【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及疫苗，具體涉及一種單價及多價新型冠狀病毒mrna疫苗及其制備方法和用途。
技術介紹
1、sars-cov-2大流行是一場嚴重的全球公共衛生突發事件，為應對全球公共衛生挑戰，已批準在sars-cov-2大流行期間緊急使用幾種類型的疫苗，如滅活病毒粒子、mrna-lnp或病毒載體疫苗，這些疫苗大多數使用從流行的原始毒株中提取的刺突蛋白作為靶抗原。然而，隨著sars-cov-2的不斷進化，出現了具有免疫逃逸性的變體，從而抑制了全球疫苗接種運動的有效性和對病毒傳播的控制。變異株通常傳播性或/和毒性增強，同時免疫逃逸的能力也有所增強。已有研究證明，beta變異株和omicron變異株可以逃逸原始毒株和疫苗接種產生的中和抗體，如疫苗對beta變異株的中和抗體滴度降低10倍以上，對omicron變異株的中和抗體滴度降低20-50倍。
2、omicron毒株(即ba.1、ba.2、ba.4、ba.5、ba.2.75、ba.4.6和xbb.1)在刺突蛋白中含有超過30個氨基酸的替換、缺失或插入，這些氨基酸有助于逃脫中和抗體，使這些變體表現出高傳播和免疫逃避。到目前為止，omicron占covid-19病例的大多數，這對現有疫苗的有效性構成了嚴重挑戰。
技術實現思路
1、本專利技術的多價mrna疫苗，對原始毒株和omicron變體ba.1、ba.2.75、ba.4/5和xbb.1具有更大的中和廣度。與滅活疫苗同源加強和其對應的單價疫苗加強相比，即使在較低劑量下，本專利技術多價
2、本專利技術術語“中性磷脂”術語是指不帶電荷的、非磷酸甘油酯的磷脂分子。
3、本專利技術術語“聚乙二醇(peg)-脂質”是指包含脂質部分和聚乙二醇部分的分子。
4、本專利技術術語“脂質納米顆粒”(lipid?nanoparticles，lnp)是指具有至少一個納米量級尺寸的顆粒，其包含至少一種脂質。
5、本專利技術術語“疫苗”是指適合于應用于動物或人的組合物，在施用后誘導免疫應答，其強度足以最低限度地幫助預防、改善或治愈起因于由微生物感染的臨床疾病。
6、本專利技術所述的“包含”或“包括”為開放式寫法，當用于描述蛋白質或核酸的序列時，所述蛋白質或核酸可以是由所述序列組成，或者在所述蛋白質或核酸的一端或兩端可以具有額外的氨基酸或核苷酸，但仍然具有與原序列相同或相似的活性。
7、本專利技術所述“同源性”，是指在使用蛋白序列或核苷酸序列的方面，本領域技術人員可以根據實際工作需要對序列進行調整，使使用序列與現有技術獲得的序列相比，具有(包括但不限于)1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％，40％，41％，42％，43％，44％，45％，46％，47％，48％，49％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.1％，99.2％，99.3％，99.4％，99.5％，99.6％，99.7％，99.8％，99.9％的同一性。
8、本專利技術術語“s蛋白”為組成sars-cov-2的刺突蛋白。
9、本專利技術術語，“n/p”為可電離的陽離子脂質與mrna單核苷酸中磷酸的摩爾比。
10、本專利技術的第一方面，提供了一種mrna疫苗，所述mrna疫苗包含：
11、第一信使核糖核酸mrna，編碼omicron變異株的s蛋白或其抗原肽，所述s蛋白序列包含seq?id?no:6-9中任一種或兩種以上的組合，或與seq?id?no:6-9包含seq?id?no:6-9中任一種或兩種以上的組合具有至少75％的同源性；優選地，至少具有80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。和/或，
12、第二信使核糖核酸mrna，編碼sars-cov-2或其變體的s蛋白或其抗原肽，所述s蛋白序列包含seq?id?no:1-5中任一種或兩種以上的組合或與seq?id?no:1-5中任一種或兩種以上的組合具有至少75％的同源性；優選地，至少具有80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
13、其中，sars-cov-2或其變體包括原始毒株、beta變異株、delta變異株或omicron變異株，例如ba.1、ba.2、ba.4、ba.5、ba.2.75、ba.4.6和xbb.1等。
14、所述的抗原肽包括rbd或rbm。例如所述的抗原肽為rbd或rbm序列或者所述的抗原肽為包含rbd或rbm序列的具有抗原活性的序列。
15、優選的，所述s蛋白具有相對于seq?id?no:1的修飾，所述的修飾包括下列任一種或兩種以上的組合：
16、a)第417位由天冬酰胺替代；
17、b)第484位由賴氨酸或丙氨酸替代；
18、c)第501位由酪氨酸替代；
19、d)第614位由甘氨酸替代；
20、e)第682-685位發生氨基酸部分或全部替換和/或缺失；優選地，第682位由甘氨酸替代、第683位由絲氨酸替代、第685位由甘氨酸替代；
21、和/或，
22、f)第986和987位中的一個或兩個由脯氨酸替代。
23、優選的，第一信使核糖核酸mrna與第二信使核糖核酸mrna按照1-10：1-10摩爾比混合。
24、所述mrna疫苗還包含載體。優選的，所述的載體為脂質納米顆粒(lnp)，所述第一信使核糖核酸mrna以及第二信使核糖核酸mrna分別包封于所述脂質納米顆粒(lnp)中。
