【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種枯草芽孢桿菌的培養方法，特別涉及一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法。
技術介紹
1、益生菌是一類對人體有益的微生物，通常稱為“有益菌”或“好菌”。它們主要存在于人體的消化道中，包括胃、小腸和大腸。這些微生物對維持腸道內微生態平衡和身體健康起著至關重要的作用。益生菌可以通過促進食物消化、增強免疫系統、抑制有害菌的生長等方式來維護腸道健康和整體健康。常見的益生菌包括乳酸菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌等。它們可以通過飲食攝入（如酸奶、酸奶制品、發酵食品等）或益生菌補充劑來增加。益生菌在預防和改善多種健康問題方面都有積極的作用。
2、枯草芽孢桿菌能夠迅速消耗腸道中的游離氧，造成腸道低氧，促進有益厭氧菌生長，間接抑制其它致病菌生長，是現有技術下用于腸道疾病治療中最為常用的益生菌種。
3、干細胞外泌體是一種由干細胞釋放的小囊泡，內含有各種生物活性分子，如微rna、蛋白質、細胞因子等。這些分子可以調節細胞信號傳導、基因表達和細胞命運，從而影響周圍組織和細胞的功能。外泌體被認為是干細胞介導的細胞間通訊的重要載體，可以在組織修復、免疫調節、疾病治療等方面發揮作用。研究表明，外泌體具有抗炎、抗氧化、促進細胞增殖和修復等多種生物學功能，因此被廣泛應用于醫學領域的研究和臨床治療中。
4、外泌體具有多種物質傳遞功能，主要包括以下幾個方面：
5、1.蛋白質傳遞：?外泌體中含有各種蛋白質，例如生長因子、細胞因子、酶等。這些蛋白質可以通過外泌體釋放到周圍環境，然后與受體細胞
6、2.mirna和其他核酸傳遞：?外泌體中含有微rna（mirna）、mrna和其他核酸分子。這些核酸分子可以通過外泌體傳遞到其他細胞，調節目標基因的表達，從而影響細胞的功能和代謝。
7、3.脂質傳遞：?外泌體的膜表面富含磷脂和膽固醇等脂質成分。這些脂質可以與受體細胞膜融合，將外泌體內的生物活性分子釋放到受體細胞內，影響細胞的信號轉導和代謝過程。
8、4.細胞器傳遞：?有些外泌體可能攜帶細胞器如線粒體或內質網等，并傳遞到其他細胞內，影響受體細胞的能量代謝或蛋白合成等生物過程。
9、這些物質傳遞功能使得外泌體在細胞間通訊、維持組織穩態、調節免疫反應等方面發揮著重要作用。因此，外泌體在醫學研究和臨床應用中備受關注，被認為有潛力用于治療各種疾病，如神經退行性疾病、心血管疾病、免疫性疾病等。
10、外泌體治療腸道疾病是一種新興的治療方法，它利用了外泌體具有天然的生物學特性和靶向性，可以攜帶藥物或治療劑到達腸道病變部位，從而發揮治療作用。目前，外泌體治療已經在腸道疾病領域得到了一些應用。例如，有研究表明，口服外泌體可以用于治療炎癥性腸病(ibd)和小腸移植排斥反應等疾病。此外，外泌體還可以用于治療腸道感染、過敏性腸炎、腸易激綜合征等疾病。在治療過程中，外泌體可以通過口服、靜脈注射、肛門灌腸等方式進行給藥。由于外泌體具有靶向性，它們可以被設計成攜帶特定的藥物或治療劑，以提高治療效果并減少副作用。
11、但是口服外泌體抵達腸道的有效性受到許多挑戰和限制，包括胃酸降解、胃腸道黏膜屏障、腸道吸收限制等。盡管口服外泌體在理論上具有潛在的治療優勢，但其在實際應用中的生物利用度較低。一些研究正在嘗試尋找解決方案，以增強口服外泌體的穩定性和生物利用度，例如使用包裹技術、修飾外泌體表面、改變載體或包裹物等策略。此外，還有研究嘗試利用納米技術或其他載體系統，幫助外泌體更有效地穿越胃腸道屏障，以提高口服外泌體的有效性。
技術實現思路
1、為了解決現有技術的問題，本專利技術提供了一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體的細菌培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其培養出的枯草芽孢桿菌，可以利用外泌體通過多種途徑進入細菌的特點，使在其中培養的枯草芽孢桿菌富含人臍帶外泌體，讓枯草芽孢桿菌作為外泌體載體進入人體腸道，在腸道中枯草芽孢桿菌釋放外泌體，使腸道病變部位可以得到益生菌和外泌體的雙重保護，達到1+1＞2的效果。
2、本專利技術所采用的技術方案如下：
3、一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，包括以下步驟：
4、a、制備枯草芽孢桿菌培養基；
5、b、使用所述的枯草芽孢桿菌培養基培養枯草芽孢桿菌48個小時；
