【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及蛋白質(zhì)工程，尤其涉及一種牛初乳堿性蛋白的制備方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、目前有大量的骨質(zhì)疏松癥患者，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率己躍居常見病、多發(fā)病的前列。然而，目前治療骨質(zhì)疏松癥的藥物大多是通過抑制破骨細(xì)胞活性實(shí)現(xiàn)，但是對于提高成骨細(xì)胞的活性并不起作用，并且副作用明顯。因此迫切需要尋求可以直接促進(jìn)骨形成且無副作用的天然活性物質(zhì)。
2、牛初乳中的乳清蛋白尤其是其堿性蛋白部分，含有很多活性成分，對增加骨密度和提高年輕時(shí)期峰值骨密度具有重要作用。牛初乳堿性蛋白(bovine?colostrum?basicprotein，cbp)是牛初乳去除酸性蛋白以及乳鐵蛋白后剩余的堿性微量蛋白。具體已有規(guī)定牛初乳堿性蛋白是以牛初乳為原料，經(jīng)殺菌、脫脂、離心分離、去除酪蛋白、α-乳白蛋白(α-la)、β-乳球蛋白(β-lg)，微濾、超濾、冷凍干燥等工藝而制成的，其1-30kda分子量范圍內(nèi)的蛋白比例不低于50％。然而現(xiàn)有技術(shù)制備得到的cbp純度不足，成品中仍然含有大量的酪蛋白和β-乳球蛋白等酸性蛋白，嚴(yán)重影響了產(chǎn)品的純度和功效。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)提供一種牛初乳堿性蛋白的制備方法及其應(yīng)用。通過特定的酸化流程，顯著降低酪蛋白的含量，提高牛初乳堿性蛋白的純度。
2、第一方面，本專利技術(shù)提供一種牛初乳堿性蛋白的制備方法，包括：
3、分離酪蛋白、分離α-乳白蛋白和分離β-乳清蛋白；
4、所述分離酪蛋白包括：
6、之后進(jìn)行離心去除沉淀，收集上清液。
7、進(jìn)一步地，使其在10～20分鐘時(shí)間內(nèi)ph值達(dá)到4.3～4.5。
8、進(jìn)一步地，將脫脂牛初乳置于22～28℃的條件下。
9、進(jìn)一步地，將脫脂牛初乳置于24～26℃的條件下。
10、本專利技術(shù)采用特定的酸化方式，在一定速度下緩慢酸化，可以使得酪蛋白充分沉淀，進(jìn)而達(dá)到更高去除酪蛋白效率的效果，同時(shí)對于牛初乳中其他成分沒有影響。此外，這一過程的溫度控制也較為重要，在一定溫度下具有最優(yōu)的去除酪氨酸的效果，但是溫度不能太高，反而導(dǎo)致牛初乳中其他蛋白質(zhì)被破壞。
11、酸化過程中的酪蛋白膠束會(huì)發(fā)生一系列變化，主要表現(xiàn)為酪蛋白膠束中的磷酸鈣降解導(dǎo)致酪蛋白膠束膨大，膠束解離，酪蛋白聚集和沉淀。牛初乳堿性蛋白(cbp)帶正電荷，酪蛋白帶負(fù)電荷。牛乳中的cbp結(jié)合于酪蛋白膠束內(nèi)部，若酸化速率過快會(huì)使酪蛋白膠束膨大和解離后，使酪蛋白快速形成凝塊，cbp無法充分從其中釋放到乳清中；酸化速率過慢會(huì)使酪蛋白體系形成類似于凝固型酸奶的結(jié)構(gòu)，cbp將和酪蛋白共沉淀，導(dǎo)致cbp得率過低。
12、進(jìn)一步地，所述以固定速度混入酸性溶液包括：
13、以0.35～0.45ml/s的速度混入0.4～0.6mol/l的鹽酸溶液；或0.50～0.75ml的速度混入0.6～0.8mol/l的乳酸溶液。
14、進(jìn)一步地，所述分離α-乳白蛋白包括：
15、向所述分離酪蛋白之后得到的上清液中加入無水丙酮使其質(zhì)量體積百分含量達(dá)到20～30％，之后加入酸性溶液使得ph達(dá)到3.7～4.1，在32～38℃的條件下維持150分鐘以上，之后離心去除沉淀，收集上清液。
16、本專利技術(shù)在上清液中加入無水丙酮，可進(jìn)一步降低酸性蛋白質(zhì)的表面斥力，達(dá)到更優(yōu)的去除α-乳白蛋白和β-乳清蛋白的效果。ph3.7～4.1接近α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的等電點(diǎn)，而遠(yuǎn)離了cbp的等電點(diǎn)，在此條件下加入丙酮會(huì)顯著降低酸性蛋白質(zhì)(α-乳白蛋白和β-乳球蛋白)表面的斥力，增加α-乳白蛋白和β-乳清蛋白表面的疏水作用力，導(dǎo)致其更容易沉淀，從而提高cbp的純度。
17、進(jìn)一步地，所述加入酸性溶液使得ph達(dá)到3.7～4.1包括：