25、優選的，所述脂質納米顆粒(lnp)包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(peg)-脂質；優選地，所述的陽離子脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為20～60％(優選30-60％，進一步優選40-50％)、中性磷脂在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為5％～25％(優選5-20％，進一步優選5-15％)、甾族脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為25％～55％(優選20-50％，進一步優選40-50％)；聚乙二醇(peg)-脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為0.1％～15％(優選0.1-10％，進一步優選1-3％)；更優選地，所述陽離子脂質：中性磷脂：甾族脂質：聚乙二醇(peg)-脂質摩爾比為30-60:5-20:20-50:0.1-10。
26、優選地，所述陽離子脂質的結構為：
27、<本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗包含：
2.根據權利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述的抗原肽包括RBD或RBM。
3.根據權利要求1-2任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述S蛋白具有相對于SEQID?NO:1的修飾，所述的修飾包括下列任一種或兩種以上的組合：
4.根據權利要求1-3任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，第一信使核糖核酸mRNA與第二信使核糖核酸mRNA按照1-10：1-10摩爾比混合。
5.根據權利要求1-4任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗還包括載體，所述的載體為脂質納米顆粒(LNP)，所述第一信使核糖核酸mRNA以及第二信使核糖核酸mRNA分別包封于所述脂質納米顆粒(LNP)中。
6.根據權利要求1-5任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述脂質納米顆粒(LNP)包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(PEG)-脂質；優選地，所述的陽離子脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為20～60％、中性磷脂在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為5％～25％、
7.根據權利要求6所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述陽離子脂質的結構為：
8.根據權利要求1-7任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述S蛋白的修飾還包括將SEQ?ID?NO:1-9的第1-13位替換為其他強信號肽，或在N端增加其他強信號肽；
9.根據權利要求1-8任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA序列是天然或修飾的RNA，所述修飾的RNA包括通過用修飾的尿苷部分或全部取代天然尿苷對RNA進行修飾；或，所述mRNA序列是修飾的RNA，所述修飾的RNA為通過用1-甲基-假尿苷對天然尿苷進行全部替換。
10.根據權利要求1-9任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述S蛋白的修飾還包括在N端或C端增加用于形成多聚體的片段，所述片段包括Fc片段或噬菌體T4纖維蛋白的三聚化基序。
11.根據權利要求6-10任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述聚乙二醇(PEG)-脂質選自：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(PEG-DMG)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)](PEG-DSPE)、PEG-二甾醇基甘油(PEG-DSG)、PEG-二棕櫚油基、PEG-二油基、PEG-二硬脂基、PEG-二酰基甘油酰胺(PEG-DAG)、PEG-二棕櫚酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、PEG-1,2-二肉豆蔻酰基氧基丙基-3-胺(PEG-c-DMA)或DMG-PEG2000中的一種或多種組合；
12.根據權利要求1-11任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述的mRNA疫苗中脂質納米顆粒(LNP)與mRNA的質量比(w/w)為10-30：1。
13.根據權利要求1-12任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗中還包含其他輔料，所述其他輔料包括醋酸鈉、氨丁三醇、磷酸二氫鉀、氯化鈉、磷酸氫二鈉、蔗糖中的一種或多種組合。
