【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物大分子提取，尤其涉及到一種植物基因組dna快速提取試劑盒及其提取方法。
技術(shù)介紹
1、dna是生物體中基本遺傳物質(zhì)，分離高質(zhì)量dna是各種分子生物學(xué)的關(guān)鍵步驟。基因組dna的提取方法有很多，目前，傳統(tǒng)的方法主要有ctab法、sds法。這兩種方法都是在裂解植物細(xì)胞的基礎(chǔ)上，多次利用有機溶劑進行抽提，使多糖、多酚和蛋白質(zhì)等沉淀于有機試劑中，而核酸保留在水相，從而達(dá)到分離核酸的目的。
2、國內(nèi)外生物公司已開發(fā)了多種商品化的核酸dna提取試劑盒，不同的核酸dna提取試劑盒分離dna的原理及提取效果也不同。因植物組織的組分較為復(fù)雜，不同的植物材料的組分各異，因此基因組dna的提取量也會有很大差別，尤其對于多糖、多酚物質(zhì)以及其他次生代謝產(chǎn)物含量較為豐富的植物。如何去除這些雜質(zhì)獲得高質(zhì)量的dna，是植物研究的面臨的首要問題。
3、因此迫切需要一種簡便、高效、經(jīng)濟且通用性較好的植物基因組dna快速提取方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了一種植物基因組dna快速提取試劑盒及其提取方法，該試劑盒操作簡單，可最大限度地提取植物基因組dna，并去除多糖、多酚以及其他次生代謝產(chǎn)物等雜質(zhì)，獲得高質(zhì)量的dna。
2、為了達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)提供了一種植物基因組dna快速提取試劑盒，包括裂解液、結(jié)合液、抑制物去除液、漂洗液、洗脫緩沖液以及吸附基因組dna的硅基質(zhì)吸附柱；其中：
3、所述裂解液包含0.5-4％?ctab、100-500mm且
4、作為優(yōu)選，所述dna復(fù)合助提劑包括二硫蘇糖醇(dtt)和半胱氨酸中的至少一種。
5、作為優(yōu)選，所述結(jié)合液包含2.5-7.0m鹽酸胍，50mm?tris-hcl，10mm?edta，10％無水乙醇、5％-30％聚乙二醇(peg)；其中ph值為4.0-8.0。
6、作為優(yōu)選，所述peg選自peg2000、peg4000、peg6000、peg8000中的任一種。
7、作為優(yōu)選，所述抑制物去除液包含1-5m鹽酸胍，5-100mm且ph為6.0-8.5的tris-hcl，體積分?jǐn)?shù)為10％-60％的無水乙醇。
8、作為優(yōu)選，所述漂洗液包含0.5-1.5m的nacl，100mm且ph為7.0的tris-hcl，無水乙醇；其中，無水乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80％。
9、作為優(yōu)選，所述洗脫緩沖液可以為te緩沖液或去離子水。
10、作為優(yōu)選，所述植物基因組dna快速提取試劑盒包括裂解液、結(jié)合液、抑制物去除液、漂洗液、洗脫緩沖液以及吸附基因組dna的硅基質(zhì)吸附柱；其中，所述裂解液包含2％ctab、100mm且ph為8的tris-hcl、20mm且ph為8.0的edta、1.5m?nacl、1.5％吐溫-20、0.5％dtt；所述結(jié)合液包含5m鹽酸胍，50mm?tris-hcl，10mm?edta，10％無水乙醇、15％peg4000；其中ph值為8.0。
11、作為優(yōu)選，所述植物選自煙草、甘薯、玉米、小麥、棉花、蘋果、大豆、山藥、圣女果、蠟質(zhì)蝴蝶蘭、花生、油菜、香菇、龍須菜、水稻中的至少一種。
12、作為優(yōu)選，尤其適用于多糖多酚植物的基因組dna快速提取。
13、本專利技術(shù)還提供了一種利用上述任一項技術(shù)方案所述的植物基因組dna快速提取試劑盒的提取方法，包括如下步驟：
14、將植物材料研磨成粉后加入預(yù)熱的裂解液進行60-70℃水浴20-30min，得到dna粗提液；
15、將溫浴完成的dna粗提液與氯仿或者氯仿/異戊醇混合，離心；
16、取上清，加入1-2倍體積結(jié)合液上混合后上dna吸附柱，離心；
17、分別用抑制物去除液和漂洗液去除蛋白質(zhì)、多糖多酚等雜質(zhì)；
18、用洗脫緩沖液洗脫吸附柱，得到dna。
19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的優(yōu)點和積極效果在于：
20、1、本專利技術(shù)提供了一種適用于植物基因組dna快速提取的試劑盒，其在傳統(tǒng)的ctab法的基礎(chǔ)上，通過對抽提液進行優(yōu)化(添加多種針對植物特點的多糖、多酚去除成份)迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，同時在結(jié)合液中加入易與酚類結(jié)合的試劑peg，它們與酚類有較強的親和力，可防止酚類與dna的結(jié)合。該試劑盒能夠高效地提取到基因組dna，且dna的完整性和純度高，具有廣泛的適用性。更重要的是，本專利技術(shù)對于植物組織(尤其是多酚含量比較高的植物組織)的dna提取有很好的提升效果。
