【技術實現步驟摘要】
技術介紹
1、流行病學研究表明，西方飲食是現代肥胖流行的主要原因之一。與使用濃縮軟飲料和加工食品相關的果糖攝取提高被認為是導致該流行病的主要因素。到1967年，高果糖玉米甜味劑開始在食品工業中獲得廣泛使用。盡管葡萄糖和果糖具有每分子相同的熱值，但這兩種糖被不同地代謝，并利用不同的glut轉運體。果糖幾乎完全在肝臟中代謝，并且與葡萄糖代謝途徑不同，果糖代謝途徑不受產物反饋抑制的調節(khaitan?z?et?al.、(2013)j.nutr.metab.2013、article?id?682673、1-12)。盡管己糖激酶和磷酸果糖激酶(pfk)調節從葡萄糖產生甘油醛-3-p，果糖激酶或己酮糖激酶(khk)負責將果糖在肝臟中磷酸化為果糖-1-磷酸，但其不被增加的果糖-1-磷酸濃度下調。因此，所有進入細胞的果糖都被迅速磷酸化。(cirillo?p.et?al.,(2009)j.am.soc.nephrol.20:545-553)。持續利用atp將果糖磷酸化為果糖-1-磷酸導致細胞內磷酸消耗、atp消耗、amp脫氨酶激活和尿酸形成(khaitanz.et?al.、(2013)j.nutr.metab.article?id?682673、1-12)。尿酸的增加進一步刺激了khk的上調(lanaspa?m.a.et?al.、(2012)plos?one?7(10):1-11)，并導致內皮細胞和脂肪細胞功能障礙。果糖-1-磷酸隨后在醛縮酶b的作用下轉化為甘油醛，并被磷酸化為甘油醛-3-磷酸。后者向下游進入糖酵解途徑以形成丙酮酸，其進入檸檬
2、khk對果糖的磷酸化以及隨后對脂肪生成的激活導致例如脂肪肝、高甘油三酯血癥、血脂異常和胰島素抵抗。近腎小管細胞的促炎性變化也已顯示是由khk活性誘導(cirillo?p.et?al.、(2009)j.am.soc.nephrol.20:545-553)。khk對果糖的磷酸化與疾病、障礙或狀況有關，例如肝病(例如脂肪肝、脂肪性肝炎)、血脂異常(例如高脂血癥、高ldl膽固醇、低hdl膽固醇、高甘油三酯血癥、餐后高甘油三酯血癥)、血糖控制障礙(例如胰島素抵抗、2型糖尿病)、心血管疾病(例如高血壓、內皮細胞功能障礙)、腎病(例如急性腎臟失調、腎小管功能障礙、近腎小管的促炎性變化、慢性腎臟疾病)、代謝綜合征、脂肪細胞功能障礙、內臟脂肪沉積、肥胖、高尿酸血癥、痛風、進食障礙和過度糖渴望。因此，本領域需要用于治療與khk活性相關的疾病、障礙和狀況的組合物和方法。
技術實現思路
1、本專利技術提供了包含靶向己酮糖激酶(khk)的rnai試劑(例如雙鏈rnai試劑)的組合物。本專利技術還提供了使用本專利技術組合物抑制khk表達或治療患有受益于降低khk基因表達的障礙的受試者的方法，例如khk相關疾病，例如肝病(例如脂肪肝、脂肪性肝炎，特別是非酒精脂肪性肝炎(nash))、血脂異常(例如高脂血癥、高ldl膽固醇、低hdl膽固醇、高甘油三酯血癥、餐后高甘油三酯血癥)、血糖控制障礙(例如胰島素抵抗、2型糖尿病)、心血管疾病(例如高血壓、內皮細胞功能障礙)、腎病(例如急性腎臟失調、腎小管功能障礙、近腎小管的促炎性變化、慢性腎臟疾病)、代謝綜合征、脂肪細胞功能障礙、內臟脂肪沉積、肥胖、高尿酸血癥、痛風、進食障礙和過度糖渴望。
2、在一個方面，本專利技術提供了用于抑制己酮糖激酶(khk)表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna試劑包含有義鏈和反義鏈，其中所述有義鏈包含與seq?idno:1的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含與seq?id?no:2的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
3、在某些實施方式中，所述有義鏈包含與seq?id?no:1的核苷酸89-107、176-194、264-282、474-492、508-526、529-547、562-580、616-646、682-700、705-723、705-757、705-799、739-757、739-799、760-799、804-822、837-855、892-910、959-977、992-1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。在某些實施方式中，所述有義鏈包含seq?id?no:1的核苷酸序列的至少15個連續核苷酸，或者seq?idno:1的核苷酸序列的前述部分之一。
4、在某些實施方式中，所述有義鏈和反義鏈包含選自表3或5中任一核苷酸序列的核苷酸序列。
5、在某些實施方式中，所述有義鏈或所述反義鏈包含選自表3或5提供的ad-72506、ad-72319、ad-72502、ad-72513、ad-72499、ad-72303、ad-72500、ad-72522、ad-72512、ad-72304、ad-72514、ad-72257、ad-72295、ad-72332、ad-72507、ad-72311、ad-72501、ad-72508、ad-72293、ad-72322、ad-72264、ad-72290、ad-72338、ad-72315、ad-72272、ad-72337、ad-72298、ad-72503、ad-72327、ad-72521、ad-72309、ad-72313、ad-72517、ad-72316、ad-72335、ad-72317的雙鏈體中任一者中的核苷酸序列中任一者。在某些實施方式中，所述有義鏈和所述反義鏈包含選自表3或5提供的ad-72506、ad-72319、ad-72502、ad-72513、ad-72499、ad-72303、ad-72500、ad-72522、ad-72512、ad-72304、ad-72514、ad-72257、ad-72295、ad-72332、ad-72507、ad-72311、ad-72501、ad-72508、ad-72293、ad-72322、ad-72264、ad-72290、ad-72338、ad-72315、ad-72272、ad-72337、ad-72298、ad-72503、ad-72327、ad-72521、ad-72309、ad-72313、ad-72517、ad-72316、ad-72335、或ad-72317的雙鏈體中任一者的核苷酸序列。
