【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于啤酒檢測，尤其涉及到一種同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法。
技術(shù)介紹
1、啤酒中的多酚類物質(zhì)是其主要的抗氧化物質(zhì)，已有研究證實多酚具有清除自由基、抗癌、預(yù)防心血管疾病等功效。例如原兒茶酸能抑制炎癥反應(yīng)，對香豆酸有降血糖作用，阿魏酸具有抑制血小板的生成，鎮(zhèn)痛等作用。此外作為啤酒中的一類重要化合物，多酚類物質(zhì)在啤酒的非生物穩(wěn)定性、風(fēng)味穩(wěn)定性、色澤等方面起著重要作用，是導(dǎo)致啤酒口感和色澤變化的重要原因。因此，對啤酒多酚物質(zhì)含量進(jìn)行檢測和監(jiān)控具有一定的實際意義。
2、但是多酚物質(zhì)種類很多，結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都極為相似，并且多酚性質(zhì)較為活潑，容易發(fā)生縮合或降解反應(yīng)。而且由于啤酒成分復(fù)雜，多酚類物質(zhì)含量比較低，因此在上機檢測前有必要對啤酒樣品進(jìn)行前處理，在提高檢測靈敏度的同時也可以延長色譜柱的壽命。
3、現(xiàn)有技術(shù)中有關(guān)啤酒多酚類化合物的檢測方法，存在前處理過程復(fù)雜，檢測效率低以及檢測手段復(fù)雜的問題。對于啤酒多酚的檢測，尚需提供一種前處理方法簡單，檢測手段簡便，檢測過程高效、結(jié)果準(zhǔn)確的方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了一種同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法，該方法可實現(xiàn)對啤酒多酚類物質(zhì)高效準(zhǔn)確、低檢出限、高通量的自動化檢測，完成對成品酒的監(jiān)控，以啤酒為檢測基質(zhì)，為進(jìn)一步為啤酒的營養(yǎng)功能評價提供數(shù)據(jù)支持，為啤酒貨架期品質(zhì)的監(jiān)測提供理論依據(jù)。
2、為了達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)提供了一種同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法，所述采用超濾管對啤酒樣
3、作為優(yōu)選，采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理具體為：
4、收集啤酒樣品，手動排氣后，準(zhǔn)確吸取樣品4ml至30000分子量的超濾管，用離心機6000-10000r/min轉(zhuǎn)速離心10-15min，取下清夜，用超純水定容至4ml，吸取1.5ml到液相小瓶中備用。
5、作為優(yōu)選，高效液相色譜條件為：
6、色譜柱：atlantis?c18，4.6×250mm，5μm；
7、柱溫：30℃，進(jìn)樣量10μl；
8、高效色譜儀型號：waters?e2695，采用waters?2998二極管陣列檢測器采集波長，采集范圍從210nm至400nm，其中，原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對羥基苯乙酸、香草酸、丁香酸、表兒茶素、水楊酸的檢測波長為210nm，咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、芥子酸的檢測波長為322nm；
9、流動相為純乙腈溶液和體積百分比濃度為0.01％的三氟乙酸，三氟乙酸水溶液采用超純水配制。
10、作為優(yōu)選，流動相梯度洗脫條件：
11、洗脫時間為15min，體積百分比濃度從3％變化至13％的乙腈流動相；
12、洗脫時間為25min，體積百分比濃度從13％變化至25％的乙腈流動相；
13、洗脫時間為33min，體積百分比濃度從25％變化至35％的乙腈流動相；
14、洗脫時間為34min，體積百分比濃度從35％變化至90％的乙腈流動相；
15、洗脫時間為37min，體積百分比濃度90％的乙腈流動相洗脫3min；
16、洗脫時間為38min，體積百分比濃度從90％變化至3％的乙腈流動相；
17、洗脫時間為45min，體積百分比濃度90％的乙腈流動相洗脫7min。
18、作為優(yōu)選，定性定量分析具體為：
19、定性分析：用無水乙醇溶液配制11種多酚物質(zhì)，分別是原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對羥基苯乙酸、香草酸、丁香酸、表兒茶素、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水楊酸的單一標(biāo)準(zhǔn)品溶液，而后用上述高效液相色譜儀及色譜條件進(jìn)行分析，分別得到每一種多酚物質(zhì)在高效液相色譜圖譜中的保留時間，通過與待測啤酒中的多酚類物質(zhì)譜圖的保留時間進(jìn)行對照，對啤酒中的多酚類物質(zhì)實現(xiàn)定性分析；
20、定量分析：用無水乙醇配置不同濃度梯度的外標(biāo)混合多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述高效液相色譜條件下分析，分別為1、2.5、5、10、35mg/l，以峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，通過線性回歸得到每種多酚物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，將待測啤酒中多酚類物質(zhì)的峰面積代入到各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，實現(xiàn)對啤酒中多酚類物質(zhì)的定量分析。
21、作為優(yōu)選，在進(jìn)行定性定量分析后，還包括驗證程序，具體包括以下步驟：
22、于待測啤酒中添加不同濃度的11種多酚物質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)品，使混合標(biāo)準(zhǔn)濃度分別為2.5和5mg/l，對啤酒樣品和加標(biāo)樣品進(jìn)行hplc分析，測定其回收率，重復(fù)6次，計算平均加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd。
23、作為優(yōu)選，以峰高信噪比s/n≥3和s/n≥10計算出11種多酚的檢出限和定量限。
24、本專利技術(shù)還提供了一種采用上述任一項技術(shù)方案所述的同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法在快速預(yù)測啤酒貨架期的應(yīng)用。