21、2、本專利技術(shù)試劑盒中裂解液特異對吐溫-20、dtt的濃度進行摸索，篩選出最佳濃度，能夠在去除植物多酚多糖等雜質(zhì)的基礎(chǔ)上最大限度的將植物組織中的基因組dna提取出來，尤其是多酚含量比較高的植物組織。此外，該試劑盒中結(jié)合液特異對鹽酸胍的濃度、peg的種類及濃度進行摸索，篩選出最佳種類及濃度，可明顯增加dna結(jié)合量。
22、3、本專利技術(shù)試劑盒具有操作簡便、快捷的優(yōu)點，極大的縮短了試驗時間，可在1h內(nèi)完成單個或多個樣本的提取工作，節(jié)約了大量的人力、物力，使繁瑣的工作變得簡單，成本低，提取率高。
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1.植物基因組DNA快速提取試劑盒，其特征在于，包括裂解液、結(jié)合液、抑制物去除液、漂洗液、洗脫緩沖液以及吸附基因組DNA的硅基質(zhì)吸附柱；其中：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述DNA復(fù)合助提劑包括二硫蘇糖醇和半胱氨酸中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合液包含2.5-7.0M鹽酸胍，50mM?Tris-HCl，10mM?EDTA，10％無水乙醇、5％-30％聚乙二醇PEG；其中pH值為4.0-8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述PEG選自PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000中的任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述抑制物去除液包含1-5M鹽酸胍，5-100mM且PH為6.0-8.5的Tris-HCl，體積分?jǐn)?shù)為10％-60％的無水乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述漂洗液包含0.5-1.5M的NaCl，100mM且pH為
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述洗脫緩沖液可以為TE緩沖液或去離子水。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，所述植物選自煙草、甘薯、玉米、小麥、棉花、蘋果、大豆、山藥、圣女果、蠟質(zhì)蝴蝶蘭、花生、油菜、香菇、龍須菜、水稻中的至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的DNA快速提取試劑盒，其特征在于，尤其適用于多糖多酚植物的基因組DNA快速提取。
10.利用權(quán)利要求1-9任一項所述的植物基因組DNA快速提取試劑盒的提取方法，其特征在于，包括如下步驟:
...【技術(shù)特征摘要】
1.植物基因組dna快速提取試劑盒，其特征在于，包括裂解液、結(jié)合液、抑制物去除液、漂洗液、洗脫緩沖液以及吸附基因組dna的硅基質(zhì)吸附柱；其中：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的dna快速提取試劑盒，其特征在于，所述dna復(fù)合助提劑包括二硫蘇糖醇和半胱氨酸中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的dna快速提取試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合液包含2.5-7.0m鹽酸胍，50mm?tris-hcl，10mm?edta，10％無水乙醇、5％-30％聚乙二醇peg；其中ph值為4.0-8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的dna快速提取試劑盒，其特征在于，所述peg選自peg2000、peg4000、peg6000、peg8000中的任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的dna快速提取試劑盒，其特征在于，所述抑制物去除液包含1-5m鹽酸胍，5-100mm且ph為6.0-8.5的tris...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：程建祥，王芮，徐宜鐵，任光琳，
申請(專利權(quán))人：山東思科捷生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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