【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及黃曲霉毒素b1檢測，具體為一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法。
技術介紹
1、黃曲霉毒素b1(af?l?atoxi?n?b1，簡稱afb1)是一種由黃曲霉(aspergi?l?l?us?fl?avus)和寄生曲霉(aspergi?l?l?us?paras?it?i?cus)等霉菌產生的劇毒次級代謝產物。黃曲霉毒素具有極高的毒性和致癌性，其毒性強度遠高于氰化鉀和砒霜，被世界衛生組織(who)列為i類致癌物。afb1廣泛存在于受污染的糧食、油料作物及其制品中，包括玉米、花生、大米、小麥、大豆等。一旦食品被黃曲霉毒素污染，毒素很難被去除或分解，直接危害人類和動物的健康。因此，黃曲霉毒素的檢測和控制成為食品安全領域的重要研究課題。
2、1.黃曲霉毒素的危害及其檢測現狀
3、黃曲霉毒素b1對人類和動物的健康構成嚴重威脅，其主要危害包括肝臟毒性、致癌性、致畸性和免疫抑制作用。長期攝入低劑量的afb1可引起慢性肝病，進而發展為肝硬化和肝癌。對于動物，黃曲霉毒素的暴露會導致生長遲緩、免疫功能低下、繁殖障礙等不良反應。由于其嚴重的健康危害，許多國家和地區對食品中黃曲霉毒素的含量制定了嚴格的限量標準。中國國家標準規定，糧食及其制品中的afb1含量不得超過20μg/kg，乳制品中不得超過0.5μg/kg。
4、當前，黃曲霉毒素b1的檢測方法主要包括儀器分析法和免疫分析法。儀器分析法如高效液相色譜(hplc)、氣相色譜(gc)和液質聯用(lc-ms)等方法具有高靈敏度和高準確性，但這些方法設備昂貴、
5、2.時間分辨熒光免疫分析技術
6、時間分辨熒光免疫分析技術(time-reso?l?ved?f?l?uorescence?immunoassay，trfia)是一種新興的免疫分析技術，近年來在食品安全檢測領域得到了廣泛關注和應用。trf?ia利用稀土元素(如銪eu3+、鋱tb3+等)作為熒光標記物，這些稀土元素具有長壽命熒光特性，可以有效地避免樣品基質的自發熒光干擾，從而顯著提高檢測的靈敏度和特異性。trfia的檢測過程包括樣品處理、免疫反應、熒光標記、信號測定和數據分析等步驟。
7、與傳統的熒光分析技術相比，trfia具有以下優點：
8、高靈敏度：稀土元素的長壽命熒光信號可以顯著提高檢測的靈敏度，檢測限可達到pg級別。
9、高特異性：trf?ia能夠有效避免樣品基質的自發熒光干擾，提高了檢測的特異性和準確性。
10、快速簡便：trf?ia操作簡便，檢測速度快，適合大規模樣品的快速篩查。
11、高穩定性：稀土元素熒光標記物具有良好的化學穩定性，不易受環境因素影響。
12、3.黃酒中的黃曲霉毒素b1檢測需求
13、黃酒是我國傳統的發酵酒，具有悠久的歷史和獨特的風味，廣受消費者喜愛。黃酒的釀造過程復雜，涉及多種微生物的參與，且大部分工藝是在開放環境中進行，這為霉菌的滋生提供了條件。黃曲霉毒素b1是黃酒中潛在的安全隱患，對其進行有效檢測對于保障消費者的健康具有重要意義。
14、目前，黃酒中黃曲霉毒素b1的檢測方法主要是高效液相色譜(hplc)和酶聯免疫吸附法(el?isa)。然而，hplc方法設備昂貴、操作復雜，難以滿足企業日常檢測的需求；elisa方法雖然快速簡便，但容易出現假陽性，檢測結果的可靠性有待提高。因此，開發一種高靈敏度、高特異性、快速簡便的黃酒中黃曲霉毒素b1檢測方法迫在眉睫。
15、4.本專利技術的目的與意義
16、本專利技術提供了一種基于時間分辨熒光免疫層析技術的黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，旨在解決現有檢測方法靈敏度不高、特異性不強、操作復雜等問題。通過優化樣品前處理、免疫反應條件和熒光標記物，本專利技術實現了黃曲霉毒素b1的高靈敏度和高特異性檢測。該方法操作簡便、檢測速度快，適用于大規模樣品的快速篩查和定量分析。
17、5.技術方案的創新點
18、本專利技術的創新點主要包括以下幾個方面：
19、樣品前處理優化：通過研究不同振蕩時間、反應溫度和層析時間對檢測結果的影響，優化了樣品前處理條件，提高了檢測的靈敏度和準確性。
20、免疫反應優化：采用稀土元素作為熒光標記物，結合時間分辨熒光免疫層析技術，顯著提高了檢測的特異性和靈敏度。
21、標準曲線的建立：通過標準曲線的建立，實現了樣品中黃曲霉毒素b1的定量分析，檢測限達到0.3μg/kg，線性范圍為0.8-12.0μg/kg。
22、方法學驗證：通過批內和批間的準確度和精密度試驗，驗證了該方法的可靠性和重復性；與高效液相色譜法比對，結果具有良好的一致性。