6、在一個方面，本專利技術提供了用于抑制己酮糖激酶(khk)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna包含有義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含互補區域，所述互補區域包含與表3或5中列出的反義序列中任一者相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。在某些實施方式中，所述dsrna包含有義本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)試劑，其中所述dsRNA試劑包含有義鏈和反義鏈，其中所述有義鏈包含與SEQ?ID?NO:1的核苷酸89-107、176-194、264-282、474-492、508-526、529-547、562-580、616-646、682-700、705-723、705-757、705-799、739-757、739-799、760-799、804-822、837-855、892-910、959-977、992-1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含與SEQ?ID?NO:2的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
2.一種用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)試劑，其中所述dsRNA試劑包含有義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含互補區域，所述互
3.根據權利要求2所述的dsRNA試劑，其中所述反義鏈包含與選自AD-72506、AD-72319、AD-72502、AD-72513、AD-72499、AD-72303、AD-72500、AD-72522、AD-72512、AD-72304、AD-72514、AD-72257、AD-72295、AD-72332、AD-72507、AD-72311、AD-72501、AD-72508、AD-72293、AD-72322、AD-72264、AD-72290、AD-72338、AD-72315、AD-72272、AD-72337、AD-72298、AD-72503、AD-72327、AD-72521、AD-72309、AD-72313、AD-72517、AD-72316、AD-72335、或AD-72317的雙鏈體中的反義序列中任一者相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的dsRNA試劑，其中所述有義鏈和反義鏈包含選自表3或5中的序列中任一者的序列。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA包含至少一個修飾的核苷酸。
6.根據權利要求1-4中任一項所述的dsRNA試劑，其中所述有義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
7.一種用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)試劑，其中所述dsRNA試劑包含形成雙鏈區域的有義鏈和反義鏈，
8.根據權利要求7所述的dsRNA試劑，其中所述有義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
9.根據權利要求7所述的dsRNA試劑，其中所述修飾的核苷酸中的至少一個選自脫氧-核苷酸、3’端脫氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構象限制的核苷酸、約束乙基核苷酸、無堿基核苷酸、2’-氨基修飾的核苷酸、2’-O-烯丙基修飾的核苷酸、2’-C-烷基修飾的核苷酸、2’-羥基修飾的核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2’-O-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然堿基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾的核苷酸、環己烯基修飾的核苷酸、包含硫代磷酸酯基的核苷酸、包含甲基膦酸酯基的核苷酸、包含5’-磷酸酯的核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物的核苷酸。
10.根據權利要求9所述的dsRNA試劑，其中所述修飾的核苷酸包含3’端脫氧-胸腺嘧啶核苷酸(dT)的短序列。
11.根據權利要求2或3所述的dsRNA試劑，其中所述互補區域的長度是至少17個核苷酸。
12.根據權利要求2或3所述的dsRNA試劑，其中所述互補區域的長度是19-21個核苷酸。
13.根據權利要求12所述的dsRNA試劑，其中所述互補區域的長度是19個核苷酸。
14.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsRNA試劑，其中每條鏈的長度不超過30個核苷酸。
15.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsRNA試劑，其中至少一條鏈包含具有至少1個核苷酸的3’突出端。
16.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsRNA試劑，其中至少一條鏈包含具有至少2個核苷酸的3’突出端。
17.根據權...
