本發明專利技術公開了一種適同時用于多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設在盒體內的酶標板／試管及設在盒體內的試劑。在酶標板的每孔內，由包被液包被能與抗多種有機磷共同抗體特異性合反應的通用包被抗原，并用明膠進行封閉，盒內試劑包含洗滌液、底物稀釋液、多種有機磷標準溶液、抗多種有機磷抗體、酶標抗多種有機磷抗體、底物、顯色物質和反應終止液。本發明專利技術能用于水、土壤、蔬菜等食品中及中毒樣品中多種有機磷殘留的同時快速檢測，樣品的前處理過程簡單，能同時檢測批量的樣品，樣品檢測成本低于傳統的檢測方法。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種同時適用于針對殘留多種有機磷進行分析的酶聯免疫吸附 測定試劑盒，該試劑盒主要適用于快速測定批量的水樣、土壤等環境樣品和中 毒樣品及蔬菜等食品樣品中的多種有機磷殘留。屬于殘留農藥檢測領域。
技術介紹
農藥及其代謝物傳統的殘留分析方法主要是依靠氣相色譜(GC)、高效液相 色譜(HPLC)、質譜(MS)等物理化學分析手段，但由于農藥使用規模不斷擴大， 農藥殘留造成環境影響和人類健康的慢性和長期效應曰益受到人們關注和擔 憂，對農藥殘留的限制也越來越嚴格，對分析測定對象、種類、數量、范圍、 指標等諸方面都提出了新的要求和更高的標準，但傳統的理化分析方法通常繁 瑣復雜，工作量大，儀器昂貴，并要有熟練的技術人員及較長的分析周期。因 此人們迫切希望有一種簡單、快速、靈敏及廉價的檢測技術能在野外和實驗室 內進行大批量的檢測應用。免疫分析法正具備這些優點，所以盡管將免疫分析 用于農藥殘留分析的時間很短，仍然很快用于環境樣品和食品樣品中農藥殘留 的分析。多數有機磷農藥為廣譜性高效殺蟲劑，在世界范圍內廣泛應用于糧食、棉 花等經濟作物的多種害蟲防治，并且對地下害蟲、家畜害蟲以及衛生害蟲也有 很好的防治效果。但是由于很多有機磷農藥品種對人畜的毒性相當高，近年來， 因有機磷農藥中毒的報道，仍然屢見不鮮。尤其是在作物和蔬菜上的大量使用， 對人體健康造成極大的危害，這已引起人們的關注。因此，開發一種簡單快速 適用于多種有機磷農藥殘留現場監控的痕量分析方法具有重要的現實意義。檢測有機磷殘留量常規方法為高效液相色譜法等，該方法的靈敏度受樣品 的凈化、濃縮等步驟的影響很大，且該方法需要昂貴的儀器，且過程繁瑣，不 適合大批量樣品的檢測與分析。免疫分析為有機磷的殘留檢測提供了一個新的 分析檢測途徑。要將免疫分析方法運用到實際中，則需要將其制備成試劑盒。 現有技術公開了多種試劑盒，其中包括了檢測多種有機磷殘留物的試劑盒及其 制備方法。而現有技術中沒有關于方便同時檢測多種有機磷的酶聯免疫吸附測 定試劑盒技術。本專利技術正是針對這一空白，經過專利技術人長時間的實驗和測試，得到了一種 適用于同時針對多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑盒。
技術實現思路
要解決的問題本專利技術的目的是提供一種同時檢測多種有機磷殘留的酶聯免疫吸附測定試 劑盒。本專利技術的另一目的是提供一種具有高特異性、高靈敏度，操作方法簡單快 速，并能用于大批量樣品同時快速檢測殘留多種有機磷的試劑盒。對殘留多種 有機磷如甲基對硫磷、殺螟硫磷、倍硫嫌、乙酰甲胺磷、樂果、馬拉硫磷等農藥在蔬菜中的最低檢出濃度分別為6.0、 10.0、 13.0 、 12.0、 10.0、 16.0ng/ml。技術方案本專利技術涉及一種同時用于多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑 盒，它基于免疫反應和酶促反應，包括盒體、設在盒體內的酶標板和/或試管和 設在盒體內的試劑，其特征在于，在酶標板的每個孔內含有抗多種有機磷通用 包被抗原，盒內試劑包含抗多種有機磷共同抗體、多種有機磷標準溶液、酶標 記抗多種有機磷共同抗體。盒內試劑還包含洗滌液、底物稀釋液、底物溶液和 反應終止液。在具體的實施方案中，本專利技術試劑盒包括盒體、設在盒體內的96孔/40孔 酶標板/試管和設在盒體內的試劑。在所述酶標板的每個孔內，吸附著由包被液 包被能與抗多種有機磷共同抗體特異性結合反應的通用包被抗原，并用5%明膠 進行封閉，盒內試劑包含洗滌液(稀釋液)、底物稀釋液、抗多種有機磷共同抗體 (間接ELISA)、多種有機磷標準溶液、酶標多種有機磷共同抗體例如辣根過氧化 物酶標記羊抗兔共同抗體(適用于間接竟爭ELISA法)或辣根過氧化物酶標記抗 多種有機磷兔共同抗體(適用于直接竟爭ELISA法)、底物溶液和反應終止液。