【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于跨膜遞送，具體涉及一種促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片及其制備方法和應用。
技術(shù)介紹
1、
2、許多生物技術(shù)和生物醫(yī)學應用依賴于工程細胞，這需要在體外或離體細胞中遞送大分子，例如dna、rna或蛋白質(zhì)，近些年來這類技術(shù)手段被廣泛用于各種生物研究和臨床應用的探索中并在癌癥診斷和治療中發(fā)揮重要作用，其中，安全高效的細胞轉(zhuǎn)染手段尤為重要。傳統(tǒng)的細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)包括利用脂質(zhì)體或聚合物納米顆粒誘導細胞膜穿孔以及內(nèi)吞作用，多肽介導細胞膜滲透完成給藥等，這些方法一定程度上受限于細胞類型和目標分子的結(jié)構(gòu)，并且轉(zhuǎn)染效率較低。病毒轉(zhuǎn)染需要特異性結(jié)合，無法實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染的通用性，并且存在化學成分殘留等問題，存在安全隱患。電穿孔技術(shù)通過電流破膜可以實現(xiàn)高效的目標轉(zhuǎn)染，然而其對細胞存在不可逆損傷。顯微注射轉(zhuǎn)染技術(shù)效率較低，無法實現(xiàn)批量細胞的高效轉(zhuǎn)染。因此，研究一種具有廣泛通用性、高效率、低損傷、低化學成分殘留、易于操作、可控性強的細胞轉(zhuǎn)染方法具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)提供一種促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片及其制備方法和應用，具有時間短、效率高、低損傷、易于操作和可控性強的特點，可用于制備癌癥標志物篩查器件，可將檢測探針遞送至胞內(nèi)，實現(xiàn)細胞內(nèi)癌癥靶標的準確檢測。
2、為了達到上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：一種促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，包括以下步驟：
3、(1)制備
4、(2)對基片表面進行氨基化改性，得氨基功能化基片；
5、(3)將金納米棒制成懸液，并用懸液對氨基功能化基片進行浸泡，然后取出，晾干，即得。
6、進一步，步驟(3)中氨基功能化基片在懸液中的浸泡時間為1h～2h。
7、進一步，基片上修飾的金納米棒的長徑比為1.0～8.0。
8、進一步，基片表面的金納米棒單層無序分布。
9、本專利技術(shù)采取上述進一步技術(shù)方案的有益效果是：金納米棒有著獨特的光學性質(zhì)，即棒狀粒子具有橫向和縱向表面等離子體共振(surface?plasmon?resonance，spr)峰，且spr峰位取決于棒狀粒子的長徑比；將基片氨基化便于金納米棒修飾在基片上，金納米棒在基片表面單層無序分布有利于光熱效應的高效發(fā)揮。
10、進一步，采用上述制備方法制備的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片。
11、進一步，促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片在制備胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件中的應用。
12、本專利技術(shù)采取上述進一步技術(shù)方案的有益效果是：制備的胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件可將檢測物質(zhì)遞送至細胞內(nèi)，通用性強、對待測細胞損害低，可實現(xiàn)胞內(nèi)靶標高效安全的檢測。
13、進一步，胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件為mirna細胞傳感器，mirna細胞傳感器包括促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片、近紅外激光器和dna熒光探針。
14、本專利技術(shù)采取上述進一步技術(shù)方案的有益效果是：有些癌癥在早期發(fā)展緩慢，并沒有形成典型的病理形態(tài)結(jié)構(gòu)，但實際上細胞內(nèi)部已經(jīng)發(fā)生了不同于正常細胞的變化，開發(fā)能夠根據(jù)癌細胞和正常細胞在細胞水平上的特異性差異準確區(qū)分它們的技術(shù)，對于癌癥的準確診斷和后期的對癥治療非常有價值，各種mirna在多種腫瘤中都存在差異表達的情況，可作為有效的腫瘤標志物，采用此mirna細胞傳感器可對胞內(nèi)mirna進行安全高效的檢測。
15、進一步，用mirna細胞傳感器篩查胞內(nèi)癌癥標志物包括以下步驟：將金納米棒修飾基片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞培養(yǎng)在金納米棒修飾基片上，然后加入dna熒光探針，再用激光輻射金納米棒修飾基片即可。
16、進一步，激光的功率不超過3w，激光的光照時間不超過15min。
17、進一步，dna熒光探針包括1～10條dna鏈，單條dna鏈包括1～100個核苷酸。
18、本專利技術(shù)采取上述進一步技術(shù)方案的有益效果是：金納米棒可以與激光產(chǎn)生lspr共振，具有一定的光穿孔能力。通過近紅外激光器照射，在短時間內(nèi)產(chǎn)生的光熱效應會短暫破壞細胞膜的流動性并在細胞膜上產(chǎn)生孔隙，dna熒光探針可通過孔隙進入細胞，當停止激光照射一段時間后，細胞膜又會自動修復。控制激光的功率和光照時間，可以將dna熒光探針安全有效的遞送到細胞內(nèi)。
19、本專利技術(shù)的有益效果是：利用金納米棒的lspr特性，通過激光的照射，使金納米棒產(chǎn)生熱量，光熱效應會暫時破壞細胞膜的流動性，當停止激光照射一段時間后，細胞膜又會自動修復，這是一種非常有前景的物理轉(zhuǎn)染方式，具有效率高、時間短、安全性強、靈活性高等特點，可應用于胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件中，對早期癌癥標志物的篩查具有重要意義。
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1.一種促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述氨基功能化基片在所述懸液中的浸泡時間為1h～2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：基片上修飾的金納米棒的長徑比為1.0～8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：基片表面的金納米棒單層無序分布。
5.權(quán)利要求1～4任一項所述的制備方法制備的促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片。
6.權(quán)利要求5所述的促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片在制備胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件中的應用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于：所述胞內(nèi)癌癥標志物篩查器件為miRNA細胞傳感器，所述miRNA細胞傳感器包括所述促進DNA熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片、近紅外激光器和DNA熒光探針。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述氨基功能化基片在所述懸液中的浸泡時間為1h～2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：基片上修飾的金納米棒的長徑比為1.0～8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片的制備方法，其特征在于：基片表面的金納米棒單層無序分布。
5.權(quán)利要求1～4任一項所述的制備方法制備的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片。
6.權(quán)利要求5所述的促進dna熒光探針跨膜轉(zhuǎn)運的金納米棒修飾基片在制備胞內(nèi)癌...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：羅澤偉，馮燕婷，李玉，盧斌斌，
申請(專利權(quán))人：四川大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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