【技術特征摘要】
1.一種用于抑制己酮糖激酶(khk)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna試劑包含有義鏈和反義鏈，其中所述有義鏈包含與seq?id?no:1的核苷酸89-107、176-194、264-282、474-492、508-526、529-547、562-580、616-646、682-700、705-723、705-757、705-799、739-757、739-799、760-799、804-822、837-855、892-910、959-977、992-1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含與seq?id?no:2的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
2.一種用于抑制己酮糖激酶(khk)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna試劑包含有義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含互補區域，所述互補區域包含與表3或5中列出的反義序列中任一者相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
3.根據權利要求2所述的dsrna試劑，其中所述反義鏈包含與選自ad-72506、ad-72319、ad-72502、ad-72513、ad-72499、ad-72303、ad-72500、ad-72522、ad-72512、ad-72304、ad-72514、ad-72257、ad-72295、ad-72332、ad-72507、ad-72311、ad-72501、ad-72508、ad-72293、ad-72322、ad-72264、ad-72290、ad-72338、ad-72315、ad-72272、ad-72337、ad-72298、ad-72503、ad-72327、ad-72521、ad-72309、ad-72313、ad-72517、ad-72316、ad-72335、或ad-72317的雙鏈體中的反義序列中任一者相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的dsrna試劑，其中所述有義鏈和反義鏈包含選自表3或5中的序列中任一者的序列。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的dsrna試劑，其中所述dsrna包含至少一個修飾的核苷酸。
6.根據權利要求1-4中任一項所述的dsrna試劑，其中所述有義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
7.一種用于抑制己酮糖激酶(khk)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna試劑包含形成雙鏈區域的有義鏈和反義鏈，
8.根據權利要求7所述的dsrna試劑，其中所述有義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
9.根據權利要求7所述的dsrna試劑，其中所述修飾的核苷酸中的至少一個選自脫氧-核苷酸、3’端脫氧-胸腺嘧啶(dt)核苷酸、2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構象限制的核苷酸、約束乙基核苷酸、無堿基核苷酸、2’-氨基修飾的核苷酸、2’-o-烯丙基修飾的核苷酸、2’-c-烷基修飾的核苷酸、2’-羥基修飾的核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2’-o-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然堿基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾的核苷酸、環己烯基修飾的核苷酸、包含硫代磷酸酯基的核苷酸、包含甲基膦酸酯基的核苷酸、包含5’-磷酸酯的核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物的核苷酸。
10.根據權利要求9所述的dsrna試劑，其中所述修飾的核苷酸包含3’端脫氧-胸腺嘧啶核苷酸(dt)的短序列。
11.根據權利要求2或3所述的dsrna試劑，其中所述互補區域的長度是至少17個核苷酸。
12.根據權利要求2或3所述的dsrna試劑，其中所述互補區域的長度是19-21個核苷酸。
13.根據權利要求12所述的dsrna試劑，其中所述互補區域的長度是19個核苷酸。
14.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsrna試劑，其中每條鏈的長度不超過30個核苷酸。
15.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsrna試劑，其中至少一條鏈包含具有至少1個核苷酸的3’突出端。
16.根據權利要求1-3和7中任一項所述的dsrna試劑，其中至少一條鏈包含具有至少2個核苷酸的3’突出端。
17.根據權利要求1-3中任一項所述的dsrna試劑，其進一步包含配體。
18.根據權利要求17所述的dsrna試劑，其中所述配體與所述dsrna試劑的有義鏈的3’端綴合。
19.根據權利要求7或17所述的dsrna試劑，其中所述配體是n-乙酰基半乳糖胺(galnac)衍生物。
20.根據權利要求19所述的dsrna試劑，其中所述配體為
21.根據權利要求19所述的dsrna試劑，其中所述dsrna試劑如以下示意圖所示與所述配體綴合
22.根據權利要求21所述的dsrna試劑，其中x是o。
23.根據權利要求2或3所述的dsrna試劑，其中所述互補區域包含表3或5的反義序列之一。
24.根據權利要求2或3所述的dsrna試劑，其中所述互補區域由表3或5的反義序列之一組成。
25.一種用于抑制細胞中己酮糖激酶(khk)基因表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)試劑，其中所述dsrna試劑包含有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含與編碼khk的mrna互補的區域，其中每條鏈的長度是約14至約30個核苷酸，其中所述dsrna試劑由式(iii)表示：