其中固相通用包被抗原的制備及盒體內試劑組成如下將通用包被抗原用pH9.6， 0.05mol/L的碳酸鹽緩沖溶液(含1 2g碳酸鈉和 2-4g碳酸氫鈉，雙蒸水1L,即包被液)稀釋成0.5~4ug/mL，點于96孔/40孔 酶標板上，100ug/孔，并用5%明膠封閉；其中通用包被抗原為例如N-(oc-萘乙 酰基)-6-氨基己酸與卵清蛋白的復合物；洗滌液(稀釋液)一瓶，40-80mL/瓶，組成比例為磷酸二氫鉀0.1-0.3g、磷酸 氫二鈉2-4g、氯化鉀0.1-0.3g、吐溫-20 0.5-3mL、雙蒸水500ml-1000ml,為正常 使用的15-30倍濃縮液；底物稀釋液一瓶，30-50mL/瓶，配制如下檸檬酸3-6g,磷酸氫二鈉l-3g， 雙蒸水，為正常使用的5-10倍濃縮液；酶底物為30%過氧化氫，10-15mL/瓶和鄰苯二胺固體粉末4』支，10-20mg/支；抗多種有機磷共同抗體(IgG)4瓶，100ml/瓶，工作濃度為1: 500-1000(間接ELISA法)；所述的抗多種有機磷共同抗體(IgG)為通過特殊有機磷人工半抗原和牛血清白蛋白合成的偶聯物作為免疫源注射家兔后產生的能與多種有機磷分子、多種有機磷包被原特異性結合的免疫球蛋白(IgG);辣根過氧化物酶標記抗多種有機磷兔共同抗體(直接ELISA法)或者辣根過氧化物酶標記羊抗兔共同抗體(間接ELISA法)一瓶，200-400uL/瓶，為正常使用時800-1500倍濃縮液；上述辣根過氧化物酶標抗多種有機磷共同抗體為多種有機磷共同抗體(IgG)與辣根過氧化物酶(HRP)結合形成的復合物；反應終止液一瓶，30-50ml/瓶，為2mol/L硫酸；多種有機磷不同濃度系列(O.l、 0.5、 2、 10、 50、 100mg/L)標準液6瓶，l-4mL/瓶，甲醇定容，使用時用PBST稀釋10倍。本專利技術的同時適用于多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑盒，能夠同時檢測水樣、土壤、中毒樣品、蔬菜等食品中多種有機磷的殘留。試劑盒測定原理首先將有機磷農藥類似分子與大分子載體(如蛋白質)偶聯制得的復合物作為通用包被抗原吸附于固相載體上，然后加入待測農藥和抗多種有機磷共同抗體(間接ELISA法)或酶標抗多種有機磷共同抗體(直接ELISA法)。通用包被抗原、待測農藥與抗多種有機磷共同抗體(或酶標抗多種有機磷共同抗體)進行竟爭反應，待測農藥含量多，則被結合在通用包被抗原上的共同抗體少，最終酶促反應顯色淺，反之結合在通用包被抗原的共同抗體(或酶標共同抗體)多，最終酶促反應顯色深。上述通用包被抗原、待測農藥、抗多種有機磷共同抗體或酶標抗多種有機磷共同抗體竟爭結合反應后，再加入底物溶液出現顯色反應加以測定(間接ELISA法，加底物溶液前不需再加入酶標2抗)。當共同抗體或酶標共同抗體量一定時，樣品中的待測農藥量越多，與通用包被抗原結合的酶標共同抗體就越少，發色反應減弱，抑制率增高；反之，則發色反應增強，抑制率減低，因而根據已知量農藥的標準線和待檢樣品的抑制率，再根據抑制率與農藥濃度之間的半對數關系作圖即得標準曲線，并推算出待測農藥的濃度。抗多種有機磷共同抗體的制備將人工合成的多種有機磷免疫原(即特殊有機磷人工半抗原與牛血清白蛋白結合形成的偶聯物)多次注射家兔刺激其體的免疫系統產生能對多種有機磷農藥分子或多種有機磷包被原(特殊有機磷人工半抗原與卵清蛋白人工合成的偶聯物)特異性識別結合的免疫球蛋白(IgG本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種同時使用于多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設在盒體內的酶標板和／或試管和設在盒體內的試劑，其特征在于，在酶標板的每孔內含有抗多種有機磷通用包被抗原，盒內試劑包含抗多種有機磷抗體、多種有機磷標準溶液、酶標記抗多種有機磷共同抗體。
【技術特征摘要】
1. 一種同時使用于多種有機磷殘留分析的酶聯免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設在盒體內的酶標板和/或試管和設在盒體內的試劑，其特征在于，在酶標板的每孔內含有抗多種有機磷通用包被抗原，盒內試劑包含抗多種有機磷抗體、多種有機磷標準溶液、酶標記抗多種有機磷共同抗體。2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述抗多種有機磷共同抗體為通過 特殊有機磷人工半抗原和牛血清白蛋白合成的偶聯物作為免疫...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫家隆，
申請(專利權)人：孫家隆，
類型：發明
國別省市：95[中國|青島]
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