【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及魚類生殖干細胞的培養方法等。更詳細地指出本專利技術涉及一種在無血清以及無飼養層培養(feeder-free)條件下的魚類生殖干細胞的培養方法等。
技術介紹
1、伴隨著世界人口增加的加速，可預見將來嚴重的食品不足。作為用于解決該問題的一個途徑，近年來，魚貝類資源的高效生產以及管理手段的構建引發關注。
2、作為可進行魚貝類資源的高效生產的手段之一，可舉出短期成長的品種、對疾病具有強抵抗性的品種的育種。
3、為了能夠更高效地進行這樣優選的魚貝類品種的育種，使用在動物領域運用的基因改造技術的途徑是一個辦法(非專利文獻1)，但為了進行該途徑，必須要有將魚貝類的生殖干細胞大量且穩定地維持以及使之增殖的技術。
4、然而，現狀是相較于動物的領域，在魚貝類的領域中使生殖干細胞大量且穩定地增殖的技術尚未被充分建立。
5、現有技術文獻
6、非專利文獻
7、非專利文獻1：yoshiko?iwasaki-takahashi?et?al.communbiol.2020jun?15；3(1):308.
技術實現思路
1、專利技術要解決的問題
2、鑒于上述的情況，本專利技術以提供一種用于大量且穩定地培養魚類生殖干細胞的新型方法作為課題。
3、用以解決課題的手段
4、本專利技術人針對上述問題深入研究結果發現，在含有特定的8種成分的培養基中，在涂布了玻連蛋白(vitronectin)的面上培養魚類
5、即，本專利技術如下所述。
6、[1]一種魚類生殖干細胞的培養方法，包括在含有以下的8種成分的培養基中，在涂布了玻連蛋白的面上培養魚類生殖干細胞的工序：
7、(1)胰島素、
8、(2)硒、
9、(3)轉鐵蛋白(transferrin)、
10、(4)l-抗壞血酸、
11、(5)fgf2、
12、(6)tgfβ、
13、(7)nahco3或khco3、
14、(8)l-谷氨酰胺。
15、[2]根據[1]所述的方法，培養基為無血清培養基。
16、[3]根據[1]或[2]所述的方法，其是在無飼養層條件下進行。
17、[4]根據[1]～[3]中任一項所述的方法，包括在傳代時以0.5×105～6.5×105細胞/cm2進行再次接種的工序。
18、[5]一種用于培養魚類生殖干細胞的試劑盒，包含玻連蛋白以及以下的8種成分：
19、(1)胰島素、
20、(2)硒、
21、(3)轉鐵蛋白、
22、(4)l-抗壞血酸、
23、(5)fgf2、
24、(6)tgfβ、
25、(7)nahco3或khco3、
26、(8)l-谷氨酰胺。
27、[6]根據[5]所述的試劑盒，進一步包含基礎培養基。
28、[7]根據[5]或[6]所述的試劑盒，(7)為khco3時，進一步包含氯化鈉。
29、專利技術的效果
30、根據本專利技術，能夠在無血清以及無飼養層條件下，使魚類生殖干細胞仍以良好地維持其干細胞性的狀態極其高效地增殖。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種魚類生殖干細胞的培養方法，包括在含有以下的8種成分的培養基中，在涂布了玻連蛋白的面上培養魚類生殖干細胞的工序：
2.根據權利要求1所述的方法，培養基為無血清培養基。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其是在無飼養層條件下進行。
4.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，包括在傳代時以0.5×105～6.5×105細胞/cm2進行再次接種的工序。
5.一種用于培養魚類生殖干細胞的試劑盒，包含玻連蛋白以及以下的8種成分：
6.根據權利要求5所述的試劑盒，進一步包含基礎培養基。
7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，(7)為KHCO3時，進一步包含氯化鈉。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種魚類生殖干細胞的培養方法，包括在含有以下的8種成分的培養基中，在涂布了玻連蛋白的面上培養魚類生殖干細胞的工序：
2.根據權利要求1所述的方法，培養基為無血清培養基。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其是在無飼養層條件下進行。
4.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，包括...
【專利技術屬性】
技術研發人員：塔帕斯·查克拉博蒂，太田耕平，松山倫也，錫普拉·莫哈帕特拉，八尋逸清，水村航大，長野直樹，
申請(專利權)人：國立大學法人九州大學，
類型：發明
國別省市：
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