【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及一種多瘤病毒基因遞送載體顆粒。本專利技術還涉及根據本專利技術的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其用于治療或預防性治療受試者炎癥的方法中，例如通過去除或滅活受試者炎癥部位的損傷相關分子模式。此外，本專利技術涉及包含本專利技術的多瘤病毒基因遞送載體顆粒的組合物。
技術介紹
1、自身免疫疾病和過敏與慢性或爆發(flaring)炎癥和對自身蛋白或非自身蛋白(分別稱為自身抗原或過敏原)的免疫相關。迄今為止，自身免疫疾病和過敏不能治愈。癥狀可以通過患者免疫系統的一般抑制來掩蓋或減輕。一般免疫抑制劑的長期使用通常與嚴重的不良反應有關，例如對病原體感染的易感性增加以及其他免疫相關疾病的發展，包括癌癥、炎性、變性、營養不良、自身免疫疾病和過敏。因此，迫切需要使患者的免疫系統保持完整的自身免疫疾病和過敏的新治療。
2、抑制慢性或爆發炎癥是阻止炎性、變性、營養不良、自身免疫組織破壞和過敏反應的有吸引力的方法。可以通過分別恢復對患有炎性、變性、營養不良、自身免疫疾病或過敏的患者中的原發性自身抗原(psags)或過敏原的免疫耐受來抑制炎癥。然而，迄今為止，自身抗原或過敏原的耐受性方法效果差。此外，對于大多數自身免疫疾病，迄今為止還沒有鑒定到psags。
3、在先天免疫級別起作用以治療尚未鑒定psags的自身免疫疾病的替代方法是通過去除從受損細胞釋放的稱為損傷相關分子模式(damp)的警報分子來停止疾病進展。從焦亡細胞釋放的細胞外腺苷三磷酸(atp)是最有效的damp之一。細胞外atp驅動炎癥、組織損傷和死亡(cauwels
4、去除細胞外atp的有吸引力的方法是其通過存在于炎癥部位的磷酸酶轉化為腺苷二磷酸(adp)、單磷酸(amp)或腺苷(ado)。細胞外atp分子的去除會防止攻擊和破壞受影響組織的細胞的先天和適應性免疫應答的進一步激活并且會減慢或停止自身免疫疾病進展。
5、細胞外atp被膜結合和g蛋白連接的p2受體感知(也參見：圖1)。結合后，線粒體開始產生過量的ros，細胞質nod樣受體蛋白3(nlrp3)蛋白組裝成炎癥體，并引發局部炎癥反應。細胞外atp被2種膜結合的外核苷酸酶cd39(外-腺苷三磷酸雙磷酶)和cd73(外-5’-核苷酸酶)降解成腺苷(ado)。兩種核苷酸酶都存在于t調節細胞(treg)的表面以防止免疫細胞的活化。在細胞外atp是高度促炎性的情況下，其由膜結合的p1受體感知的去磷酸化衍生物adp、amp和ado抵消炎癥并促進免疫耐受的恢復。
6、美國專利申請us2009/0130092?a1公開了一種通過抑制白細胞浸潤部位來治療或預防受試者的免疫炎癥、血栓性或缺血性障礙的方法，該方法包括在炎癥部位向受試者施用有效量的外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶。這種方法的缺點之一是蛋白質在體內具有相對短的半衰期。這意味著患者必須重復和終生施用蛋白質，以將炎癥保持在低水平。
7、可以通過使用病毒基因遞送載體在炎癥部位表達外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶蛋白(其可溶性形式或融合蛋白)來避免外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶蛋白的體內半衰期短的問題。
8、在目前用于這些目的的病毒基因遞送載體中，慢病毒(lv)和腺相關病毒(aav)載體是最廣泛使用的。對于兩種載體，已經表明，此類復制缺陷型病毒載體在對同源病毒幼稚的宿主中是非免疫原性的或致耐受性的。
9、lv載體在宿主基因組中隨機整合，因此增加了插入誘變的風險。此外，lv載體顆粒在體內施用時快速降解。為此，lv載體主要用于白細胞和/或其祖細胞的離體轉導，以治療血液相關的遺傳障礙、溶酶體貯積病或癌癥。
10、aav載體主要用于體內基因治療。例如，國際專利申請wo2014/003553?a1公開了aav載體在炎癥部位表達外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶或其融合蛋白的用途。美國專利申請us2015/0190481?a1和antonioni(antonioli，?luca等人，″免疫和炎癥中的cd39和cd73″?trends?in?molecular?medicine19.6(2013)：355-367)處理病毒基因遞送載體中的外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶編碼序列以治療炎性疾病。外-腺苷三磷酸雙磷酶和/或外-5’-核苷酸酶蛋白保持與轉導細胞的細胞表面結合，這導致發炎組織中非常低的磷酸酶活性和有限的治療益處。matsumoto等人使用編碼分泌型組織非特異性堿性磷酸酶(tnalp)的aav載體來恢復人嬰兒低磷酸酶血癥的動物模型中的tnalp活性，目的是抑制治療動物中的特征性疾病癥狀，例如癲癇發作(matsumoto，tae等人，“aav介導可溶性堿性磷酸酶持續表達挽救重度嬰兒低磷酸酶血癥小鼠”?human?gene?therapy22.11(2011)：1355-1364)。
11、然而，在接受aav載體治療之前，人群體中的大多數已經遇到野生型aav及其輔助病毒(腺病毒，引起普通感冒)，因此已經發展了對aav衣殼蛋白的強體液和細胞免疫記憶。使用重組aav載體的臨床研究顯示，載體顆粒的施用在絕大多數治療的患者中引發針對病毒和轉基因編碼的蛋白質的先天和適應性免疫應答，導致治療性轉基因的表達水平隨時間降低，并且從身體中消除轉導的細胞，損害載體的重新施用。顯示長期轉基因表達的少數治療患者最可能從未感染aav，因此對研究中使用的載體是免疫學上幼稚的。由于這些原因，基于aav載體的體內基因治療的功效受到限制。
技術實現思路
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1.一種多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列。
2.根據權利要求1所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒包含復制缺陷型多瘤病毒基因遞送載體顆粒。
3.根據權利要求1或2所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒衍生自靈長類多瘤病毒，優選猿猴多瘤病毒，例如獼猴多瘤病毒猿猴病毒40(SV40)。
4.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的分泌形式的核酸序列。
5.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽例如哺乳動物、特別是人堿性磷酸酶或其活性衍生物的核酸序列。