18、先加入檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)ph至5.2～5.6，后加入檸檬酸溶液調(diào)節(jié)ph至3.7～4.1。
19、進(jìn)一步地，所述分離β-乳清蛋白包括：
20、將所述分離α-乳白蛋白之后得到的上清液的ph調(diào)節(jié)至4.2～4.8之后離心去除沉淀，收集上清液。
21、進(jìn)一步地，所述脫脂牛初乳通過如下方法制備得到：
22、將牛初乳在25～28℃條件下，4000～4500×g離心25～35分鐘進(jìn)行脫脂。
23、進(jìn)一步地，在所述分離β-乳清蛋白之后還包括：過濾；
24、所述過濾包括：將所述分離β-乳清蛋白得到的上清液先采用30kda的膜進(jìn)行過濾，收集透過液，再采用1kda的膜進(jìn)行過濾，收集截留液。
25、本專利技術(shù)進(jìn)一步提供所述的制備方法在降低牛初乳中酪蛋白或α-乳白蛋白或β-乳清蛋白的含量中的應(yīng)用。
26、本專利技術(shù)進(jìn)一步提供所述的制備方法在提高牛初乳堿性蛋白的純度中的應(yīng)用。
27、本專利技術(shù)具備如下有益效果：
28、本專利技術(shù)通過特定的連續(xù)酸化的方式，控制特定的酸化速度，顯著提高了酪蛋白的去除率，將其含量從常規(guī)的7.8％降低至2.4％以下，進(jìn)而提高牛初乳堿性蛋白的純度。
29、本專利技術(shù)進(jìn)一步在去除α-乳白蛋白時(shí)在上清液中加入無水丙酮，進(jìn)一步提高α-乳白蛋白和β-乳清蛋白的去除效率，從而顯著提高牛初乳堿性蛋白的純度，對于提高牛初乳堿性蛋白的營養(yǎng)價(jià)值和應(yīng)用范圍有重要意義。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種牛初乳堿性蛋白的制備方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述以固定速度混入酸性溶液包括：
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述分離α-乳白蛋白包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述加入酸性溶液使得pH達(dá)到3.7～4.1包括：
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述分離β-乳清蛋白包括：
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述脫脂牛初乳通過如下方法制備得到：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在所述分離β-乳清蛋白之后還包括：過濾；
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，還包括：
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法在降低牛初乳中酪蛋白或α-乳白蛋白或β-乳清蛋白的含量中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法在提高牛初乳堿性蛋白的純度中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種牛初乳堿性蛋白的制備方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述以固定速度混入酸性溶液包括：
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述分離α-乳白蛋白包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述加入酸性溶液使得ph達(dá)到3.7～4.1包括：
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述分離β-乳清蛋白包括：
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：錢文濤，王孟輝，李洪亮，胡鵬麗，劉陽，楊晉輝，
申請(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)集團(tuán)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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