26.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中i為0；j為0；i為1；j為1；i和j兩者為0；或者i和j兩者為1。
27.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中k為0；l為0；k為1；l為1；k和l兩者為0；或者k和l兩者為1。
28.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中xxx與x’x’x’互補，yyy與y’y’y’互補，且zzz與z’z’z’互補。
29.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中yyy基序出現在所述有義鏈的切割位點處或附近。
30.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中y’y’y’基序出現在所述反義鏈從5’端開始的第11、12和13位。
31.根據權利要求30所述的dsrna試劑，其中y’是2’-o-甲基。
32.根據權利要求29所述的dsrna試劑，其中式(iii)由式(iiia)表示：
33.根據權利要求29所述的dsrna試劑，其中式(iii)由式(iiib)表示：
34.根據權利要求29所述的dsrna試劑，其中式(iii)由式(iiic)表示：
35.根據權利要求29所述的dsrna試劑，其中式(iii)由式(iiid)表示：
36.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是15-30個核苷酸對。
37.根據權利要求36所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是17-23個核苷酸對。
38.根據權利要求36所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是17-25個核苷酸對。
39.根據權利要求36所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是23-27個核苷酸對。
40.根據權利要求36所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是19-21個核苷酸對。
41.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中所述雙鏈區域的長度是21-23個核苷酸對。
42.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中每條鏈的長度是15-30個核苷酸。
43.根據權利要求7、25和35中任一項所述的dsrna試劑，其中每條鏈的長度是19-30個核苷酸。
44.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中在核苷酸上的修飾選自lna、hna、cena、2’-甲氧基乙基、2’-o-烷基、2’-o-烯丙基、2’-c-烯丙基、2’-氟、2’-脫氧、2’羥基及其組合。
45.根據權利要求44所述的dsrna試劑，其中在核苷酸上的修飾為2’-o-甲基或2’-氟修飾。
46.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中所述配體是通過單價、二價或三價分支接頭連接的一個或多個galnac衍生物。
47.根據權利要求25所述的dsrna試劑，所述配體為
48.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中所述配體連接至所述有義鏈的3’端。
49.根據權利要求48所述的dsrna試劑，其中所述rnai試劑如以下示意圖所示與所述配體綴合
50.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中所述試劑進一步包含至少一個硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間連接。
51.根據權利要求50所述的dsrna試劑，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間連接位于一條鏈的3’端。
52.根據權利要求51所述的dsrna試劑，其中所述鏈是反義鏈。
53.根據權利要求51所述的dsrna試劑，其中所述鏈是有義鏈。
54.根據權利要求50所述的dsrna試劑，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間連接位于一條鏈的5’端。
55.根據權利要求54所述的dsrna試劑，其中所述鏈是反義鏈。
56.根據權利要求54所述的dsrna試劑，其中所述鏈是有義鏈。
57.根據權利要求50所述的dsrna試劑，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間連接位于一條鏈的5’和3’端兩者。
58.根據權利要求57所述的dsrna試劑，其中所述鏈是反義鏈。
59.根據權利要求7或25所述的dsrna試劑，其中位于所述雙鏈體的反義鏈的5’端的第1位的堿基對是au堿基對。
60.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中y核苷酸包含2’-氟修飾。
61.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中y’核苷酸包含2’-o-甲基修飾。
62.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中p’>0。
63.根據權利要求25所述的dsrna試劑，其中p’＝2。
64.根據權利要求63所述的dsrna試劑，其中q’＝0、p＝0、q＝0且p’突出端核苷酸與靶mrna互補。
65.根據權利要求63所述的dsrna試劑，其中q’＝0、p＝0...
【專利技術屬性】
技術研發人員：G·辛克爾，
申請(專利權)人：阿爾尼拉姆醫藥品有限公司，
類型：發明
國別省市：
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