25、本專利技術(shù)還提供了一種快速預(yù)測啤酒貨架期的方法，采用如上述任一項技術(shù)方案所述的方法對啤酒中的多酚類物質(zhì)進(jìn)行同時檢測，基于多酚類物質(zhì)的檢測結(jié)果，采用simca軟件計算啤酒的vip排名，取前三名貢獻(xiàn)度高的多酚類物質(zhì)建立回歸方程以預(yù)測啤酒樣品的貨架期。
26、作為優(yōu)選，選擇了兩個品種的啤酒；
27、高含量多酚品種的貨架期y(月)＝145-19.1*原兒茶酸+1.0*阿魏酸-50.9*芥子酸，r2＝96.7％；
28、低含量多酚品種的貨架期y(月)＝-141+48.4*阿魏酸+275*表兒茶素-66.7*咖啡酸，r2＝97.8％；
29、其中，高含量多酚品種的含量是指多酚含量≥200ppm的品種，低含量多酚品種的含量是指多酚含量＜200ppm的品種。
30、本專利技術(shù)還提供了一種啤酒貨架期品質(zhì)的監(jiān)測方法，將如上述任一項技術(shù)方案所述方法預(yù)測得到的啤酒樣品的貨架期與啤酒最佳賞味期的貨架期≤6個月進(jìn)行對比，以實現(xiàn)啤酒貨架期品質(zhì)的有效監(jiān)測。
31、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的優(yōu)點和積極效果在于：
32、1、本專利技術(shù)為啤酒中多酚物質(zhì)的高效液相色譜分析方法，能夠同時檢測原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對羥基苯乙酸、香草酸、丁香酸、表兒茶素、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水楊酸11種多酚類化合物。
33、2、采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理，前處理方法簡單，且能夠有效的富集樣品，降低樣品基質(zhì)的干擾，提高檢測靈敏度，提高樣品的凈化和富集效率。
34、3、采用外標(biāo)混合多酚標(biāo)準(zhǔn)品法對啤酒中的多酚類物質(zhì)進(jìn)行分析，在常見濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系和較高的回收率，能夠準(zhǔn)確的對多酚類物質(zhì)進(jìn)行定性定量。
35、4、采用梯度程序，能夠針對不同結(jié)構(gòu)、不同極性的多酚類物質(zhì)進(jìn)行有效分離，與等度程序相比，儀器檢測分析時間更短，各種成分分本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法，其特征在于，所述采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理，結(jié)合高效液相色譜法可同時對原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對羥基苯乙酸、香草酸、丁香酸、表兒茶素、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水楊酸共11種多酚類物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理具體為：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，高效液相色譜條件為：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，流動相梯度洗脫條件：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，定性定量分析具體為：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在進(jìn)行定性定量分析后，還包括驗證程序，具體包括以下步驟：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，以峰高信噪比S/N≥3和S/N≥10計算出11種多酚的檢出限和定量限。
8.一種快速預(yù)測啤酒貨架期的方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1-7任一項所述的方法對啤酒中的多酚類物質(zhì)進(jìn)行同時檢測，基于多酚類物質(zhì)的檢測結(jié)果，采用SIMCA軟件計
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，選擇兩個品種啤酒；
10.一種啤酒貨架期品質(zhì)的監(jiān)測方法，其特征在于，將權(quán)利要求8或9所述方法預(yù)測得到的啤酒樣品的貨架期與啤酒最佳賞味期的貨架期≤6個月進(jìn)行對比，以實現(xiàn)啤酒貨架期品質(zhì)的有效監(jiān)測。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種同時檢測啤酒中11種多酚類物質(zhì)的方法，其特征在于，所述采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理，結(jié)合高效液相色譜法可同時對原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對羥基苯乙酸、香草酸、丁香酸、表兒茶素、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水楊酸共11種多酚類物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用超濾管對啤酒樣品進(jìn)行前處理具體為：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，高效液相色譜條件為：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，流動相梯度洗脫條件：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，定性定量分析具體為：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在進(jìn)行定性定量分析后，還包括驗證...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐楠，尹花，邵淑萍，楊朝霞，王劍鋒，李梅，閆鵬，陳華磊，史雅琦，張宇昕，
申請(專利權(quán))人：青島啤酒股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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