23、6.應用前景
24、本專利技術的檢測方法特別適用于黃酒中的黃曲霉毒素b1檢測，也可推廣應用于其他食品和飼料中的黃曲霉毒素檢測。該方法不僅可以用于企業的日常檢測和質量控制，也可用于監管部門的監督抽查和風險評估。通過該方法的應用，可以有效保障食品安全，減少黃曲霉毒素對公眾健康的威脅，提高食品行業的質量管理水平。
25、綜上所述，本專利技術提供了一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，具有重要的理論價值和實際應用意義。通過時間分辨熒光免疫層析技術的應用，本專利技術實現了黃曲霉毒素b1的高效檢測，為食品安全檢測提供了新思路和新方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，包括以下步驟：
2、(1)樣品前處理：將黃酒樣品加入稀釋液，進行振蕩、離心和過濾處理；
3、(2)層析反應：將處理后的樣品加入時間分辨熒光免疫層析試紙條的樣品杯中，進行層析反應；
4、(3)信號檢測：使用時間分辨熒光讀數儀讀取試紙條上的檢測信號，計算檢測線t信號值與質控線c信號值的比值(t/c)；
5、(4)定量分析：根據標準曲線，通過t/c比值計算樣品中黃曲霉毒素b1的含量。
6、作為本專利技術優選的技術方案，所述樣品前處理步驟中的振蕩時間為20min，反應溫度為37℃，層析時間為6min。
7、作為本專利技術優選的技術方案，所述樣品稀釋液的制備包括以下步驟：
8、稱取1.0g蔗糖、0.5g牛血清白蛋白和2.5g吐溫20，混勻后用超純水定容至100.0ml。
9、作為本專利技術優選的技術方案，所述標準曲線的制備包括以下步驟：
10、(1)配制黃曲霉毒素b1標準儲備溶液；
11、(2)將標準儲備溶液用空白基質溶液梯度稀釋，配制成不同濃度的系列標準工作溶液；
12、(3)本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述樣品前處理步驟中的振蕩時間為20min，反應溫度為37℃，層析時間為6min。
3.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述樣品稀釋液的制備包括以下步驟：
4.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述標準曲線的制備包括以下步驟：
5.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述檢測限為0.3μg/kg，線性范圍為0.8-12.0μg/kg，對應的標準曲線方程為y＝-0.1913x+0.5206(R2＝0.9948)。
6.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素B1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，其批內準確度和精密度的回收率在77.9％-105.7％，變異系數在4.5％-10.3％；批間準確度和精密度的回收率在75.9％-85.8％，變異系數在8.1％-13.9％。
...【技術特征摘要】
1.一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述樣品前處理步驟中的振蕩時間為20min，反應溫度為37℃，層析時間為6min。
3.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述樣品稀釋液的制備包括以下步驟：
4.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述標準曲線的制備包括以下步驟：
5.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，所述檢測限為0.3μg/kg，線性范圍為0.8-12.0μg/kg，對應的標準曲線方程為y＝-0.1913x+0.5206(r2＝0.9948)。
6.根據權利要求1所述的一種黃曲霉毒素b1高靈敏高快速檢測方法，其特征在于，其批內準確度和精密度的回收率在77.9％-105.7％，變異系數...
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱夢潔，王盾，王督，凌冬，董菁，王雪，
申請(專利權)人：襄陽市農業科學院，
類型：發明
國別省市：
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