【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物制藥，特別是涉及一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞的方法和培養(yǎng)試劑盒。
技術(shù)介紹
1、人蛻膜間充質(zhì)干細胞(human?decidual?mesenchymal?stem?cells，hdmscs)是一種來源于胎盤的間充質(zhì)干細胞(mscs)，具有自我更新能力和多能分化特性。hdmscs的旁分泌作用包括免疫調(diào)節(jié)、抗凋亡、促進血管生成、支持細胞生長和化學吸引等。特別地，含有旁分泌因子如胰島素樣生長因子(igf-1)和血管內(nèi)皮生長因子(vegf)的條件培養(yǎng)基(cm)，已被報道能加速動物模型中的傷口愈合過程。這表明，hdmscs及其分泌的因子在組織再生和傷口愈合中具有潛力。如何在體外培養(yǎng)過程中有效地擴增人蛻膜間充質(zhì)干細胞hdmscs，獲得更多數(shù)量的hdmscs，并使其既具有分化潛力又能夠產(chǎn)生具有治療潛力的最佳旁分泌因子，是現(xiàn)有技術(shù)所面臨的問題。
2、需要說明的是，在上述
技術(shù)介紹
部分公開的信息僅用于對本申請的背景的理解，因此可以包括不構(gòu)成對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)的信息。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的主要目的在于克服上述
技術(shù)介紹
的缺陷，提供一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞的方法和培養(yǎng)試劑盒，在體外培養(yǎng)過程中有效增強hdmscs的干細胞擴增。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用以下技術(shù)方案：
3、一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞的方法，包括：在體外培養(yǎng)過程中，使用含有小分子化合物組合的培養(yǎng)基對培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞hdmscs進行預處理，其中所述小分子
4、進一步地，所述小分子化合物組合包括0.5-50μm的gw842166x和1-50μm的nifenazone。
5、進一步地，所述小分子化合物組合包括1-10μm的gw842166x和5-15μm的nifenazone。
6、進一步地，所述小分子化合物組合包括5μm的gw842166x和10μm的nifenazone。
7、進一步地，所述培養(yǎng)基是還含有fbs、青霉素g和鏈霉素的dmem培養(yǎng)基。
8、一種人蛻膜間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)試劑盒，所述試劑盒包括含有小分子化合物組合的培養(yǎng)基，所述小分子化合物組合包括有效量的gw842166x和nifenazone。
9、進一步地，所述小分子化合物組合包括0.5-50μm的gw842166x和1-50μm的nifenazone。
10、進一步地，所述小分子化合物組合包括1-10μm的gw842166x和5-15μm的nifenazone。
11、進一步地，所述小分子化合物組合包括5μm的gw842166x和10μm的nifenazone。
12、進一步地，所述培養(yǎng)基是還含有fbs、青霉素g和鏈霉素的dmem培養(yǎng)基。
13、本專利技術(shù)具有如下有益效果：
14、本專利技術(shù)提出了一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞hdmscs的方法和培養(yǎng)試劑盒，通過小分子化合物組合gw842166x和nifenazone的聯(lián)合使用，提供了在hdmscs培養(yǎng)擴增中優(yōu)化生物學行為的改進策略，與單獨應(yīng)用gw842166x或nifenazone或不使用它們相比，本專利技術(shù)通過gw842166x與nifenazone的聯(lián)合使用，提高了人蛻膜間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)過程中細胞的數(shù)量和質(zhì)量，有利于增強增殖、干性表達和細胞因子分泌。
15、本專利技術(shù)通過對人蛻膜間充質(zhì)干細胞hdmscs進行分離鑒定、體外培養(yǎng)、培養(yǎng)條件優(yōu)化，驗證了hdmscs的生物學特性和添加小分子化合物組合gw842166x和nifenazone的聯(lián)合使用的優(yōu)化培養(yǎng)效果，驗證了小分子化合物組合對hdmscs增殖及多能性的影響，通過優(yōu)化hdmscs的體外培養(yǎng)體系，本專利技術(shù)為干細胞特性研究和進一步的應(yīng)用創(chuàng)造了有利條件。
16、本專利技術(shù)的實驗中，測試了hdmscs用gw842166x、nifenazone單獨、與聯(lián)合進行預處理，采用cck8、細胞凋亡、alp活性、茜素紅染色、rt-pcr、免疫印跡和elisa法，測定了不同預處理方案策略對hdmscs增殖、凋亡、干性、成骨分化和旁分泌作用的持續(xù)影響。本專利技術(shù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，gw842166x與nifenazone聯(lián)合使用顯著增強了hdmscs的干細胞擴增，減少了細胞凋亡，放大了干性表達，增加了hdmscs的旁分泌作用，促進了后期成骨分化和礦化。
17、總之，與單獨nifenazone或gw842166x預處理或不使用相比，本專利技術(shù)在hdmscs增殖、干性表達和旁分泌作用方面具有顯著的優(yōu)勢。顯示的細胞特性在hdmscs和基于hdmscs的再生體內(nèi)研究中得到了證實。這些結(jié)果顯示本專利技術(shù)為hdmscs的培養(yǎng)擴增提供了一種行之有效的新方法。
18、本專利技術(shù)實施例中的其他有益效果將在下文中進一步述及。
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1.一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞的方法，其特征在于，包括：在體外培養(yǎng)過程中，使用含有小分子化合物組合的培養(yǎng)基對培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞hDMSCs進行預處理，其中所述小分子化合物組合包括有效量的GW842166X和Nifenazone。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括0.5-50μM的GW842166X和1-50μM的Nifenazone。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括1-10μM的GW842166X和5-15μM的Nifenazone。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括5μM的GW842166X和10μM的Nifenazone。
5.如權(quán)利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基是還含有FBS、青霉素G和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基。
6.一種人蛻膜間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括含有小分子化合物組合的培養(yǎng)基，所述小分子化合物組合包括有效量的GW842166X和Nifenazone。
7
8.如權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述小分子化合物組合包括1-10μM的GW842166X和5-15μM的Nifenazone。
9.如權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述小分子化合物組合包括5μM的GW842166X和10μM的Nifenazone。
10.如權(quán)利要求6至9任一項所述的培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述培養(yǎng)基是還含有FBS、青霉素G和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞的方法，其特征在于，包括：在體外培養(yǎng)過程中，使用含有小分子化合物組合的培養(yǎng)基對培養(yǎng)人蛻膜間充質(zhì)干細胞hdmscs進行預處理，其中所述小分子化合物組合包括有效量的gw842166x和nifenazone。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括0.5-50μm的gw842166x和1-50μm的nifenazone。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括1-10μm的gw842166x和5-15μm的nifenazone。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合包括5μm的gw842166x和10μm的nifenazone。
5.如權(quán)利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基是還含有fbs、青霉素g和鏈霉素的dme...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉佳，
申請(專利權(quán))人：深圳市中佳生物醫(yī)療科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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