【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物領域，具體涉及一種鑒定黃芪屬和巖黃芪屬的方法及其試劑盒與應用。
技術介紹
1、黃芪屬astragalus?l.和巖黃芪屬hedysaruml.是豆科植物重要的組成部分，占比較大。黃芪屬和巖黃芪屬均為一年生或多年生草本，部分物種的根可入藥，入藥的種類正在逐漸擴大。此外黃芪屬和巖黃芪屬物種具有重要的經濟價值，絕大多數植物為牲畜所喜食，為天然放牧場豆科植物的重要成分。黃芪資源豐富，但品種混雜，因此對黃芪屬和巖黃芪屬物種進行準確的物種鑒定具有重要意義。
技術實現思路
1、基于以上不足之處，本專利技術提供一種鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的方法，解決了對黃芪屬和巖黃芪屬的精準鑒定與區分困難的問題。
2、本專利技術所采用的技術方案如下：一種鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的方法，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，步驟如下：
3、s1、從待測樣品中提取基因組dna；
4、s2、以待測樣品的基因組dna為模板，
5、利用dna條形碼引物組：如seq?id?no：1和seq?id?no：2所示引物進行pcr擴增its2序列片段，
6、利用dna條形碼引物組：如seq?id?no：3和seq?id?no：4所示引物進行pcr擴增psba-trnh序列片段；
7、利用dna條形碼引物組：如seq?id?no：5和seq?id?no：6所示引物進行
8、利用dna條形碼引物組：如seq?id?no：7和seq?id?no：8所示引物進行pcr擴增matk序列片段；
9、s3、得到擴增產物，經過測序、校對、特征比對，對擴增后的目標dna條形碼序列構建進化樹；
10、s4、確定待檢測樣品的物種：
11、若its2基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：9所示，在第27位堿基型為t，則判定該物種為草木樨狀黃芪，
12、若its2基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：10所示，在第2位堿基型為c和第379位堿基型為a，則判定該物種為達烏里黃芪，
13、若its2基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：11所示，在第2位堿基型為c和第379位堿基型為c，則判定該物種為斜莖黃芪，
14、若its2基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：12所示，在第81位堿基型為a和第238位堿基型為t，則判定該物種為蒙古黃芪；
15、若psba-trnh基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：13所示，在第5位堿基型為a，則判定該物種為草木樨狀黃芪；
16、若psba-trnh基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：14所示，在第160位堿基型為c，則判定該物種為山巖黃芪；
17、若psba-trnh基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：15所示，在第169位堿基型為c，則判定該物種為華北巖黃芪；
18、若psba-trnh基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：16所示，在第176位堿基型為g，則判定該物種為達烏里黃芪；
19、若psba-trnh基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：17所示，在第83位堿基型為g，則判定該物種為斜莖黃芪；
20、若rbcl基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：18所示，在第37位堿基型為g，則判定該物種為草木樨狀黃芪；
21、若rbcl基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：19所示，在第37位堿基型為a，則判定該物種為蒙古黃芪；
22、若rbcl基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：20所示，在第37位堿基型為c，則判定該物種為斜莖黃芪；
23、若rbcl基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：21所示，在第38位堿基型為g，則判定該物種為達烏里黃芪；
24、若matk基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：232所示，在第16位堿基型為g，則判定該物種為達烏里黃芪；
25、若matk基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：23所示，在第204位堿基型為c，則判定該物種為斜莖黃芪；
26、若matk基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：24所示，在第189位堿基型為a，則判定該物種為草木樨狀黃芪；
27、若matk基因片段的dna條形碼，其核苷酸序列為seq?id?no：25所示，在第94位堿基型為c和第670位堿基型為t，則判定該物種為蒙古黃芪。
28、進一步的，如上所述的方法，pcr擴增體系包括如下：taq?dna聚合酶18μl，dna模板2μl，10umo1/l的上、下游引物各1.2μl，加ddh2o至40μl。
29、進一步的，如上所述的方法，pcr反應條件參數包括如下：95℃預變性3min；95℃變性15s，54℃-62℃退火15s、72℃延伸30s，共35個循環、72℃延伸10min；4℃保存。
30、本專利技術的另一目的是提供一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的引物組包括：如seq?id?no：1和seq?id?no：2所示引物對，擴增its2序列片段，如seq?id?no：3和seq?id?no：4所示引物對，擴增psba-trnh序列片段。
31、本專利技術的另一目的是提供一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的引物組包括：如seq?id?no：5和seq?id?no：6所示引物對，擴增rbcl序列片段，如seq?id?no：3和seq?id?no：4所示引物對，擴增psba-trnh序列片段。
32、本專利技術的另一目的是提供一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的引物組包括：如seq?id?no：7和seq?id?no：8所示引物對，擴增matk序列片段，如seq?id?no：3和seq?id?no：4所示引物對，擴增psba-trnh序列片段。
33、以上4種引物組能夠鑒別的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪。
34、本專利技術的另一目的是提供一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的試劑盒包括如上任一項所述的引物組。
35、本專利技術的另一目的是提供如上任一項所述的引物組在用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的應用，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的方法，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，其特征在于，步驟如下：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：PCR擴增體系：Taq?DNA聚合酶18μL，DNA模板2μL，10umo1/L的上、下游引物各1.2μL，加ddH2O至40μL。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：PCR反應條件參數：95℃預變性3min；95℃變性15s，54℃-62℃退火15s、72℃延伸30s，共35個循環、72℃延伸10min；4℃保存。
4.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，其特征在于：所述的引物組包括：如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示引物對，擴增ITS2序列片段，如SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示引物對，擴增psbA-trnH序列片段。
5.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物
6.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，其特征在于：所述的引物組包括：如SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8所示引物對，擴增matk序列片段，如SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示引物對，擴增psbA-trnH序列片段。
7.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的試劑盒包括如權利要求4-6任一項所述的引物組。
8.如權利要求4-6任一項所述的引物組在用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的應用，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪。
...【技術特征摘要】
1.一種鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的方法，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，其特征在于，步驟如下：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：pcr擴增體系：taq?dna聚合酶18μl，dna模板2μl，10umo1/l的上、下游引物各1.2μl，加ddh2o至40μl。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：pcr反應條件參數：95℃預變性3min；95℃變性15s，54℃-62℃退火15s、72℃延伸30s，共35個循環、72℃延伸10min；4℃保存。
4.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物種的引物組，所述的黃芪屬為草木樨狀黃芪、達烏里黃芪、蒙古黃芪、斜莖黃芪，所述的巖黃芪屬為山巖黃芪、華北巖黃芪，其特征在于：所述的引物組包括：如seq?id?no：1和seq?id?no：2所示引物對，擴增its2序列片段，如seq?id?no：3和seq?id?no：4所示引物對，擴增psba-trnh序列片段。
5.一種用于鑒定黃芪屬和巖黃芪屬內不同植物物...
【專利技術屬性】
技術研發人員：殷秀杰，趙思文，聶婉婷，艾雨亭，姜婧雯，吳禹辰，楊明浩，龍羲，王孜成，穆美琪，王召明，鄭麗娜，王明玖，崔國文，
申請(專利權)人：東北農業大學，
類型：發明
國別省市：
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