6、c、在-80℃將步驟b得到的培養物進行5次反復凍融試驗，使細菌破碎，將凍融后的液體進行離心參數為4℃，3000g，30min的離心操作，并將獲得的上清液進行0.22微米除菌過濾，取樣進行納米流式檢測，檢測其顆粒數及粒徑數。
7、優選的，枯草芽孢桿菌培養基包括：人臍帶間充質干細胞基礎培養基、細菌生長劑、人臍帶間充質外泌體濃縮液和營養劑，其組成配比為：
8、每1000ml含人臍帶間充質干細胞基礎培養基500ml，人臍帶間充質外泌體濃縮液400ml、細菌生長劑50ml和營養劑50ml。
9、優選的，人臍帶間充質外泌體濃縮液的制備方法包括：
10、ｄ１、將在培養的人臍帶間充質干細胞取出觀察，細胞融合度＞80%時，傾倒培養上清液至500ml離心瓶中獲得上清液一；
11、ｄ２、使用離心瓶進行離心，離心參數為4℃，3000g，30min，離心后丟棄沉淀，獲得上清液二；
12、ｄ３、將獲得的上清液二進行0.22微米除菌過濾，獲得上清液三；
13、ｄ４、將上清液三使用華龕vivaexo外泌體收獲系統進行處理，獲得5倍的人臍帶間充質外泌體濃縮液。
14、優選的，細菌生長劑包括：魔芋粉15質量份、山梨醇3質量份、鄰苯二甲酸醋酸纖維素10質量份、羥丙基甲基纖維素?2.5質量份，將上述充分溶解于除菌蒸餾水中，并進行高壓滅菌。
15、優選的，營養劑包括蕓苔素?5質量份、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯?0.2質量份、納米碳酸鈣?1質量份、低取代羥丙基甲基纖維素?2質量份，將上述充分溶解在無菌蒸餾水中，進行高壓滅菌。
16、本專利技術提供的技術方案帶來的有益效果是：
17、通過本專利技術的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，得到的枯草芽孢桿菌含有大量的人間充質外泌體，外泌體粒徑數是普通培養方法所含外泌體的約9倍。通過添加人臍帶間充質外泌體的枯草芽孢桿菌培養基培養出來的枯草芽孢桿菌富含人臍帶間充質外泌體，當枯草芽孢桿菌進入腸道內后，定植于腸道并開始繁殖，在此過程中原代細菌凋亡破裂，釋放出大量的人臍帶間充質外泌體，起到消炎、組織再生及免疫調節的作用。外泌體和細菌共同作用于腸道，起到1+1＞2的治療效果。
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1.一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌培養基包括：人臍帶間充質干細胞基礎培養基、細菌生長劑、人臍帶間充質外泌體濃縮液和營養劑，其組成配比為：
3.根據權利要求２所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的人臍帶間充質外泌體濃縮液的制備方法包括：
4.根據權利要求２所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的細菌生長劑包括：魔芋粉15質量份、山梨醇3質量份、鄰苯二甲酸醋酸纖維素10質量份、羥丙基甲基纖維素?2.5質量份，將上述充分溶解于除菌蒸餾水中，并進行高壓滅菌。
5.根據權利要求２所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的營養劑包括蕓苔素?5質量份、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯0.2質量份、納米碳酸鈣?1質量份、低取代羥丙基甲基纖維素?2質量份，將上
...【技術特征摘要】
1.一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌培養基包括：人臍帶間充質干細胞基礎培養基、細菌生長劑、人臍帶間充質外泌體濃縮液和營養劑，其組成配比為：
3.根據權利要求２所述的一種使用含臍帶間充質干細胞外泌體培養基培養枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，所述的人臍帶間充質外泌體濃縮液的制備方法包括：
4.根據權利要求２所述的一種使用含...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李盼，張百峰，羅廣震，段瑞雪，馬雪嬌，李晶晶，孫建東，李芬，李世香，趙丹丹，
申請(專利權)人：山東水發生命科學研究有限公司，
類型：發明
國別省市：
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