培養(yǎng)基和維持適宜的如溫度、濕度、氣體濃度等培養(yǎng)條件，用于進(jìn)一步保持胰島細(xì)胞的活力和功能。
21、進(jìn)一步地，所述pdgf-aa的濃度應(yīng)為10-100ng/ml，fgf10的濃度應(yīng)為5-50ng/ml，ra的濃度應(yīng)為0.1-1μm。
22、本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果如下：
23、通過(guò)利用三維培養(yǎng)系統(tǒng)和特定的生長(zhǎng)因子pdgf-aa、fgf10、ra，實(shí)現(xiàn)模擬體內(nèi)胰島發(fā)育的微環(huán)境，引導(dǎo)多能干細(xì)胞i?pscs定向分化為胰島細(xì)胞，通過(guò)調(diào)整生長(zhǎng)因子的濃度、比例和時(shí)序等參數(shù)，提高三維環(huán)境中胰島細(xì)胞的分化效率和純度，通過(guò)三維培養(yǎng)系統(tǒng)的構(gòu)建模擬細(xì)胞在體內(nèi)的自然生長(zhǎng)環(huán)境，提供一個(gè)立體、多層次的空間，讓細(xì)胞可以在其中進(jìn)行三維生長(zhǎng)和分化，也可以通過(guò)調(diào)整支架的材料、結(jié)構(gòu)、孔隙度等參數(shù)，或者改變培養(yǎng)條件，以提高細(xì)胞的分化效率和純度，以及維持其細(xì)胞功能。
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1.一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下具體步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述步驟二中的生物相容性材料可以為明膠或膠原，細(xì)胞外基質(zhì)成分可以為層粘連蛋白或纖連蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述三維培養(yǎng)系統(tǒng)的構(gòu)建包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述步驟三中加入的特定生長(zhǎng)因子為PDGF-AA、FGF10、RA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述步驟五中需要定期更換培養(yǎng)基和維持適宜的如溫度、濕度、氣體濃度等培養(yǎng)條件，用于進(jìn)一步保持胰島細(xì)胞的活力和功能。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述PDGF-AA的濃度應(yīng)為10-100ng/mL，F(xiàn)GF10的濃度應(yīng)為5-50ng/mL，RA的濃度應(yīng)為0.1-1μM。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下具體步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述步驟二中的生物相容性材料可以為明膠或膠原，細(xì)胞外基質(zhì)成分可以為層粘連蛋白或纖連蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述三維培養(yǎng)系統(tǒng)的構(gòu)建包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種體外擴(kuò)增胰島細(xì)胞的方法，其特征在于，所述步驟三中加入的...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔡志明，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：深圳華大生命科學(xué)研究院，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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