【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
技術(shù)介紹
1、可以出于各種目的，諸如鑒定樣品內(nèi)的部分的類型，對樣品進(jìn)行處理。該樣品可以是生物樣品。可以出于各種目的，諸如檢測疾病(例如，癌癥)或鑒定特定物質(zhì)，對生物樣品進(jìn)行處理。存在各種用于處理樣品的方法，諸如聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)和測序。
2、可以在各種反應(yīng)環(huán)境內(nèi)，諸如分區(qū)內(nèi)，對生物樣品進(jìn)行處理。分區(qū)可以是孔或液滴。液滴或孔可用于以使得能夠分配生物樣品并單獨(dú)處理的方式來處理生物樣品。例如，此類液滴可以與其它液滴流體分離，從而使得能夠精確控制液滴中的相應(yīng)環(huán)境。
3、分區(qū)中的生物樣品可以經(jīng)受各種過程，諸如化學(xué)過程或物理過程。分區(qū)中的樣品可以經(jīng)受加熱或冷卻，或化學(xué)反應(yīng)，諸如以獲得可以定性或定量處理的物質(zhì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、常常期望處理來自許多單細(xì)胞的核酸。處理可包括測序，測序可用于以單細(xì)胞為基礎(chǔ)分析表達(dá)譜。處理期間，可能難以精確地測量來自許多細(xì)胞中的單細(xì)胞的完整表達(dá)譜。此類測量可能需要對單獨(dú)的細(xì)胞進(jìn)行有效標(biāo)記(例如，條形碼化)以便鑒定每個(gè)細(xì)胞的表達(dá)譜。本文認(rèn)識(shí)到需要有效且精確地實(shí)現(xiàn)對許多單細(xì)胞中的每一個(gè)中存在的核酸分子的處理(例如，表達(dá)分析)以生成序列的系統(tǒng)和方法，其中每個(gè)序列是單細(xì)胞唯一鑒定的。
2、在一些方面中，本文公開了一種用于處理多個(gè)核酸分子的方法，所述方法包括：(a)提供包含所述多個(gè)核酸分子的多個(gè)細(xì)胞珠粒；(b)將所述多個(gè)細(xì)胞珠粒分離到包含第一多個(gè)核酸分子的多個(gè)分區(qū)中；(c)用所述多個(gè)分區(qū)中的所述多個(gè)細(xì)胞珠粒，由所述多個(gè)核酸分子和所述第
3、在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括用所述另外的多個(gè)分區(qū)中的所述多個(gè)細(xì)胞珠粒，由所述第二多個(gè)核酸分子和所述第三多個(gè)核酸分子產(chǎn)生第四多個(gè)核酸分子。在一些實(shí)施方案中，所述第四多個(gè)核酸分子包含在所述多個(gè)細(xì)胞珠粒中。在一些實(shí)施方案中，所述第四多個(gè)核酸分子與所述多個(gè)細(xì)胞珠粒連接。在一些實(shí)施方案中，所述第四多個(gè)核酸分子與所述多個(gè)細(xì)胞珠粒共價(jià)連接。在一些實(shí)施方案中，所述第三多個(gè)核酸分子中的每一個(gè)包含條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述另外的多個(gè)分區(qū)中的給定分區(qū)包含所述第三多個(gè)核酸分子的子集，所述第三多個(gè)核酸分子的子集包含相同的條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述另外的多個(gè)分區(qū)中的每個(gè)分區(qū)包含所述第三多個(gè)核酸分子的子集，所述第三多個(gè)核酸分子的子集包含與所述第三多個(gè)核酸分子中的每個(gè)其它核酸分子不同的條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述分離包括隨機(jī)分離。在一些實(shí)施方案中，所述第二多個(gè)核酸分子包含所述第一多個(gè)核酸分子或其衍生物的至少一個(gè)子集。
4、在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)核酸分子與所述多個(gè)細(xì)胞珠粒共價(jià)連接。在一些實(shí)施方案中，所述第一多個(gè)核酸分子中的每一個(gè)包含條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)分區(qū)中的給定分區(qū)包含所述第一核酸分子的子集，所述子集包含相同的條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)分區(qū)中的每個(gè)分區(qū)包含所述第一多個(gè)核酸分子的子集，所述第一多個(gè)核酸分子的子集包含與所述第一多個(gè)核酸分子中的每個(gè)其它核酸分子不同的條形碼序列。
5、在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)核酸分子是由所述多個(gè)細(xì)胞的多個(gè)核糖核酸分子產(chǎn)生的多個(gè)互補(bǔ)脫氧核糖核酸分子。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)互補(bǔ)脫氧核糖核酸分子通過逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，在(a)中，所述多個(gè)細(xì)胞珠粒包含寡核苷酸引物。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸引物與所述細(xì)胞珠粒共價(jià)連接。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸引物包含聚t序列。在一些實(shí)施方案中，在(b)中，所述多個(gè)分區(qū)中的每個(gè)分區(qū)包含單個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，在(b)中，所述多個(gè)分區(qū)中的每個(gè)分區(qū)包含多個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，在(c)中，所述第二多個(gè)核酸分子通過連接產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，在(c)中，所述第二多個(gè)核酸分子通過雜交產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括在(d)之后，合并所述多個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括重復(fù)(b)-(d)。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括在重復(fù)(b)-(d)之前，合并所述多個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，所述第二多個(gè)核酸分子或其衍生物包含多個(gè)條形碼序列。
