【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于基因工程，具體涉及一種優(yōu)化楊樹性狀的pagsupb基因及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、楊樹是我國重要的速生豐產(chǎn)用材樹種之一。而不同用材對木質(zhì)素含量的需求不同，如紙漿材需要木質(zhì)素含量低、纖維素含量高和纖維長度長的木材，而建筑材、裝飾材及大口徑材等則需要增加木質(zhì)素含量，以提高木材力學(xué)性質(zhì)。如何根據(jù)不同用材的需要，改善木材品質(zhì)，提高人工用材林資源質(zhì)量，提高木材產(chǎn)量是目前林木育種亟待解決的問題。
2、sup(superman)基因在調(diào)節(jié)植物的生長、發(fā)育和響應(yīng)脅迫中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，研究sup基因在楊樹發(fā)育中的作用，可能有助于實(shí)現(xiàn)木材材性的工程調(diào)控，以培育改良的樹木品種。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種優(yōu)化楊樹性狀的pagsupb基因及其應(yīng)用，有效提高楊樹總生物量和楊樹中木質(zhì)素含量。
2、本專利技術(shù)提供了一種優(yōu)化楊樹性狀的pagsupb基因，所述pagsupb基因編碼的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
3、優(yōu)選的，所述pagsupb基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
4、本專利技術(shù)還提供了一種沉默上述技術(shù)方案所述pagsupb基因的grna，所述grna的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。
5、本專利技術(shù)還提供了一種優(yōu)化楊樹性狀的重組載體，所述重組載體包括基礎(chǔ)載體和插入所述基礎(chǔ)載體的grna；所述grna的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。
6、本專利技術(shù)還提供
7、將用于合成grna的退火引物退火，得到退火產(chǎn)物；
8、將所述退火產(chǎn)物插入基礎(chǔ)載體，得到所述重組載體；
9、所述退火引物由pagsupb-t2-f和pagsupb-t2-r組成；所述pagsupb-t2-f的核苷酸序列如seq?id?no.4所示，所述pagsupb-t2-r的核苷酸序列如seq?idno.5所示。
10、優(yōu)選的，所述基礎(chǔ)載體為pylcrispr/cas9-dh；所述退火的溫度為90℃，時(shí)間為30s；
11、所述退火的體系包括：pylgrna-atu3d/u3b?1μl，bsai?0.5μl，nebrcutsmartbuffer?1μl，靶點(diǎn)接頭0.5μl，t4?dnaligase?0.1μl，t4?dnaligase?buffer0.5μl，ddh2o?6.4μl。
12、本專利技術(shù)還提供了一種優(yōu)化楊樹性狀的重組工程菌，所述重組工程菌包括上述技術(shù)方案所述的重組載體和基礎(chǔ)菌株。
13、本專利技術(shù)還提供了一種優(yōu)化楊樹性狀的方法，包括：將上述技術(shù)方案所述的重組工程菌導(dǎo)入楊樹受體后培養(yǎng)。
14、優(yōu)選的，利用所述重組工程菌侵染楊樹受體10～20min后在黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)；所述培養(yǎng)的溫度為22～26℃，時(shí)間為2～3d；所述楊樹受體包括楊樹愈傷組織。
15、本專利技術(shù)還提供了所述pagsupb基因或上述技術(shù)方案所述的grna或上述技術(shù)方案所述的重組載體或上述技術(shù)方案所述的重組工程菌在優(yōu)化楊樹性狀中的應(yīng)用。
16、有益效果
17、本專利技術(shù)提供了一種優(yōu)化楊樹性狀的pagsupb基因，所述pagsupb基因編碼的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。經(jīng)實(shí)施例驗(yàn)證，在楊樹中敲除pagsupb基因，能使楊樹植株的總生物量和木質(zhì)素含量得到顯著提升，適于培育改良林木品種，保證林木速生豐產(chǎn)，對滿足工業(yè)不同用材的需要具有重要意義。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種優(yōu)化楊樹性狀的PagSUPb基因，所述PagSUPb基因編碼的氨基酸序列如SEQ?IDNo.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PagSUPb基因，其特征在于，所述PagSUPb基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
3.一種沉默權(quán)利要求1或2所述PagSUPb基因的gRNA，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ?IDNo.3所示。
4.一種優(yōu)化楊樹性狀的重組載體，其特征在于，所述重組載體包括基礎(chǔ)載體和插入所述基礎(chǔ)載體的gRNA；
5.權(quán)利要求4所述的重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述基礎(chǔ)載體為pYLCRISPR/Cas9-DH；所述退火的溫度為90℃，時(shí)間為30s；
7.一種優(yōu)化楊樹性狀的重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌包括權(quán)利要求4所述的重組載體和基礎(chǔ)菌株。
8.一種優(yōu)化楊樹性狀的方法，其特征在于，包括：將權(quán)利要求7所述的重組工程菌導(dǎo)入楊樹受體后培養(yǎng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，利用所述
10.權(quán)利要求1或2所述PagSUPb基因或權(quán)利要求3所述的gRNA或權(quán)利要求4所述的重組載體或權(quán)利要求7所述的重組工程菌在優(yōu)化楊樹性狀中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種優(yōu)化楊樹性狀的pagsupb基因，所述pagsupb基因編碼的氨基酸序列如seq?idno.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pagsupb基因，其特征在于，所述pagsupb基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
3.一種沉默權(quán)利要求1或2所述pagsupb基因的grna，所述grna的核苷酸序列如seq?idno.3所示。
4.一種優(yōu)化楊樹性狀的重組載體，其特征在于，所述重組載體包括基礎(chǔ)載體和插入所述基礎(chǔ)載體的grna；
5.權(quán)利要求4所述的重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：江成，陳慧瀅，趙春艷，高賀升，盧孟柱，張進(jìn)，
申請(專利權(quán))人：浙江農(nóng)林大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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