【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種重組a型人源化iii型膠原蛋白及其表達工程菌。
技術(shù)介紹
1、膠原蛋白是生物高分子材料，是動物結(jié)締組織的主要成分，是哺乳動物體內(nèi)含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質(zhì)總量的30％左右，具有良好的生物相容性、低免疫原性和組織可降解吸收性，在創(chuàng)面止血、愈合，缺損組織的填充、修復(fù)及重建，藥物載體和組織工程等方面有廣泛應(yīng)用，是理想的醫(yī)用生物材料。目前，膠原蛋白已被廣泛應(yīng)用于止血劑與創(chuàng)面敷料、生物補片、骨修復(fù)材料、藥物釋放載體及作為組織工程支架等方面；臨床使用顯示，膠原蛋白對缺損組織的修復(fù)、再生及重建有著顯著促進作用。
2、目前，膠原蛋白獲取方法主要由2種途徑，一種是動物組織提取，這種方法提取的膠原蛋白雖然具有良好生物相容性、和降解低性等特性，但缺乏足夠的機械強度、具有交叉污染的風(fēng)險。另一種方法則是基因工程法，此方法的優(yōu)點是人膠原蛋白的質(zhì)量可控、加工性強、水溶性好、周期性短、較低排斥反應(yīng)等，但仍然存在純化工藝復(fù)雜、生產(chǎn)成本高、表達出來的蛋白與天然蛋白活性相差很大等缺點。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種重組a型人源化iii型膠原蛋白及其表達工程菌。本專利技術(shù)提供的重組a型人源化iii型膠原蛋白可以通過表達工程菌表達，其表達出來的蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能良好，生產(chǎn)成本低，更容易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)提供了一種重組a型人源化iii型膠原蛋白，其氨基酸序列
4、本專利技術(shù)還提供了一種編碼上述蛋白的基因。
5、優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列為seq?id?no.2所示。
6、本專利技術(shù)還提供了一種含有上述基因的表達載體。
7、本專利技術(shù)還提供了一種表達工程菌，所述工程菌含有表達重組a型人源化iii型膠原蛋白的基因。
8、優(yōu)選的，所述工程菌含有seq?id?no.2所示基因。
9、本專利技術(shù)還提供了一種表達工程菌的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
10、(1)將seq?id?no.2所示的基因序列克隆到真核表達載體中，得到重組質(zhì)粒；
11、(2)再將所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至酵母細(xì)胞中，得到酵母表達工程菌。
12、優(yōu)選的，所述酵母為畢赤酵母。
13、優(yōu)選的，所述構(gòu)建方法還包括：培養(yǎng)、高拷貝篩選步驟(2)中所述畢赤酵母表達工程菌。
14、優(yōu)選的，表達載體為ppic9k。
15、本專利技術(shù)提供了一種制備重組a型人源化iii型膠原蛋白的方法，使用所述表達工程菌表達重組a型人源化iii型膠原蛋白，然后進行分離純化。
16、本專利技術(shù)還提供了一種上述的重組a型人源化iii型膠原蛋白在制備藥品、化妝品、食品、保健品、醫(yī)療器械中的應(yīng)用。
17、有益效果：
18、本專利技術(shù)提供的重組a型人源化三型膠原蛋白基因序列與人源iii型膠原蛋白基因序列相應(yīng)部分100％相同，不存在氨基酸的替換或者突變，因此，具有良好的親水性及以及高活性，使得其在生物醫(yī)學(xué)材料、美容化妝品及護膚品領(lǐng)域等有應(yīng)用潛力。
19、本專利技術(shù)提供的重組a型人源化三型膠原蛋白的制備方法具有大規(guī)模、簡便、成本較低等優(yōu)勢。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護點】
1.一種重組A型人源化III型膠原蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列為SEQ?IDNO.1所示。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述重組A型人源化III型膠原蛋白的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2所示。
4.一種含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達載體。
5.一種表達工程菌，其特征在于，所述工程菌含有表達權(quán)利要求1所述重組A型人源化III型膠原蛋白的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌含有SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。
7.一種表達工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的表達工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述真核表達載體為pPIC9K。
9.一種制備重組A型人源化III型膠原蛋白的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求5所述表達工程菌表達重組A型人源化III型膠原蛋白，然后進行分離純化。
10.權(quán)利要求1所述重組A型人源化III型膠原蛋白或權(quán)利要求9所述方法制備得到
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種重組a型人源化iii型膠原蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列為seq?idno.1所示。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述重組a型人源化iii型膠原蛋白的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列為seq?id?no.2所示。
4.一種含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達載體。
5.一種表達工程菌，其特征在于，所述工程菌含有表達權(quán)利要求1所述重組a型人源化iii型膠原蛋白的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌含有seq?i...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡靜波，殷利紅，張曉靜，
申請(專利權(quán))人：浙江暨北生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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