14.根據權利要求1-13任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，包封第一信使核糖核酸mRNA或第二信使核糖核酸mRNA的脂質納米顆粒的平均粒徑為50～200nm；或在中性pH下具有凈中性電荷；或具有小于0.4的多分散性。
15.根據權利要求1-14任一項所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗為液體制劑或凍干粉劑；優選地，所述mRNA疫苗為口服制劑、肌肉注射制劑、靜脈注射制劑或吸入制劑；更優選地，為霧化吸入劑或干粉吸入劑。
16.一種權利要求1-15任一項所述的mRNA疫苗的制備方法，其特征在于，將陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質、聚乙二醇(PEG)-脂質溶解至溶劑后與mRNA混合后制得，優選地，所述脂質納米顆粒包封mRNA時的N/P為2-10。
17.根據權利要求16所述的mRNA疫苗的制備方法，其特征在于，將陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質、聚乙二醇(PEG)-脂質溶解至乙醇后與經稀釋后的mRNA稀釋液混合后經超濾、稀釋、過濾后制得；優選地，稀釋液可為乙酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或tris緩...
【技術特征摘要】
1.一種mrna疫苗，其特征在于，所述mrna疫苗包含：
2.根據權利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，所述的抗原肽包括rbd或rbm。
3.根據權利要求1-2任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述s蛋白具有相對于seqid?no:1的修飾，所述的修飾包括下列任一種或兩種以上的組合：
4.根據權利要求1-3任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，第一信使核糖核酸mrna與第二信使核糖核酸mrna按照1-10：1-10摩爾比混合。
5.根據權利要求1-4任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna疫苗還包括載體，所述的載體為脂質納米顆粒(lnp)，所述第一信使核糖核酸mrna以及第二信使核糖核酸mrna分別包封于所述脂質納米顆粒(lnp)中。
6.根據權利要求1-5任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述脂質納米顆粒(lnp)包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(peg)-脂質；優選地，所述的陽離子脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為20～60％、中性磷脂在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為5％～25％、甾族脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為25％～55％；聚乙二醇(peg)-脂質在脂質納米顆粒中的摩爾百分含量為0.1％～15％；更優選地，所述陽離子脂質：中性磷脂：甾族脂質：聚乙二醇(peg)-脂質摩爾比為30-60:5-20:20-50:0.1-10。
7.根據權利要求6所述的mrna疫苗，其特征在于，所述陽離子脂質的結構為：
8.根據權利要求1-7任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述s蛋白的修飾還包括將seq?id?no:1-9的第1-13位替換為其他強信號肽，或在n端增加其他強信號肽；
9.根據權利要求1-8任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna序列是天然或修飾的rna，所述修飾的rna包括通過用修飾的尿苷部分或全部取代天然尿苷對rna進行修飾；或，所述mrna序列是修飾的rna，所述修飾的rna為通過用1-甲基-假尿苷對天然尿苷進行全部替換。
10.根據權利要求1-9任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述s蛋白的修飾還包括在n端或c端增加用于形成多聚體的片段，所述片段包括fc片段或噬菌體t4纖維蛋白的三聚化基序。
11.根據權利要求6-10任一項所述的mrna疫苗，其特征在于，所述聚乙二醇(peg)-脂質選自：2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二十四烷基乙酰胺(alc-0159)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(peg-dmg)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-n-[氨基(聚乙二醇)](peg-dspe)、peg-二甾醇基甘油(p...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王浩猛，李藎，吳斗，嚴志紅，劉盈盈，劉權，劉健，邱東旭，朱濤，宇學峰，
申請(專利權)人：康希諾上海生物研發有限公司，
類型：發明
國別省市：
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