6、在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將所述第二多個(gè)核酸分子或其衍生物進(jìn)行測序以得到包含所述多個(gè)核酸分子的至少一部分的序列和所述多個(gè)條形碼序列的至少一部分的多個(gè)序列。在一些實(shí)施方案中，所述第四多個(gè)核酸分子或其衍生物包含多個(gè)條形碼序列。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將所述第四多個(gè)核酸分子或其衍生物進(jìn)行測序以得到包含所述多個(gè)核酸分子的至少一部分的序列和所述多個(gè)條形碼序列的至少一部分的多個(gè)序列。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)分區(qū)是多個(gè)孔。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括使所述第二多個(gè)核酸分子或其衍生物從所述多個(gè)細(xì)胞珠粒釋放。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括使所述第四多個(gè)核酸分子或其衍生物從所述多個(gè)細(xì)胞珠粒釋放。在一些實(shí)施方案中，通過將所述多個(gè)細(xì)胞分配在具有聚合物前體的另外的多個(gè)分區(qū)中以及使所述另外的多個(gè)分區(qū)經(jīng)受足以誘導(dǎo)所述聚合物前體聚合的條件來產(chǎn)生所述多個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括在所述聚合物前體聚合之后，裂解所述多個(gè)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述另外的多個(gè)分區(qū)是多個(gè)液滴。在一些實(shí)施方案中，具有聚合物前體的所述另外的多個(gè)分區(qū)還包含多個(gè)寡核苷酸引物。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)寡核苷酸引物與所述聚合物前體共價(jià)連接。
7、在一些方面中，本文公開了一種用于處理多個(gè)核酸分子的方法，所述方法包括：(a)提供包含多個(gè)細(xì)胞或來自所述多個(gè)細(xì)胞的組成部分的多個(gè)細(xì)胞珠粒，其中所述多個(gè)細(xì)胞或組成部分包含所述多個(gè)核酸分子；以及(b)使多個(gè)條形碼序列在所述多個(gè)細(xì)胞珠粒內(nèi)的所述多個(gè)核酸分子或其衍生物上組合地合成。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將所述多個(gè)核酸分子進(jìn)行測序以得到包含所述多個(gè)核酸分子的至少一部分的序列和所述多個(gè)條形碼序列的至少一部分的多個(gè)序列。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括使所述多個(gè)核酸分子從所述多個(gè)細(xì)胞珠粒釋放。在一些實(shí)施方案中，通過將所述多個(gè)細(xì)胞分配在具有聚合物前體的多個(gè)分區(qū)中，并且使所述多個(gè)分區(qū)經(jīng)受足以誘導(dǎo)所述聚合物前體聚合的條件來產(chǎn)生所述多個(gè)細(xì)胞珠粒。在一些實(shí)施方案中，所述多個(gè)分區(qū)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于處理多個(gè)核酸分子的方法，所述方法包括：
2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括將所述多個(gè)核酸分子進(jìn)行測序以得到包含所述多個(gè)核酸分子的至少一部分的序列和所述多個(gè)條形碼序列的至少一部分的多個(gè)序列。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括使所述多個(gè)核酸分子從所述細(xì)胞珠粒釋放。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中通過將所述細(xì)胞分配在具有聚合物前體的分區(qū)中，并且使所述分區(qū)經(jīng)受足以誘導(dǎo)所述聚合物前體聚合的條件來產(chǎn)生所述細(xì)胞珠粒。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述分區(qū)是液滴。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中具有聚合物前體的所述分區(qū)還包含多個(gè)寡核苷酸引物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述多個(gè)寡核苷酸引物與所述聚合物前體共價(jià)連接。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述合成包括連接。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述合成包括雜交。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞封閉在所述凝膠或聚合物基質(zhì)內(nèi)部，并且其中所述凝膠或聚合物基質(zhì)通過聚合或交聯(lián)形成。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于處理多個(gè)核酸分子的方法，所述方法包括：
2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括將所述多個(gè)核酸分子進(jìn)行測序以得到包含所述多個(gè)核酸分子的至少一部分的序列和所述多個(gè)條形碼序列的至少一部分的多個(gè)序列。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括使所述多個(gè)核酸分子從所述細(xì)胞珠粒釋放。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中通過將所述細(xì)胞分配在具有聚合物前體的分區(qū)中，并且使所述分區(qū)經(jīng)受足以誘導(dǎo)所述聚合物前體聚合的條件來產(chǎn)生所述細(xì)胞珠粒。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述分區(qū)是液滴。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中具有聚合物前體的所述分區(qū)還包含多個(gè)寡核苷酸引物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述多個(gè)寡核苷酸引物與所述聚合物前體共價(jià)連接。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述合成包括連接。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述合成包括雜交。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞封閉在所述凝膠或聚合物基質(zhì)內(nèi)部，并且其中所述凝膠或聚合物基質(zhì)通過聚合或交聯(lián)形成。
1...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：邁克爾·史諾萊文，
申請(專利權(quán))人：一零X基因組學(xué)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。