6.根據權利要求5所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼人胎盤堿性磷酸酶(PALP)、人腸堿性磷酸酶(IALP)、人生殖細胞堿性磷酸酶(GCALP)、人組織非特異性堿性磷酸酶(T
7.根據權利要求5或6所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含與氨基酸序列SEQ?ID?NO：5(SPALP)具有至少70%序列同一性的核酸序列。
8.根據權利要求5-7中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，條件是所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒不包含編碼外核苷酸酶例如分泌型外核苷酸酶的核酸序列。
9.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒還包含編碼生長因子蛋白或其前體的核酸序列。
10.根據權利要求9所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒包含第一核酸分子和第二核酸分子，所述第一核酸分子包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列，所述第二核酸分子包含編碼生長因子蛋白或其前體的核酸序列。
11.根據權利要求9所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒包含核酸分子，所述核酸分子包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列和編碼生長因子蛋白或其前體的核酸序列。
12.根據權利要求9-11中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼生長因子蛋白或其前體的核酸序列包含編碼生長因子蛋白或其前體的分泌形式的核酸序列。
13.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒還包含編碼生長因子結合蛋白或其前體的核酸序列。
14.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其用于(預防性)治療炎性、變性、營養不良、自身免疫疾病和/或過敏的方法中。
15.根據權利要求1-13中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其用于通過去除或滅活受試者炎癥部位的損傷相關分子模式進行(預防性)治療的方法中。
16.根據權利要求1-13中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其用于通過去除受試者的細胞外腺苷三磷酸(ATP)進行(預防性)治療的方法中。
17.根據權利要求1-13中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其用于治療患有炎性、變性、營養不良、自身免疫疾病和/或過敏的受試者的方法中。
18.根據權利要求14-17中任一項所述的用途的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述用途包括向所述受試者施用根據權利要求1-13中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒。
19.根據權利要求18所述的用途的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒通過靜脈內、滑膜內、肺內、玻璃體內或視網膜下注射施用。
20.根據權利要求14-19中任一項所述的用途的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述受試者是人。
21.一種組合物，其包含有效量的根據權利要求1-13中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒。
22.根據權利要求21所述的組合物，其用作藥物。
...【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列。
2.根據權利要求1所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒包含復制缺陷型多瘤病毒基因遞送載體顆粒。
3.根據權利要求1或2所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒衍生自靈長類多瘤病毒，優選猿猴多瘤病毒，例如獼猴多瘤病毒猿猴病毒40(sv40)。
4.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的分泌形式的核酸序列。
5.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽例如哺乳動物、特別是人堿性磷酸酶或其活性衍生物的核酸序列。
6.根據權利要求5所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含編碼人胎盤堿性磷酸酶(palp)、人腸堿性磷酸酶(ialp)、人生殖細胞堿性磷酸酶(gcalp)、人組織非特異性堿性磷酸酶(tnalp)或其活性衍生物的分泌變體，優選人胎盤堿性磷酸酶的分泌變體(spalp)的核酸序列。
7.根據權利要求5或6所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中編碼具有堿性磷酸酶活性的多肽的核酸序列包含與氨基酸序列seq?id?no：5(spalp)具有至少70%序列同一性的核酸序列。
8.根據權利要求5-7中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，條件是所述多瘤病毒基因遞送載體顆粒不包含編碼外核苷酸酶例如分泌型外核苷酸酶的核酸序列。
9.根據前述權利要求中任一項所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒還包含編碼生長因子蛋白或其前體的核酸序列。
10.根據權利要求9所述的多瘤病毒基因遞送載體顆粒，其中所述顆粒包含第一核酸分子和第二核酸分子，所述第一核酸分子包含編碼具有磷酸酶活性的多肽的核酸序列，所述第二核酸分子包...
【專利技術屬性】
技術研發人員：費迪·魯道夫·范迪門，米格爾·加西亞托斯卡諾，西蒙·德爾芬·庫爾，馬克溫·保羅·維爾德斯，彼得魯斯·狄奧多魯斯·德哈恩，
申請(專利權)人：阿瑪納控股私人有限公司，
類型：發明
國別省市：
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